新雪胶囊的质量标准提高研究

新雪胶囊的质量标准提高研究摘要：目的提高新雪胶囊的质量标准。方法建立穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定方法并进行方法学考察，对检测条件和供试品的前处理方法等统一研究，考察所建立含量测定限度的合理性。结果制定新雪胶囊含量测定方法，确定其含量限度。结论新建立的新雪胶囊含量测定方法快速、简便，重现性好，为新雪胶囊质量标准提高工作奠定基础。关键词：新雪胶囊；标准提高；含量测定；高效液相色谱法注：本论文题目来源于教师的国家药典标准提高项目，项目编号为：272。IStudyonimprovingthequalitystandardsofXinxuecapsulesAbstract：ObjectiveToimprovethequalitystandardsofXinxuecapsules.MethodsToestablishthecontentdeterminationmethodandformethodologyinspectionaboutthePanicultalactoneandthedehydrationpanicultalactone.Tounifiedresearchthetestconditionsandthetestsamplespretreatmentmethods.Toinspectiontherationalityaboutthecontentoftheestablishedlimits.ResultsTodevelopthecontentdeterminationmethodabouttheXinxuecapsulesanddeterminethecontentofitslimit.ConclutionThenewlyestablishedcontentdeterminationmethodofXinxuecapsulesiseasy，quick，andgoodreproducibility.ItistolayagoodfoundationfortheXinxuecapsulesqualitystandardwork.Keywords：Xinxuecapsules，Standardstoimprove，Contentdetermination，HPLC目录摘要.-1前言.12材料与仪器.22.1仪器与试剂.22.2样品收集情况.23方法与结果.23.1色谱条件的摸索.33.2前处理方法的探索.53.3方法学的考察.73.4样品含量测定.123.5样品含量限度的确定.134讨论.14参考文献.16综述.17致谢.2401前言新雪胶囊由14味药组成，主要用于邪热内陷，心神被扰所致的壮热神昏、烦躁谵语，热极生风而致的痉厥、颈项强直。处方中用寒水石、石膏等大寒之品清热为君药，竹叶卷心、升麻、人工牛黄、穿心莲清热解毒，磁石重镇安神为臣药，沉香行气开窍，珍珠层粉、硝石泻热散结为佐药。诸药合用有清热解毒、开窍宁神、各种热性病之发热、重镇息风之功效。“新雪胶囊”为“新雪颗粒”同处方不同剂型的仿制品种，新雪颗粒为原研剂型，目前质量标准收载于中国药典2010版一部1。新雪胶囊分别执行国家食品药品监督管理局颁布的两个企业注册标准，注册标准号为YBZ25542005（辽宁先臻制药有限公司）、YBZ12072006-2010Z（江苏同禾药业有限公司），两个企业的质量标准在处方量、工艺制法、检验项目上均存在一定差异。该品种“20102011年度国家药品标准提高工作（中药）科研立项任务单”的要求为：参考中国药典2010年版一部收载的原研品种“新雪颗粒”质量标准，建立穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定方法并进行方法学考察或验证原穿心莲的含量测定方法，对检测条件和供试品的前处理方法等统一研究，考察所建立含量测定限度的合理性。现行的两个企业注册标准中均有含量测定项，江苏同禾药业有限公司的注册标准中含量测定项为HPLC法测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总量；辽宁先臻制药有限公司的注册标准中含量测定项为HPLC法测定栀子中栀子苷的含量。现按照该品种“科研立项任务单”的要求，本着系列品种质量标准靠齐的原则2-3，参考中国药典2010年版一部“新雪颗粒”含量测定项下方法，同时，以有大量文献4-10证明使用高效液相色谱法测定穿心莲含量适用性高。因此，本次实验采用高效液相色谱法测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，并进行了相应的方法学考察。12材料与仪器2.1仪器与试剂仪器：岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，岛津SPD-M10AVP检测器，CLASS-VP工作站；Agilent1260液相色谱仪，VWU紫外检测器，1260series高效液相色谱工作站；电子分析天平METTLERTOLEDOXS204；超声波清洗器。