三棱抗氧化活性成分提取工艺的优化研究

三棱抗氧化活性成分提取工艺的优化研究摘要:目的以三棱为原料，对三棱抗氧化有效成分提取工艺进行优化。方法通过单因素实验和响应面分析法对三棱的提取工艺进行优化（1）考察乙醇体积分数（水、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇）、料液比（10:1、15:1、20:1）、提取时间（0.5h、1h、1.5h、2h）、提取次数（1、2、3次）得到相对最佳提取条件。（2）在单因素试验的基础上，以清除率为指标，采用响应面分析法研究乙醇体积分数、液固比和提取时间对乌梅总黄酮提取率的影响。结果（1）单因素试验中，乙醇体积分数70%，料液比15:1，提取时间1.5h，提取次数2次为相对最佳提取条件。（2）通过响应面分析法得出三棱抗氧化有效成分的最佳提取工艺条件：乙醇体积分数为72.44%，液固比为20:1ml/g，提取时间为1.06h，提取2次。在此条件下三棱清除率为56.59%，与理论值56.59%基本相符。结论通过响应面分析法优化三棱抗氧化有效成分提取工艺条件简单可行，可用于三棱中抗氧化有效成分的提取。关键词：三棱；抗氧化；单因素实验；响应面分析法；提取工艺优化1OptimizationoftheextractionprocessofRhizomasparganiiantioxidativecomponentsAbstract:ObjectiveRhizomasparganiiasrawmaterial,theeffectivecomponentsofRhizomasparganiiantioxidantextractionprocesswasoptimized.Methodssinglefactorexperimentandresponsetooptimizetheextractionprocess.(1)Investigationofethanolconcentration(water,50%ethanol,60%ethanol,70%ethanol,80%ethanol,90%ethanol,95%ethanol),solid-liquidratio(10:1,15:1,20:1),extractiontime(0.5h,1h,1.5h,2h),extractiontimes(1,2,3)toobtainarelativeoptimumextractionconditions.(2)Onthebasisofsingle-factortesttocleartherateindex,usingresponsesurfacemethodologystudyofethanolconcentration,ratioofliquidtosolidandextractiontimeontheextractionrateofebony.Results(1)single-factortest,thevolumefractionof70%ethanol,solid-liquidratio15:1,extractiontime1.5h,extractiontimes2timesforrelativelyoptimumconditions.(2)obtainedbyresponsesurfaceanalysisRhizomasparganiiantioxidantactiveingredientsoptimumextractionconditions:ethanolconcentrationwas72.44%,liquidtosolidratioof20:1ml/g,theextractiontimewas1.06h,extractedtwice.Rhizomasparganiiclearanceratewas56.59%,and56.59%basicallyconsistentwiththetheoreticalvalueinthiscondition.ConclusionOptimizationofRhizomasparganiiresponsesurfaceanalysisantioxidantactiveingredientextractiontechnologyissimpleandfeasible,canbeusedRhizomasparganiiantioxidantextractionofactiveingredients.Keywords:Rhizomasparganii;antioxidant;singlefactor;responsesurfacemethodology;ExtractionProcessOptimization1目录摘要.1前言.11.1自由基的研究.11.2三棱研究概括.22三棱抗氧化活性成分提取工艺研究.32.1材料与仪器.32.2实验方法.32.3结果与分析.52.4讨论.112.5结论.11参考文献.13综述.15致谢.2311前言1.1自由基的研究随着人类社会的发展和生物技术的不断进步,人们对疾病的本质加深了认识。自1956年Harman首次提出自由基衰老学说后,大量研究证明,自由基及其诱导的氧化反应是导致生物衰老和人体多种疾病的主要起因之一1。近年来关于中药抗氧化剂的研究十分引人注目,中草药是继香辛料之后的另一个很有潜力的天然抗氧化剂资源。我国台湾学者对195种中草药的抗氧化性能进行了系统的筛选和评价,发现几乎一半的中草药表现出抗氧化作用。韩国的Kim2等对180种中药的甲醇提取物进行试验,发现其中44种对油酸有强抗氧化能力。郭江宁3从65种中药中筛选高效天然抗氧化剂,发现补骨脂、厚朴等具有较强抗氧化活性。其他还有一些学者对蛋白质水解产物、氨基酸以及美拉德(Malllard)反应产物的抗氧化性能进行了研究后发现它们也具有一定抗氧化性能。此外,一些学者还从细菌和酵母中提取抗氧化剂。中药材富含的黄酮、酚酸类化合物具有明显的抗氧化活性4,临床调查数据显示,中药治疗一些疾病的疗效被认为与其抗氧化活性密切相关5。黄酮类化合物具有消炎、抗癌、抑制微生物、清除自由基的功效,对防治糖尿病,降血压,治疗心血管疾病、降低血液胆固醇及延迟衰老等有明显作用6。中药材中的黄酮化合物是一种天然的抗氧化剂，具有清除自由基的能力，如芹菜提取物具有清除DPPH自由基的作用7；金花茶茶花提取物对羟自由基和超氧阴离子具有清除作用8；银杏叶提取物对清除超氧阴离子和羟自由基有清除作用9-10。随着近20年来抗氧化剂的蓬勃发展,目前已从单纯的合成抗氧化剂和食品氧化剂逐渐发展成为天然抗氧化剂与体内自由基清除剂。因此,对抗氧化剂的要求也越来越高,而各种广泛使用的合成抗氧化剂由于其潜在毒性和致癌作用等逐渐受到人们的排斥,因此从植物中寻找天然、高效、低毒抗氧化剂成为了目前抗氧化剂发展的一个必然趋势,并且从天然植物中寻找体内自由基消除剂也将是现代医药和保健行业的发展趋势。11.2三棱研究概况三棱系黑三棱科植物黑三棱(SparganiumstoloniferumBuch-Ham)削去外皮的干燥块茎,冬季至次年春采挖,除去残茎及须根,洗净削去外皮,晒干。此中药味苦、性平,入肝、脾经。具有破血行气、消积止痛等功能,是活血化瘀的常用中药3。现代医学研究表明,三棱具有多种药理作用和临床应用,本研究主要是对三棱抗氧化方面的作用本研究的目标是通过单因素试验确定各单因素最佳值，再利用响应面分析法优化三棱抗氧化活性成分的提取工艺，选取三棱抗氧化活性成分提取最佳的工艺条件，为三棱药材资源的开发和综合利用提供了研究依据。长期以来,人们为了保鲜和防止氧化,一直使用合成抗氧化剂如:丁基轻基茵香醚(BHA)、二丁基轻基甲醚(BHT)、没食子酸丙酷(PG)及特丁基对苯二酚(TBHQ)等。近年来,人们对于这些人工合成抗氧化剂的安全性问题进行了广泛的研究。