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人参皂苷ro的制备及含量测定46specialwildeconomicanimalandplantkesearch特产研究文章编号:1001-4721(2010)01-0046-03人参皂苷ho的制备及含量测定刘宏群,刘继永,郑培和,王英平(中国农业科学院特产研究所,吉林吉林132109)摘要:建立快速制备人参皂苷io的方法,并对人参的不同种类,不同部位,不同组织及鲜人参储藏过程巾人参皂苷ro的含量变化进行测定.采用dioi大孑l吸附树脂柱,巾压柱层析等方法分离制备人参皂苷ro,hplc法测定人参皂苷ro的含量,lc/ms分析结果.中压柱层析法制备人参皂苷ro效果好,简单快速.人参皂苷r0的含量差异为:生晒参>鲜人参>蜜制参>红参;芦头>支须>主根>毛须;表皮>韧皮部>小质部;随储藏期的延长人参皂苷ro含悬减少.关键词:人参皂苷ro;中压柱层析;分离制备;含测定中图分类号:q946.83;tq460.7+2文献标识码:apreparationandcontentdeterminationofginsenoside-roliuhongqun,liujiyong,zhengpei-he,.wangying-ping(instituteofspecialwildeconomicanimalsandplants,caas,jilin132109,china)abstract:establisharapidpreparationmethodforginsenosideroanddifferenttypes,differentparts,differenttissuesofginseng,aswellasdetermineginsenosiderocontentchangeintheprocessofstorageoffleshginseng.usingdioimacroporousresiucolumn,mediumpressurecolumnchromatographymethodstoseparateandprepareginsenosidero,usinghplcmethodtodeterminatethecontentofgin一nosidero,usinglc/mstoanalyzetheresults.fhepreparationofginsenosiderowithmedium-pressucohlmuchromatographywasef-fective.simpleandfast.thedifferenceofginsenosiderncontentwas:sundriedginseng>freshginseng>candiedginseng>redginseng;rhizoma>branchfibrousroot>mainroot>hairfibrousroot;epidermis>phloem>xylem;withtheextensionofstorageperiod.gin一nosiderncontentdecreases.keywords:ginsenosidero;medium-pressurecohnmwhrmnatography;separateandpreparate;contentdetermination人参(panaxginsengc.a.meyer)为五加科人参属植物,具有大补元气,复脉脱,补脾益肺,生津,安神等作用f1i.现代药物学研究证明,人参皂苷(ginsenoside)是人参中重要的活性物质,人参皂苷含量的多少是评价人参内在质量的重要指标之一.本文以齐墩果酸犁人参皂苷rn为研究对象,建立了快速制备人参皂苷r0的方法,并对人参的不同种类,不同部位,不同组织及鲜人参储藏过程中人参皂苷rn含量的动态变化进行了研究.人参皂苷ro为齐墩果酸型人参皂苷,在水中有较收稿日期:200912-21基金项目:国家科技支撑计;1|(2007bai38b03);特色红参加tt艺父键技术及系列?l丌发(20096040);吉林省现代农业产业技术体系建设.作者简介:刘宏群(1984一),女,内蒙古呼伦贝尔盟人,往渎硕士,从事药用植物资源学研究,email:.