穿心内莲酯对照品（批号110797-201108，含量以98.7%计，购自中国药品生物制品检定研究院）；脱水穿心莲内酯对照品（批号110854-201308，含量以99.7%计，置五氧化二磷减压干燥器中减压干燥12小时后使用，购自中国药品生物制品检定研究院）。中性氧化铝：200300目，批号140922，上海五四化学试剂有限公司。试剂：甲醇为色谱纯；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。2.2样品收集情况新雪胶囊目前全国有2家企业生产，分别为辽宁先臻制药有限公司（国药准字Z20050717）和江苏万禾制药有限公司（国药准字20080037）。本次试验收到企业提供的样品共7批，样品收集情况见表1。表1样品收集情况生产企业样品批号规格辽宁先臻制药有限公司110701；110402；1104010.5g/粒江苏万禾制药有限公司110402；100310；110401；1103090.35g/粒23方法与结果新雪颗粒的含量测定法：含量测定照高效液相色谱法（中国药典2010版一部附录D）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（55：45）为流动相；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000。对照品溶液的制备取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含穿心莲内酯16g和脱水穿心莲内酯24g的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心20分钟（3000转/分钟），精密量取上清液5ml，加在中性氧化铝柱（200300目，4g，内径为1.5cm）上，用甲醇20ml洗脱，收集洗脱液，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液20l，供试品溶液20l，注入液相色谱仪，测定，即得。参考次测定方法，进行一下摸索。3.1色谱条件的摸索3.1.1检测波长的选择在二极管阵列检测器上提取对照品及供试品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯色谱峰在200400nm波长范围的紫外光谱扫描图，结果显示穿心莲内酯在225nm波长处有最大吸收（见图1），脱水穿心莲内酯在254nm波长处有最大吸收（见图2，供试品中穿心莲内酯峰与脱水穿心莲内酯峰紫外光谱扫描图与穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品的光谱扫描图一致（见图3和4），与中国药典2010年版一部“新雪颗粒”含量测定项下检测波长一致，故选择穿心3莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。Spectrumattime7.90min.nm200250300350mAU050100150mAU0501001507.90minSpectrumattime7.90min.nm200250300350mAU050100150mAU0501001507.90min图1穿心莲内酯对照品峰紫外光谱扫描图图2供试品中穿心莲内酯峰紫外光谱扫描图Spectrumattime20.02min.nm202525027530325350mAU05010mAU0501020.02minSpectrumattime20.00min.nm200250300350mAU0255075mAU025507520.00min图3脱水穿心莲内酯对照品峰紫外光谱扫描图图4供试品中脱水穿心莲内酯峰紫外光谱扫描图3.1.2流动相的选择参考中国药典2010年版一部“新雪颗粒”含量测定项下方法，采用甲醇-水（5545）为流动相。供试品色谱图中，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯保留时间分别为8分钟和20分钟，基线相对平稳，阴性样品无干扰，分析时间也较合理，故选用甲醇-水（5545）为流动相。3.1.3柱温的选择本试验通过同一份供试品溶液（批号110309）进样20l，考察了流动相为甲醇-水（5545）时，柱温分别为20、25、30、35、40的待测色谱峰的保留情况。观察各色谱图可知，各柱温条件下各色谱图的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰分离度良好，理论塔板数均在5000以上，峰面积积分值相近。225nm225nm254nm254nm4可见柱温对新雪胶囊的含量测定影响不显著。综合考虑，本试验选择柱温35。