世界卫生组织(FAO/WHO)、欧共体儿童保护组织(HACSG)、英国生物工业协会(BIBRA)、日本、美国的政府和组织的研究表明,合成抗氧化剂具有诸多副作用,如对人体的肝、脾、肺均有不利影响,会诱发恶性肿瘤等。所以美国食品药品管理局(FDA)建议在一般认为安全的物质中删去BHT;日本有关卫生部门经研究曾做出禁止使用BHA的结论;对于TBHQ,虽然美国等少数国家批准了它在某些油脂中的使用,但欧盟、日本等国家认为它的毒理试验资料不完善,尚未批准使用。总之,人们对人工合成抗氧化剂存在不安心理。事实也证明,在人们长期食用的食品中,天然抗氧化剂成分的毒性远远低于人工合成的抗氧化剂毒性。因此,近年来从自然界寻求天然抗氧化剂的研究已引起各国科学家的高度重视。三棱系黑三棱科黑三棱属植物黑三棱(SparganiumstoloniferumBuch.-Ham.)的干燥块茎,冬季至次年春采挖,洗净,削去外皮,晾干,以块茎入药。三棱的化学成分复杂,药理作用和临床应用广泛.现代化学和药理研究已部分阐明了化学成分和临床应用之间的联系.例如,三棱总黄酮具有抗血小板聚集、抗血栓、镇痛作用.但是还有很多活性成分未被找到,如抗肿瘤等成分.很多药理研究也仅停留在提取物阶段,因此对其化学成分和药理作用进行深入研究,进一步阐明化学成分和临床应用间的联系,对于指导临床用药和新药开发是非常有必要的.清除DPPH自由基法是一种快速、简便、灵敏的评估植物抗氧化能力的可行方法,被1广泛应用到评价各种天然产物的自由基的清除11。本文以三棱提取物清除DPPH自由基能力为参考指标,通过考察溶剂乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数等因素,通过响应面分析法确定三棱抗氧化物的最佳提取条件,为三棱药材的有效开发和利用提供依据。2三棱抗氧化活性成分提取工艺的研究2.1实验仪器、材料与试剂UV2450紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；HH-4恒温水浴锅（江苏省金坛市杰瑞尔电器有限公司）；FW100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；FA10048B电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。三棱药材购于广东至信中药饮片有限公司、醋三棱（药品生产许可证号：粤20110108。95%乙醇、盐酸、1，1-二苯基-2苦肼基（DPPH）、水为超纯水。2.1.1药材和试剂的处理（1）三棱药材的处理：将药材于40干燥、用粉碎机粉碎过40目筛,贮于干燥器中置暗处保存备用。（2）95%乙醇的处理：将95%乙醇用酒精计分别配置成50%、60%、70%、80%、90%、100%浓度乙醇于容器中保存备用。（3）1，1-二苯基-2苦肼基（DPPH）的处理：0.1mmol/LDPPH溶液的配制：精密称定DPPH3.94mg，加95%乙醇使溶解，并用95%乙醇定容至100ml容量瓶中，置于冰箱，备用。2.2实验方法2.2.1对DPPH自由基的抑制实验分别量取各提取溶剂下的提取液2ml于试管中，分别加入2mlDPPH溶液，摇匀，置于阴暗处反应30min,后在517nm处测定吸光度值，记为Ai；再分别量取2ml提取液，分别加入2ml95%乙醇，摇匀，置暗处30min测吸光度值，记为Aj；再分别量取2ml95%乙醇，分别加入2mlDPPH溶液，摇匀，置暗处30min后测吸光度值，记为A0。1清除率%=1-(Ai-Aj)/A0100%2.2.2单因素实验设计（1）乙醇浓度的影响精密称取1g三棱细粉,分别加入50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%浓度乙醇20ml，回流提取2h，抽滤,后用乙醇溶解定容于100mL容量瓶中摇匀备用。