通讯作者:土英平(1967一),e-mail:yingpingw126.coin.第l期刘宏群,等:人参皂骨1o的制备及含节测定47大的溶解度,几乎不溶于氯仿,乙醚等有机溶剂中.人参皂苷r0对中枢神经有一定安定作用,具有可促进纤维蛋白溶解系统活化等药理活性,但目前圈内有关人参皂苷rr,的相关方面的报道较少,本试验从制备和含量测定两个方面进行了研究.1仪器与材料1.1实验仪器1200seriees型高效液相色谱仪(dad柃测器,美圉安捷伦);6310iontraplc/ms(美圉安捷伦);sk8200h超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司);瑞士buchi不锈钢中压色谱柱(柱长450ram,内径25mm);cpa2250d电子天平(德国sartorius);dhg一9145a电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司).1.2试剂merckrpcd101大孑l吸附树脂(天津南开大学化厂);甲醇,乙腈(色谱纯,天津协和吴鹏色谱科技有限公司);其它所用试剂均为h产分析纯.1.3标准品,材料标准品:人参皂背rr,标准品为自制.植物材料:鲜人参于2009年9月采向吉林抚松,经南中尉农业科学院特产研究所刘兴权老师鉴定为原植物样品;生晒参,红参,蜜制参南吉林省特研提取物工程中心加丁制备.2方法2.1人参皂苷ro的制备取鲜人参5kg,洗净切片,超声波提取(甲醇)3次,30mird次,合并滤液浓缩得人参浸膏.浸膏水溶后用饱和正丁醇萃取3次,合并水相,上dioi大孔吸附树脂柱,分别用水,60%甲醇,甲醇洗脱,取60%甲醇洗脱组分进行反相中压柱层析分离.反相中压柱层析洗脱条件:50%甲醇恒流洗脱,得到人参皂苷rn.2.2色谱分析条件色谱柱:hypersilods2(4.6mmx250mm,5m);流动相为:a:ph9的醋酸铵一氨水混合液;b:乙腈.梯度模式:恒流洗脱,时问为llmin,洗脱剂浓度为26%乙腈;流速为1.0ml/min,榆测波长为20311111.柱温为25,进样体积为】0l.2.3方法学考察2.3.1线性关系确定精密称取人参皂苷ro纯品l0mg,置于10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀配制成1.0mg/ml的溶液.精密吸取对照品溶液2.5l,5l,10l,20l,40l,沣入液相色谱仪.按上述色谱条件洲定,以面积积分值为纵坐标,人参皂苷rn含量为横坐标,绘制标准曲线.2.3.2重复性实验精密吸取同一人参处理样品测定液10l进样,按上述色谱条件连续进样测定5次,根据平均值及标准偏差计算出峰面积的相对标准偏差(rsd)值.2.3.3稳定性实验将人参皂苷rn标准品溶液分别于1h,4h,6h,8h,12h,24h按上述色谱条件测定峰面积,通过计算标准品溶液中人参皂苷ro峰面积的rsd来确定方法的稳定性.2.3.4精密度实验精密吸取人参皂苷rn标准品溶液10l进样,按上述色谱条件连续进样测定5次,根据平均值及标准偏差计算出峰面积的相对标准偏差(rsd)值.2.3.5加样回收率试验精密吸取已知人参皂苷ro准确含量的人参提取物为基底,分别加入对照品适量依法测定,计算回收率.3结果与分析,3.1方法学考查结果3.1.1线性关系以峰面积积分值为纵坐标,人参皂苷ro含量为横坐标,绘制标准曲线,得回归力程:y=201.17x+191.92,r=0.9991,线性范同在2.0-40g.3.1.2重复性取同一样品重复进样5次,人参皂苷r0峰面积的rsd为0.56%,表明该方法的重复性较好.3.1.3稳定性将人参皂苷ro标准品溶液分别于1h,4h,6h,8h,12h,24h进样测定峰面积,峰面积的rsd为0.49%,结果表明标准溶液于24h内色谱峰面积无明显变化.3.1.4精密度吸取对照品溶液10l,重复进样5次,测定峰面积积分值,结果rsd为0.3%,表明该力怯有良好的精密度.3.1.5加样回收率精密吸取已知人参皂苷ro准确含量的人参提取物为基底,分别加入对照品适量依法测定,计算平均回收率为92.43%,rsd为1.39%(n=5).表明回收率良好,奉力法可行.