3.1.4系统适用性试验色谱柱：PhenomenexLunaC18(2504.6mm，5m)，No:696223-7；柱温：35；流动相：甲醇-水（55：45），流速：1.0ml/min；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算，结果见表2。考虑到不同色谱柱的差异，标准正文将理论板数定为均应不低于4000。3.1.5色谱柱的考察分别采用不同品牌的色谱柱，按标准正文含量测定项下的色谱条件测定同一供试品溶液（批号：110402），结果见表2。色谱柱分别为PhenomenexLunaC18(2504.6mm，5m)，NO:696223-7；EcosilC18(2504.6mm，5m)，NO:9AC41106；CAPCELLC18(2004.6mm，5m)，NO:120V-17结果显示所选用的三种色谱柱均能达到系统适用性的要求。考虑到不同色谱柱的差异，标准正文将理论板数定为均应不低于4000。表2不同色谱柱的比较色谱柱穿心莲内酯保留时间（min）脱水穿心莲内酯保留时间（min）穿心莲内酯理论塔板数脱水穿心莲内酯理论塔板数穿心莲内酯含量（mg/粒）脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）总量（mg/粒）7.819.68000130000.1870.5040.697.620.7620070000.1920.4950.696.113.85300100000.1790.4940.673.2前处理方法的探索3.2.1提取溶剂和洗脱溶剂的选择取同一批（批号110309）样品约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别比较三种不同提取溶剂：70甲醇、甲醇、50%甲醇各20ml超声处理30分钟的效果，其余操作同标准正文“供试品溶液的制备”，结果见表3。结果显示，50%甲醇提取洗脱的效率最低，以甲醇或70%甲醇为提取溶剂，提取效果差别5不大，但甲醇提取液颜色最深，杂质最多，故提取溶剂和洗脱溶剂均选为70%甲醇。表3提取溶剂的选择提取溶剂洗脱溶剂穿心莲内酯含量（mg/粒）脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）总含量（mg/粒）70%甲醇70%甲醇0.6480.5381.19甲醇甲醇0.6440.5381.1850%甲醇50%甲醇0.5770.5021.0870%甲醇甲醇0.6470.5111.163.2.2提取方法的选择取同一批（批号110309）样品约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，分别比较五种不同提取方法：方法1为超声处理10分钟；方法2为超声处理20分钟；方法3为超声处理30分钟；方法4为冷浸1小时后超声处理10分钟，方法5为冷浸1小时后超声处理20分钟，其余操作同标准正文“供试品溶液的制备”，结果见表4。结果显示五种提取方法提取效果差别不大，随着超声时间提高，穿心莲内酯含量有所提高，脱水穿心莲内酯含量几无变化，兼顾时间与效率，标准正文选用“超声处理30分钟”，方法简便。表4提取方法的考察提取溶剂穿心莲内酯含量（mg/粒）脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）总含量（mg/粒）超声10min0.4550.5601.02超声20min0.4910.5411.03超声30min0.5650.5431.11冷浸1小时后超声10min0.5520.5541.11冷浸1小时后超声20min0.5710.5421.113.2.3中性氧化铝装填量及洗脱溶剂体积的考察取同一批（批号110309）样品的70%甲醇提取液，分别置不同装填量、经过活化或未经活化的干法装填的中性氧化铝柱（200300目，内径1.5cm）上，按标准正文“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，依法测定，结果见表5。结果表明中性氧化铝装填量为35g对样品含量测定结果影响不大，为保证6去除杂质的干扰，标准正文选择中性氧化铝的装填量为4g；中性氧化铝活化与否对样品含量测定结果影响不大。表5中性氧化铝装填量的考察中性氧化铝装填量穿心莲内酯含量（mg/粒）脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）总含量（mg/粒）未经活化的中性氧化铝3g0.6050.5241.13未经活化的中性氧化铝4g0.6010.5231.12未经活化的中性氧化铝5g0.6050.5191.12105活化1小时中性氧化铝4g0.6060.5131.12105活化2小时中性氧化铝4g0.6140.5241.14另为考察25ml70%甲醇能否洗脱完全，分别再用70%甲醇10ml继续洗脱，分别收集洗脱液，按标准正文含量测定项下方法测定。70%甲醇洗脱液中未检出待测组分，说明用70%甲醇洗脱至约25ml，已将供试品中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯洗脱完全。