（2）回流提取时间的影响以70%乙醇为提取溶剂,其他条件同（1）,考察不同回流提取时间(0.5h、1h、1.5h、2h)对提取物清除DPPH自由基能力的影响。（3）料液比的影响以1h为超声提取时间,其他条件同（2）,考察不同料液比（l:10、1:15、1:20）对提取物清除DPPH自由基能力的影响。（4）提取次数的影响以1:15为料液比,其他条件同（3）,考察不同超声提取次数（1、2、3）对提取物清除DPPH自由基能力的影响。2.2.3响应面实验设计在单因素实验基础上，固定提取2次，选取乙醇体积分数、液固比、提取时间为响应变量，根据Box-Behnken中心组合设计建立三因素三水平数学模型12，以DPPH清除率为响应值，利用DesignExpert8.05b软件进行数据拟合，试验因素及水平见表1，试验设计见表2。表1响应面实验的因素和水平设计表水平因素A乙醇体积分数/%B液固比/ml/gC提取时间/h-160100.5070151180201.51表2响应面法设计试验号乙醇浓度(%)提取时间(h)料液比（ml/g)清除率（%）160.001.5015.00270.001.0015.00380.001.5015.00470.000.5010.00570.001.0015.00680.001.0020.00760.001.0010.00860.000.5015.00970.001.0015.001070.001.5010.001170.001.0015.001270.001.5020.001380.000.5015.001470.000.5020.001560.001.0020.001670.001.0015.001780.001.0010.002.3实验结果与分析2.3.1单因素实验（1）乙醇浓度的影响不同浓度乙醇对提取物清除DPPH自由基的能力的测定结果如图1所示。1图1乙醇浓度对提取物清除DPPH自由基能力的影响从图1可知,70%乙醇提取物抗氧化能力最强。50%浓度乙醇提取物抗氧化能力低,不适宜用作提取剂。乙醇体积分数大于70%时，清除率会随浓度的增加而下降。所以应该选择乙醇体积分数为70%。根据相似相溶的原理，乙醇体积分数的增大会使溶液黏度增加，从而影响黄酮类化合物的溶出，乙醇体积分数与提取液极性最相似时，能使抗氧化活性成分达到最大值。另外，乙醇体积分数过高，会使一些醇溶性杂质成分溶出增多，导致抗氧化活性物质提取率下降。（2）回流提取时间的影响图2回流提取时间对提取物清除DPPH自由基能力的影响由图2可知，当提取时间在0.5h1h范围内时，清除率随提取时间的增大而上升，提取时间为1h时，提取率最高。之后，清除率随时间增多而稍稍降1低，这可能是随着提取时间增多导致一些杂质溶出从而影响抗氧化活性成分溶出导致，所以本实验选择提取时间为1h。（3）料液比的影响图3料液比对提取物清除DPPH自由基能力的影响由图3可知，当料液比为15:1时，清除率最大，所以选择料液比在15:1为宜。清除率随料液比增大到一定值后呈下降趋势，这可能是随着溶剂体积的增大，其他一些非抗氧化活性物质溶解度也逐渐增大，进而致使清除率的下降。（4）提取次数的影响1图4提取次数影响提取物清除DPPH自由基能力由图4可知，当提取次数为3次时，三棱抗氧化活性物质提取率最高，但第二次第三次清除率相差不到1%，提取次数的增多并不会明显提高清除率，考虑到节省试验时间，所以确定最佳提取次数为2次，不再进行优化。