通过以上法学考查试验表明,该测定法结果可靠.3-2中压柱层折制备得到人参皂苷ro标准品,经hplc检测其纯度为90.6%.3.3鲜人参及其不同ij.32品种中人参皂苷ro含量比较称取鲜人参,生晒参,红参,蜜制参的粉碎样品各10g(并按含水量折算出干物质的量),设3个重复组,依2.3.1法制得样品溶液后经hpic法分析,结果表明特?研究2010年第1期不同种类人参中人参苷rn含量差异为:鲜人参>乍晒参>蜜制参耋1.参屺表l表1鲜人参及其不同加工品种中人参皂苷iqo含量(%)不同种类人参鲜人参生晒参红参蜜制参均值标准误0.4514f1.0158i).417i0.00970.04090.00160.08490.00293.4人参不同部位中人参皂苷ro含量比较称取鲜人参芦头,毫根吏须.毛须各log(并按含水量折算出f物质的量).设2个重复组.依2.3.1法制得样品溶液后经hpu法分析结果表明,人参不同部位的人参皂苷ro含量差异为芦头>支须>主根>毛须见表2一表2人参不同部位中人参皂苷fio含量(%)人参不同部位芦头主根芰须毛须均值标准误i.25l20.03040.41i70.01020.45320.01680.35590.01233.5人参不同组织中人参皂苷fio含量比较称取鲜人参表皮,韧皮部,木质部各log(并按含水量折算出干物质的量),设2个重复组,依2.3.1法制得样品溶液后经hplc法分析结果表明,不同组织人参皂苷ro含量差异为表皮>韧皮部>木质部见表3表3人参不同组织中人参皂苷fio含量(%)人参不同组织表皮韧皮部木质部均值标准误0.76950.02760.32210.01280.214i0.00573.6鲜人参在不同储藏期人参皂苷fio含量的动态变化取20支鲜人参,采用沙埋法窒温储藏,每隔l0天测1次人参皂苷ro的含量.每次设3个重复组.依2.3.1法制得样品溶液进行hplc法分析.结果表明,随着储藏期的延长人参皂苷ro的含量有所减少见表4表4鲜人参在不同储藏期人参皂苷iqo含量的动态变化(%)储藏期0d10d20d30d40d50d均值标准误0.4580_+0.01180asi30.00420.,i,1780.80ai560.00370.4042_+0.0091039550flc)464讨论4.1采用中压柱色谱技术制备人参皂苷r0,具有分离效果好,分离速度快,上样量大,回收率高,操作下序及劳动强度小等优点.4.2经测定.人参皂苷ro在人参中的含量较高,是人参中主要的皂苷类化合物之一.但目前有关分析人参皂苷的文献中很少将人参皂苷ro作为参考指标,本试验可为其提供参考依据.4.3红参和蜜制参中人参皂苷ro的含量较低.通过lcms分析,红参中人参皂苷ro异构体的含量明显多于生晒参,说明在鲜人参的加_t过程中人参皂苷r0向它的另一个异构体转化,使得人参皂苷r0的含量明显减少.4.4关于人参各部位中总皂苷及单体皂苷含量差异的报道较多13,4t,但人参皂苷ro的含量差异目前未见报道.奉试验通过测定得出人参皂苷r0的含量差异为芦头>支须>主根>毛须;表皮>韧皮部>木质部.4.5鲜人参储藏过程中可能通过呼吸作用和酶的作用,使人参皂苷类成分发生水解.同时淀粉的酶解糖化致使人参绵软不坚,干瘪抽沟,囚此在鲜人参储藏过程中人参皂苷ro的含量有减少的趋势.参考文献f1国家药典委员会.巾国药典一部2000年版m.北京:化学t业出版礼,2000:67.2魂建华,张延强,于淑莲.吉林长白lit人参单体皂苷作用解析j.人参研究,2005.(3):7-l1.i3j鱼红闪,陈琪,金凤燮.不同种类人参及其各部位中皂苷组成和比例的研究jj.食l发酵t业,2002,28(12):24-28.4j土肩祥,吕修梅,张晋秀.人参皂苷含节变化研究概况【j.西北药学杂志,2002,17(5):233235.1llllilllliililililillililiilcllilillliiiliiiill【liliiililiillilliillililliliillliiiililiiij【li【iiiiiiliiillli【上接第37页)施甩疗法以将微生物菌剂激活后施用效果为最好,通过多功能微生物肥料的试验为人参产业的发展提供j新的肥料来源.也为多功能生物肥料在人参卜的应用提供_科学指导参考文献l薛振尔.魏.义莲.庄敬牛竹机肥改对农卜h卜壤结构肢人参质节的影