3.2.4标准方法的正文含量测定照高效液相色谱法（中国药典2010版一部附录D）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（55：45）为流动相；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于4000。对照品溶液的制备取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含穿心莲内酯15g和脱水穿心莲内酯20g的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，离心20分钟（3000转/分钟），精密量取上清液5ml，加在中性氧化铝柱（200300目，4g，内径为1.5cm）上，用70%甲醇20ml洗脱，收集洗脱液，置25ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。7测定法分别精密吸取对照品溶液20l，供试品溶液1020l，注入液相色谱仪，测定，即得。3.3方法学考察3.3.1专属性取穿心莲的阴性样品约2.0g，精密称定，按标准正文含量测定项下供试品溶液的制备方法制备穿心莲阴性对照溶液，依法进行测定，结果穿心莲阴性对照溶液色谱图中，在与穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品色谱峰相应的位置上，未见有色谱峰，说明处方中的其他药味对测定无干扰。其中穿心莲内酯的理论塔板数为7800，脱水穿心莲内酯的理论塔板数为13000，液相色谱图见图56。Minutes0246810214618202410201201:25nm,8st-3RepNaMinutes024681021461820241203012031:25nm,809XZ37MLNaeMinutes02468102146182024510505105():25nm,8RetioTNa8图5穿心莲内酯HPLC色谱图（检测波长225nm）其中：穿心莲内酯对照品（上），供试品（中，批号110309，江苏万禾制药有限公司），穿心莲阴性对照（下）Minutes0.2.5.07.510.2.51.07.520.52.0mAU501mAU5012:54nm,8st-3RepNaMinutes0.2.5.07.510.2.51.07.520.52.0mAU1203mAU1203:4nm,819XZ37MLNaeMinutes0.2.5.07.510.2.51.07.520.52.0mAU501mAU501():4nm,8RetioTNa图6脱水穿心莲内酯HPLC色谱图（检测波长254nm）其中：脱水穿心莲内酯对照品（上），供试品（中，批号110309，江苏万禾制药有限公司），穿心莲阴性对照（下）3.3.2线性关系及范围分别精密吸取穿心莲内酯对照品溶液（浓度为23.42g/ml）1l，2l，5l，10l，15l，20l，25l，30l，35l，40l和脱水穿心莲内酯9对照品溶液（浓度为21.64g/ml）1l，2l，5l，10l，15l，20l，25l，30l，35l，40l，注入高效液相色谱仪，依法测定，以进样量（g）为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线（见表6、7和图7、8）。穿心莲内酯线性方程：y=2E+6x-1619.3，R20.9998；脱水穿心莲内酯线性方程：2E+06x-749.6，R21。结果表明，穿心莲内酯在0.02342-0.9368g范围内，脱水穿心莲内酯在0.021640.8656g范围内，其进样量与峰面积呈良好的线性关系。表6穿心莲内酯线性考察结果进样体积（l）穿心莲内酯量（g）穿心莲内酯峰面积积分值10.023424668520.0468410351950.1171261360100.2342518155150.3513775167200.46841003472250.58551292347300.70261550806350.81971799894400.93682062431表7脱水穿心莲内酯线性考察结果进样体积（l）脱水穿心莲内酯量(g)脱水穿心莲内酯峰面积积分值10.021643434920.043287333750.1082186240100.2164373661150.3246557121200.4328745594250.5410932787300.64921121997350.75741297267400.8656149074910穿心莲内酯y=2E+06x-1619.3R2=0.99980500000100000015000002000000250000000.51进样量峰面积值脱水穿心莲内酯y=2E+06x-749.6R2=1050000010000001500000200000000.51进样量峰面积值图7穿心莲内酯标准曲线图图8脱水穿心莲内酯标准曲线图3.3.3稳定性考察取同一份供试品溶液（批号：110309），在室温放置0，2，4，6，10，22，26，32小时后分别进样，依法测定，结果见表8。