2.3.2响应面实验表3响应面法设计与试验结果试验号乙醇浓度(%)提取时间(h)料液比（ml/g)清除率（%）160.001.5015.0028.65270.001.0015.0045.55380.001.5015.0028.36470.000.5010.0043.98570.001.0015.0053.93680.001.0020.0048.46760.001.0010.0014.06860.000.5015.005.41970.001.0015.0049.221070.001.5010.0015.191170.001.0015.0046.61270.001.5020.0048.71380.000.5015.0044.851470.000.5020.0048.71560.001.0020.0030.291670.001.0015.0052.361780.001.0010.0045.371由表4可知，回归模型的P0.05，差异不显著，表明无失拟因素存在，因此可以用该模型分析和预测三棱抗氧化有效成分提取。各因素中一次项A（乙醇体积分数）和C（提取时间）对黄酮的提取影响差异高度显著（PCB，即乙醇体积分数料液比提取时间。1表4响应面分析拟合回归模型的方差分析结果响应面坡度陡峭程度和等高线椭圆形状反映出交互效应的强弱趋势，如果响应面坡度相对较为平缓，表示其可以忍受处理条件的变异，而不影响响应值大小；相反，如果坡度非常陡峭，表明处理条件的变异对响应值的影响非常大，即响应值对于处理条件的改变非常敏感13。如果等高线呈椭圆形表示两因素交互作用显著，而圆形则与之相反14。为确定乙醇体积分数、料液比、提取时间3个因素和交互作用对三棱抗氧化活性成分提取率的影响，根据回归方程绘出响应面及等高线图如下。从图5-图7可看出，3个因素之间的交互作用对三棱抗氧化活性成分提取率的影响均不显著，表现为曲线较平滑，与方差分析结果相一致。方差来源平方和自由度均方F值P值显著性模型3318.939368.779.640.0034显著A浓度981.911981.9125.660.0015B时间60.72160.721.590.2481C料液比414.001414.0010.820.0133AB394.621394.6210.310.0148AC43.164143.1641.130.3234BC207.221207.225.420.0528A2785.211785.2120.520.0027B2345.501345.509.030.0198C27.4617.460.190.6721残差267.81738.26失拟项215.92371.975.550.0657不显著纯误差51.89412.97总离差3586.74161图5乙醇体积分数和料液比对清除率影响的响应面和等高线图6提取时间和乙醇体积分数对清除率影响的响应面和等高线图7料液比和提取时间对清除率影响的响应面和等高线2.3.4最佳提取工艺及验证1表5响应面分析拟合回归模型的最佳提取工艺结果Number浓度时间料液比清除率Desirability172.441.0620.0056.59590.541272.461.0520.0056.5930.541372.751.0320.0056.57780.541473.151.0120.0056.52030.540573.131.0720.0056.5140.540671.481.0420.0056.42080.539778.900.5010.0052.70790.500通过DesignExpert8.05b软件得到的三棱总黄酮最佳提取工艺为乙醇体积分数72.44%，液固比20ml/g，提取时间为1.06h，提取2次，清除率理论值为56.5959%。考虑到实际操作的方便性，选择最佳提取工艺参数为：乙醇体积分数为72.44%，料液比20:1ml/g，提取时间1.06h，提取2次，在此条件下，重复三次实验，每次称取三棱药材粉末1.000g，得到DPPH自由基清除率为57.2854%。与理论值相比，其相对误差为1.218%，优化结果可靠。2.4讨论响应面法的优点是在试验条件优化过程中可以连续地对试验因素的各个水平进行分析，而克服了正交试验只能对一个个孤立的试验点进行分析和不能给出直观图形的缺陷，所以响应面法被广泛应用于试验设计与工艺优化研究15。本实验选择以乙醇溶液作为提取溶剂，是因为三棱抗氧化活性成分主要为黄酮类物质属于中等极性物质，在乙醇溶液中比水更能溶解。