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量分别为0.65mg/粒和0.55mg/粒，RSD分别为0.8%和1.3%（n=8），平均总含量为1.20mg/粒，RSD为1.0%（n=8），表明供试品溶液在32小时内测定结果基本稳定。表8稳定性试验结果时间（小时）024610122632穿心莲内酯含量（mg/粒）0.6440.6490.6510.6520.6540.6590.6530.662脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）0.5420.5490.5440.5420.5500.5580.5580.561总量（mg/粒）1.181.201.191.191.201.221.211.223.3.4重复性试验取同一批号（批号：110309）样品，精密称取6份，按含量测定项下方法制备供试液，依法测定，结果见表9。穿心莲内酯的平均含量为0.649mg/粒，RSD为1.8%（n=6）；脱水穿心莲内酯平均含量为0.545mg/粒，RSD为1.4%（n=6）；穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯总量平均为1.19mg/粒，RSD为0.7%（n=6）。表9重复性试验结果样品编号123456取样量（g）2.08372.06522.02372.07992.18301.934711穿心莲内酯含量（mg/粒）0.6460.6560.6680.6470.6380.636脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）0.5400.5390.5410.5430.5590.550总含量（mg/粒）1.1861.1951.2081.1901.1971.1863.3.5准确度（以加样回收率表示）取已知含量（批号：110309，穿心莲内酯含量为0.649mg/粒，脱水穿心莲内酯含量为0.545mg/粒）的样品约0.8g，精密称取共6份，置具塞锥形瓶中，精密加入穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯混合对照溶液（穿心莲内酯浓度为0.1303mg/ml，脱水穿心莲内酯浓度为0.1236mg/ml）10ml，再精密加入70%甲醇10ml，密塞，称定重量，按标准正文含量测定项下方法制备供试液，依法测定，计算回收率，结果见表10和11。穿心莲内酯平均回收率为100.3%，RSD为1.7%（n=6）；脱水穿心莲内酯平均回收率为100.3%，RSD为1.4%（n=6）。表10穿心莲内酯加样回收试验结果编号取样量（g）样品中穿心莲内酯含量（mg）穿心莲内酯加入量（mg）穿心莲内酯测得总量（mg)回收率（）10.79051.4261.30302.74352101.11%20.81241.4661.30302.7488098.48%30.82591.4901.30302.83540103.26%40.81271.4661.30302.7640599.61%50.80061.4441.30302.7395799.41%60.81241.4661.30302.7670799.88%表11脱水穿心莲内酯加样回收试验结果编号取样量（g）样品中脱水穿心莲内酯含量（mg）脱水穿心莲内酯加入量（mg）脱水穿心莲内酯测得总量（mg)回收率（）10.79051.1991.2362.4334199.86%20.81241.2321.2362.47104100.21%30.82591.2531.2362.49709100.66%40.81271.2331.2362.4529598.71%50.80061.2151.2362.48352102.67%60.81241.2321.2362.461599.44%123.4样品含量测定取所收集的样品7批，按标准正文含量测定项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算供试品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，结果见表12。表12样品含量测定结果生产企业批号穿心莲内酯含量（mg/粒）脱水穿心莲内酯含量（mg/粒）穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总量（mg/粒）平均含量（mg/粒）0.0260.2190.2451107010.0260.2190.2450.240.0510.3210.3721104020.0500.3160.3660.370.0180.2840.302辽宁先臻制药有限公司（0.5g/粒）1104010.0180.2870.3050.300.1860.5060.6921104020.1870.5010.6880.690.5510.6311.1821103100.5610.6491.2101.200.5230.7171.2401104010.5590.7151.2741.260.7410.6391.380江苏万禾制药有限公司（0.35g/粒）1103090.7130.6231.3361.36133.5样品含量限度的确定中国药典2005年版一部“穿心莲”药材含量测定项下规定：本品按干燥品计算，含穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量不得少于0.80%。根据处方，成品每粒含穿心莲药材0.44g（0.5g/粒）或0.2933g（0.35g/粒），穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的理论含量应为每粒含穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量不得少于3.52mg（0.5g/粒）与2.35mg（0.35g/粒）。试验中共考察了2个企业提供的共7批样品的含量，7批样品(规格为0.5g/粒或0.35g/粒)穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总量在0.241.36mg/粒之间。江苏同禾药业有限公司的现行注册标准对穿心莲的含量进行了控制，其含量测定项下规定：本品每粒(规格为0.35g/粒)含穿心莲以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量计，不得少于0.85mg，以此计算转移率约为36%，基本合理，本次修订维持此限量规定。辽宁先臻制药有限公司的现行注册标准含量测定项对栀子中栀子苷的含量进行了控制，未建立穿心莲的含量控制指标，所测定3批样品穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量偏低，参考江苏同禾药业有限公司的现行注册标准及中国药典2010版一部“新雪颗粒”的含量限度，暂规定为本品每粒(规格为0.5g/粒)含穿心莲以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量计，不得少于1.1mg，以此计算转移率约为31%，基本合理。144讨论4.1色谱条件的分析试验结果表明，标准方法的色谱条件选择如下：柱温：35；流动相：甲醇-水（55：45）；流速：1.0ml/min；穿心莲内酯检测波长为225nm，脱水穿心莲内酯检测波长为254nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算，不低于4000。4.2前处理方法的分析4.2.1溶剂浓度的影响试验结果表明，甲醇浓度越高，提取出的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量越多，但由于甲醇提取溶液颜色较深，提取出的杂质最多，因此，选用70%甲醇作为提取溶剂和洗脱溶剂。4.2.2超声时间的影响实验中，随着超声提取的时间的增长，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的溶出率逐渐增加，冷浸1h再超声的效果比直接超声的效果更好。考虑到时间和效率，最终选用超声处理30分钟。4.2.3中性氧化铝的装填量和活化的影响实验结果表明，无论是中性氧化铝的装填量，还是中性氧化铝是否经过活化，对测定结果并不影响。考虑到时间效率，同时需要确保杂质的完全去除，最终选用4g不经过活化的中性氧化铝进行装柱。4.3提高新雪胶囊质量标准的意义目前，新雪胶囊分别执行国家食品药品监督管理局颁布的两个企业注册标准，分别是辽宁先臻制药有限公司和江苏同禾药业有限公司，两个企业的质量标准在处方量、工艺制法、检验项目上均存在一定差异。为了能够统一新雪胶囊的质量标准，为监管新雪胶囊的质量品质提供标准依据，改进并完善新雪胶囊的质量标准非常有必要。同时，新雪胶囊作为新雪系列的品种之一，是新雪颗粒同处方不同剂型的仿制品种，新雪颗粒为原研剂型，目前质量标准收载于中国药典2010版一15部。因此，本次实验是参考中国药典2010年版一部收载的原研品种“新雪颗粒”质量标准，通过测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，并进行色谱条件考察，供试品的前处理方法考察和方法学考察，建立新的新雪胶囊的含量测定方法，为新雪胶囊的质量标准提高研究奠基。16参考文献1国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)M北京：中国医药科技出版社，2010录Xc2栗建明，林巧玲HPLC测定新雪颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量J广东药学院学报，2006(3):272-274.3梁永平，农小棉，韦敏法.