实验主要考察了乙醇浓度、液固比和提取时间这三个因素，结果显示，对三棱抗氧化活性成分影响最主要的因素是乙醇浓度，最小的因素是提取时间，所以在进行三棱抗氧化活性成分提取时，要特别注意乙醇浓度合不合适。本人在实验过程中发现，三棱提取液多为淡黄色透明溶液，猜测提取液中的黄酮类物质为三棱抗氧化活性成分中的主要成分。2.5结论本实验初次采用响应面分析法对乌梅总黄酮提取工艺进行优化，得出三棱总黄酮提取的最佳工艺为乙醇体积分数为72.44%，液固比20:1ml/g，提取时1间1.06h，提取2次。为方便提取操作，可进一步优化为乙醇体积分数为72%，液固比20:1ml/g，提取时间1h，提取次数为2次。本实验优化得出的工艺简单，稳定性好，操作容易。为三棱抗氧化活性成分的开发研究提供理论依据。1参考文献1Cheng,F.C.,J.F.,Tsai,T.H.HydroxylradicalinlivingsystemsanditsseparationmethodsJ.JoumralofChromatographyB,2002,781:481-4962Kim,S.Y.,Kim,J.H.Antioxidantactivitiesofseleetedorientalherbextracts.JJournaloftheAmerieanOilChemistsSociety,1994,71(60):5-57.3戴仕林，吴启南，殷婕。中药三棱的现代研究进展J。中国民族民间医药，2011,17（1）：63-64.4陈季武等.天然黄酮化合物清除DPPH的构效关系J.发光学报,2005,26(5):664.5杨建雄,王丽娟,田京伟.槐米提取液对小鼠抗氧化能力的影响J.陕西师范大学学报:自然科学版,2002,30(2):87.6潘国庆,梁永欣.黄酮类化合物结构与抗氧化活性关系研究J.青海科技,2005,(3):28-30.7KimLe,FrancisChiu,KenNG.IdentificationandquantificationofantioxidantsinFructuslyciiJ.foodchemistry,2007,105(1):353-363.8刘丹.芹菜黄酮类化合物的提取纯化及其抗氧化性研究D.华东：华东理工大学，2014.9李石容.金花茶茶花黄酮类化合物的分离纯化及抗氧化活性的初步研究D.湛江：广东海洋大学,2012.10张鹏.银杏叶黄酮的微波提取及其抗氧化性研究J.安徽农业科，,2009,37（12）：5496-5497.11王喆,张瑾峰,付桂芳.莪术、三棱对人肺癌细胞凋亡的影响J.首都医科大学学报,2001,18(2):4-7.12侯淑珍,王景媛,王娜,等.响应面分析法优化牛蒡根多糖提取工艺J.中国实验方剂学杂志,2012,18(11):21.113陈莉,屠康,王海,等.采用响应面法对采后红富士苹果热处理条件的优化J.农业工程学报,2006,22(2):159-163.14徐媛,王鲁峰,徐晓云,等.响应面法优化红葡萄柚番茄红素的提取工艺J.食品科学,2010,31(22):255-259.15徐秀泉,虞倩,徐颖.赶黄草总黄酮超声提取工艺的响应面法优化及其体外抗氧化活性分析J.中国实验方剂学杂志,2012,18(18):38.1综述三棱的化学成分和药理作用研究进展1三棱的化学成分研究（1）挥发油类朱凤妹1等利用气相色谱-质谱(GC-MS)联用方法从三棱挥发油中分离并确认出32种化学成分。然后用峰面积归一化法通过G1710BA化学站数据处理系统得出各化学成分在挥发油中的百分含量,其中主要成分为3,5,6,7,8,8a-六氢-4,8a-二甲基-6-(11-methylethyenyl)-2(1H)萘酮(12.95%),2,4,6,7,8,8a-六氢-5(1H)-黄酮(10.72%),十氢-4a-甲基-1-萘(5.78%),3H-3a,7-甲撑苷菊环烃(5.69%)。（2）脂肪酸三棱中所含有机酸主要为脂肪酸类。张淑运2应用GC-MS联用色谱仪对混合脂肪酸进行了分析,鉴定了21种脂肪酸,占总脂肪酸含量97.7%,其中十六酸、十八二烯酸、十八烯酸、十八酸含量较高,占混合脂肪酸90%。张卫东3等从三棱的乙醇提取物中分离得到了三棱酸,将其结构鉴定为6,9,10-三羟基-7-十八烯酸。（3）皂苷类张卫东3等先后从三棱乙醇提取物中分得了-谷甾醇-3-O-D-吡喃葡萄糖苷、5,6胆酸甲酯-3-O-L-鼠李糖(14)-D-吡喃葡萄糖苷、5-胆酸甲酯-3-O-D-吡喃葡萄糖醛酸-(14)-L-鼠李糖苷、5-胆酸甲酯-3-O-D-吡喃葡萄糖苷。Shin,SooYong4等分离得到-谷甾醇-3-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。（4）黄酮类张卫东3等从三棱的乙醇提取物中分离得到了3个黄酮类化合物,分别为1芒柄花素、山奈酚、5,7,3,5-四羟基黄酮醇-3-O-D-吡喃葡糖糖苷,后者为新的天然产物。（5）苯丙素类三棱中含有苯丙素类，主要以甘油酯和配糖体的形式存在。Shirota4等从三棱的甲醇提取物中分离得到了1,3-O-di-p-coumaroylglycerol等8个苯丙素类化合物;YingXiong5等乙醇提取物氯仿萃取部分分离得到2个苯丙素类化合物,-D-(1-O-Acety-3-O-cis-feructo-furanosyl-D-2,3,6-O-triacetylglucopyranoside和1-O-cis-Feruloyl-3-O-trans-p-coumaroylglycer-ol。2三棱的药理学作用研究（1）抗氧化作用三棱的黄酮类能够有效清除体内的自由基(FreeRadical)及毒素，预防、减少疾病的发生；消炎、抗过敏、广谱抗菌、抗病毒作用。解除醇中毒、保肝护肝。清热解毒、祛风湿、强筋骨、抗妇女更年期综合症等功效。它们与维生素C有协同效应，可以使维生素C在人体组织中趋于稳定。本文在单因素的基础上通过响应面分析法得出三棱总黄酮提取的最佳工艺为乙醇体积分数为72.44%，液固比20:1ml/g，提取时间1.06h，提取2次，对DPPH自由基清除率为57.2854%。（2）抗血小板凝集和抗血栓作用胡旭光6等以凝血时间,偏瘫恢复数为指标,研究了关于不同三棱提取物的抗凝血、抗血栓作用。结果表明,三棱总黄酮具有较强的抗血小板聚集和抗血栓作用,提示总黄酮是三棱活血化瘀的有效活性成分。（3）对血液流变性的影响党春兰7等运用生物力学理论,研究了中药三棱对血液流变学指标的影响。结果表明,三棱组的全血粘度、血细胞压积以及血沉速率与空白对照组相比有明显减小(P0.01)。所以作者认为三棱活血祛瘀的药理作用机理为血细胞压积和血沉速率的显著减小导致全血粘度降低,起到了活血祛瘀的功效。（4）镇痛作用邱鲁婴8等采用小鼠扭体法、热板法,以阿司匹林为阳性对照,对三棱的镇1痛作用进行研究。结果表明,三棱总黄酮能明显减少因醋酸刺激引起的扭体反应的次数，提高小鼠的痛阈值，有显著镇痛作用。邓英君9采用小鼠扭体法、热板法,对三棱饮片的氯仿、醋酸乙酯、正丁醇等提取物进行了镇痛及抗凝血作用的研究。结果表明，三棱不同提取物均能明显减少小鼠因醋酸刺激引起的扭体反应次数,能显著提高小鼠因热刺激而引起疼痛反应的痛阈值，有明显的镇痛作用，其中以醋酸乙酯提取物作用最强而持久。（5）对心脑血管的作用于永红9等研究了三棱对培养的兔胸主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)DNA合成的影响。结果表明,三棱提取物可以抑制兔动脉SMC的增殖。而SMC向内膜的增殖是动脉粥样硬化(AS)和经皮冠状动脉(PTCA)术后再狭窄的主要原因。此研究为防治AS及PTCA术后再狭窄提供了依据。曾庆杏等在wistar鼠大脑中动脉阻塞的局灶性脑缺血模型上研究了其对脑电图的影响。