新雪片的质量标准研究J.时珍国医国药，2007（8）:1953-1954.4徐晓琴，胡广林，沈金灿，等.反相高效菠帽色谱法测定穿心莲药材及其制剂中的穿心莲内醣和脱水穿心莲内酯J色谱，2002，20(5)：446.5WiratRuengsitagoon，etal.FlowinjectionspectrophotometricdeterminationofandrographolidefromAndrographispaniculataJ.Talanta，2006，69：900.6G.A.Akowuah，etal.HPLCandHPTLCdensitometricdeterminationofandrographolidesandantioxidantpotentialofAndrographispaniculataJ.JournalofFoodCompositionandAnalysis，2006，19：118.7俞小陶，许江.RP-HPLC测定穿心莲胶囊中脱水穿心莲内酯的含量J.广东药学院学报，2003(01)：17.8毋福海，李光喜，梁汉明.HPLC测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量J.华西药学杂志，2004(02)：133-134.9曾宝，谢友良，林吉，等.穿心莲软胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内蘸的含量测定J.时珍国医国药，2005，16(10)：997.10黄筱琴，陈建华，杨安金.HPLC法测定穿心莲叶中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量J.江西中医学院学报，2007(06).17综述新雪胶囊的药理分析与测定方法研究新雪胶囊由14味药组成，主要用于邪热内陷，心神被扰所致的壮热神昏、烦躁谵语，热极生风而致的痉厥、颈项强直。处方中用寒水石、石膏等大寒之品清热为君药，竹叶卷心、升麻、栀子、人工牛黄、穿心莲清热解毒，磁石重镇安神为臣药，沉香行气开窍，珍珠层粉、硝石泻热散结为佐药。诸药合用有清热解毒、开窍宁神、各种热性病之发热、重镇息风之功效。针对其主要药物的化学成分、药理作用、中医辨证、临床应用几方面进行总结，得出新雪胶囊的研究现状。1化学成分1.1穿心莲的化学成分：穿心莲的化学成分主要为穿心莲内酯类化合物和黄酮类化合物1。（1）穿心莲内脂类化合物穿心莲内酯；穿心莲新苷2；14-去氧穿心莲内酯；14-去氧-11，12-二去氢穿心莲内酯；异穿心莲内酯；潘尼内酯；14-去氧穿心莲内酯苷；穿心莲内酯苷等。（2）黄酮类化合物5一羟基一7，8，2-三甲氧基黄酮；5一羟基一7，8，2，3一四甲氧基黄酮等。1.2沉香的化学成分：沉香的化学成分主要为三萜类化成分、黄酮类化合物、色原酮类成分和挥发油成分3。(1)三萜类成分4沉香螺旋醇、B-沉香呋喃、白木香醇、去氢白木香醇、白木香醛、羟基何帕酮等。18(2)黄酮类化合物芫花素、木犀草素等。(3)色原酮类成分分别为6，8-二羟基-2-2-（3-甲氧基-4-羟基苯乙基）色原酮和6-甲氧基-2-2-（3-甲氧基-4-羟基苯乙基）色原酮。(4)挥发油成分苄基丙酮、十六碳烷酸、6，10，14-三甲基-2-十五碳酮、十四碳烷酸、反式-9-十八碳烯酸、十五碳烷酸、4，8，12，16-四甲基十七碳烷酸内酯、叶绿醇、壬酸、异叶绿醇、十八碳烷酸等。1.3人工牛黄的化学成分：人工牛黄的化学成分主要为胆汁色素类、胆汁酸类、氨基酸和蛋白质类、各种微量元素等5。（1）胆汁色素类胆绿素、游离胆红素。（2）胆汁酸类包括游离胆汁酸和结合胆汁酸。游离胆汁酸有胆酸、猪去氧胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、石胆酸。结合胆汁酸包括甘氨胆酸、牛磺胆酸、牛磺熊去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨去氧胆酸、牛磺去氧胆酸。（3）氨基酸和蛋白质类丙氨酸、甘氨酸、牛磺酸、精氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、胱氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、脯氨酸、粘蛋白。（4）微量元素类钾、钠、钙、镁、铁、磷等。（5）胆甾醇类胆固醇。（6）此外，还有卵磷脂、类胡萝卜素、油状强心成分、维生素类。2药理作用新雪胶囊具有清热解热，抗炎，镇痉熄风，开窍宁神的效果。由中国中医研究院牵头的“十五”、“863”计划重大项目的分课题治疗SARS中药筛选研究6，证明新雪颗粒在对抗内毒素、消除肺炎、抗肺纤维19化、改善呼吸窘迫等方面有效，为临床用药提供了依据。