结果表明,复方三棱、莪术、黄芪能增加梗死侧脑电图波幅,减轻神经功能缺损程度,减小梗死灶体积。于永红9等研究了三棱对家兔实验性AS病灶的消退作用及原癌基因C-myc,C-fs,V-sis表达的影响。结果表明,三棱具有不同程度促进主动脉AS病灶及冠状动脉AS病灶消退的作用(与对照组比较P0.01);同时还具有不同程度抑制原癌基因C-myc,C-fos,V-sis表达的作用(与对照组比较P0.01)。（6）抗肿瘤作用王喆10等人运用EPICS-ELITE型流式细胞仪,研究三棱对人肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。结果显示三棱对人肺癌细胞的凋亡具有显著的诱导作用。徐立春11等用SE(三棱、莪术)提取物对经过丝裂霉素灭活处理后的K562肿瘤细胞进行修饰异构,修饰后的肿瘤细胞(K562)作为瘤苗免疫小鼠,14天后再去接种B16小鼠恶性黑色素瘤细胞观察抗瘤效应。而结果显示,SE中药修饰肿瘤细胞疫苗可以明显增强对B16的抗瘤效应。陈平等12对三棱、莪术的挥发油成分进行生物修饰构建,经修饰SGC-7901瘤苗治疗荷瘤小鼠,能明显阻止胃癌细胞转移。（7）其它作用裘柱婷13等研究发现三棱、莪术有保护肝细胞、减轻肝细胞变性坏死,1恢复肝细胞结构及功能作用;减少纤维化发展,促进纤维组织降解作用。邱颂平14等研究了三棱、莪术对肺纤维化大鼠的肺形态学影响。结果表明,三棱、莪术能有效地抑制博来霉素引起的肺纤维形成。XuLuMing15等研究了三棱提取物的降糖活性。结果表明,浓度为10g/ml的三棱乙酸乙酯提取物,香草酸及对羟基苯甲醛的-糖苷酶抑制率分别为72.71%,20.13%和30.42%。（8）总结三棱的化学成分复杂,有多种药理活性。黄酮类、皂苷类成分的抗凝血、镇痛作用是研究的热点。近年来,三棱的新成分、新活性不断被发现,如-D-(6-Otrans-feruloyl)fructofuranosyl-D-O-glu-copyranoisde等苯丙素类化合物,三棱乙酸乙酯提取物的降糖活性等。目前,已经阐明三棱总黄酮具有抗血小板聚集、抗血栓、镇痛、抗氧化等作用,但三棱的研究仍存在诸多问题:(1)有效成分不明确,如抗肿瘤活性成分和降血糖活性成分;药理研究仍处于提取物阶段。(2)三棱中化学成分含量低,如何正确合理的评价三棱药材品质尚待研究。(3)三棱资源的减少。近年来,随着城市化的深入,大量的土地被征用以及种植三棱收益不高等原因造成三棱产区减小甚至消失如河南郑州产区。(4)水污染对三棱品质的影响。由于生长环境特殊,三棱极易受到水污染的影响。因此对三棱化学成分和药理活性的深入研究,进一步阐明化学成分和临床应用的关系;采取相关措施,有效地保护三棱资源以及减少水污染对三棱品质的影响对于指导临床用药和新药研究具有重要意义。总结本文对三棱黄酮类化合物抗氧化性能进行了研究,为该资源的综合开发利用提供理论基础。三棱的化学成分复杂,含挥发油类、脂肪酸、皂苷类、苯丙素类。有多种药理活性。黄酮类、皂苷类成分的抗凝血、镇痛作用是研究的热点。近年来,三棱的新成分、新活性不断被发现。目前,已经阐明三棱总黄酮具有抗血小板聚集、抗血栓、镇痛、抗氧化等作用,但三棱的研究仍存在诸多问题:(1)有效成分不明确,如抗肿瘤活性成分和降血糖活性成分;药理研究仍处1于提取物阶段。(2)三棱中化学成分含量低,如何正确合理的评价三棱药材品质尚待研究。(3)三棱资源的减少。近年来,随着城市化的深入,大量的土地被征用以及种植三棱收益不高等原因造成三棱产区减小甚至消失如河南郑州产区。(4)水污染对三棱品质的影响。由于生长环境特殊,三棱极易受到水污染的影响。因此对三棱化学成分和药理活性的深入研究,进一步阐明化学成分和临床应用的关系;采取相关措施,有效地保护三棱资源以及减少水污染对三棱品质的影响对于指导临床用药和新药研究具有重要意义。中药三棱