临床上新雪颗粒主要用于治疗上呼吸道感染所致发热，主要是泻热降火的作用。余善强7等对新雪颗粒进行了体外抗RSV的治疗、预防和中和实验研究。结果表明新雪颗粒与RSV病毒混合液作用12小时后，RSV的感染力明显减弱，病毒复制动力学明显改变。说明新雪颗粒确实有体外抑制、中和RSV作用，其机制与直接杀伤病毒和保护细胞免受损害有关。陈克敏8等人通过对家兔及大鼠使用新雪丹和阿司匹林，对比两药的效果。本研究表明，新雪丹对家免及大鼠的发热确有明显的解热作用，此作用随剂量增加而加强，尤其是对菌苗引起家兔的发热，新雪丹3.109/kg的解热作用可以比得上阿司匹林0.159/kg的解热作用。新雪丹对二甲苯刺激引起小鼠耳壳的急性炎症及棉球刺激大鼠皮下肉芽肿的生成均有一定的抑制作用，这和本方的降火、散结、止痛有关。徐慧聪9等临床观察新雪片治疗高热的效果，结果表明，新雪片治疗高热症之退热作用缓和持久，目前，常用的西药退热药如乙酰氨基酚、布洛芬等退热作用虽快，但短时间内体温又见回升。而新雪片注射液退热后未发现有体温复升的现象，特别是对年老体弱或体温40以上者，不会因大量出汗、体温骤降而引起虚脱。在应用新雪片治疗过程中未发现有明显不良反应，说明新雪片治疗高热症疗效明显、可靠，可作为治疗急性热病的的首选中药制剂。3中医辨证从中医药角度分析新雪胶囊的成分，亦可以得出新雪胶囊清热解热，镇痉熄风，开窍宁神的效果10。方中石膏性辛甘大寒，归肺、胃经，可清热泻火，除烦止渴，适用于温热病邪在气分，壮热、烦渴、汗出、脉洪大等实热证。寒水石辛咸寒，归心、胃、肾经，功效清热泻火，常与石膏同用。滑石甘、淡、寒，既能利水，又熄风止痉，清解暑热。牛黄味苦性凉，归肝、心经，功效熄风止痉，化痰开窍，清热解毒，可适用于温热病及小儿惊风之壮热神昏，惊厥抽搐等症。栀子味苦性寒，归心、肝、肺、胃、三焦经，清热泻火除烦，可用于热病烦闷。升麻辛甘微寒，归肺、脾、胃、大肠经，可发表透疹、清热解毒，可用20于风热头痛、麻疹不透、齿痛口疮、咽喉肿痛等多种热毒证。穿心莲味苦性寒，归肺、胃、大肠、小肠经，功效清热解毒，燥湿消肿，可用于外感风热、温病初起，肺热咳喘，肺痈吐脓、咽喉肿痛。竹叶卷心为竹叶中卷而未放的幼叶，甘、辛、淡、寒，归心、胃、小肠经，用于热病烦渴、口疮尿赤。冰片辛、苦、微黄，归心、脾、肺经，功效开窍醒神，清热止痛，可用于热病神昏，目赤肿痛、喉痹肿痛等。珍珠层粉味咸性寒，归肝、心经，功效平肝潜阳，清肝明目，镇心安神，与上药合用，加强清热除烦定惊止痛之功。芒硝咸、苦、寒，归胃、大肠经，功效泻下、软坚、清热，用于实热积滞、大便燥结，咽痛、口疮、目赤及痈疮肿痛。诸药合用，清热解毒功效强，用于各种热病之发热，如扁桃体炎、上呼吸道感染、咽炎、气管炎所引起的高热以及温热病之烦热不解。4测定方法研究4.1主药的薄层色谱鉴别薄层色谱法是近年发展起来的一种微量、快速、简便的分离分析技术，多用于成分的定性鉴别。运用薄层色谱法对新雪系列中新雪颗粒、新雪片进行鉴别的文献已有不少，如梁永平11等人对新雪片中的栀子、穿心莲、冰片进行薄层色谱鉴别；如中华人民共和国卫生部药品标准12中对新雪片中人工牛黄进行薄层色谱鉴别；如中国药典2010版13中对新雪颗粒中栀子、冰片、人工牛黄进行薄层色谱鉴别。但相比之下，新雪胶囊的定性鉴别却还没有相关的文献叙述。因此，通过对新雪胶囊进行定性鉴别的制定，是为进一步完善新雪胶囊的质量标准铺垫重要的基础。遵循同系列、同处方、同比例、同制法、不同剂型的药物尽量使用同种质量标准检测原则，参考上述的文献，可以选择对新雪胶囊中的栀子、冰片、人工牛黄进行薄层色谱鉴别。通过薄层色谱实验，分别确定新雪胶囊中栀子、人工牛黄、冰片的薄层色谱鉴别方法。设置阴性对照，用以说明其他成分对本法无干扰，从而证明该方法专属性较强，结果可靠。同时，用预制板和手铺板分别在常温常湿、常温高湿、低温常湿的情况下对三种鉴别方法进行检测，观察结果呈现是否良好，用以证明该方法的适用性高。214.2高效液相色谱法测定含量高效液相色谱法是现在最常用的一种含量测定方法，具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、使用范围广等优点。运用高效液相色谱法测定新雪系列中新雪颗粒和新雪片中主要成分的文献已有不少，如栗建明14等人对新雪颗粒中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯进行含量测定；杨凌15等人对新雪颗粒中脱水穿心莲内酯进行含量测定；冉桂梅16等人对新雪颗粒中栀子苷进行含量测定；梁永平11等人和章曙丹17等人都对新雪片中栀子苷进行含量测定。但相比之下，新雪胶囊的有效成分的测定却还没有相关的文献叙述。因此，对新雪胶囊中有效成分进行测定，进一步完善新雪胶囊的质量控制标准的工作很有必要。遵循同系列、同处方、同比例、同制法、不同剂型的药物尽量使用同种质量标准检测原则，参考上述的文献，可以选择对穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯进