正交设计法优选蒲桃中总黄酮的提取工艺研究

正交设计法优选蒲桃中总黄酮的提取工艺研究摘要：目的利用正交设计法优选蒲桃中总黄酮的提取工艺。方法以芦丁为对照品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂，用紫外分光光度法在510nm波长处测定总黄酮的含量。采用L9(34)正交实验设计，以蒲桃中总黄酮含量为考察指标，考察乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度4个因素对蒲桃中总黄酮的提取的影响。结果蒲桃中总黄酮的最佳提取工艺为60%乙醇，70倍量，80，回流提取2h。结论经试验证明，该提取工艺重复性好，结果准确可靠，易于操作，便于推广，对进一步的工艺开发和蒲桃中总黄酮的研究有较好的参考价值。关键词：蒲桃；总黄酮；正交实验；紫外-可见分光光度法IStudyonExtractionTechnologyofTotalFlavonoidsinSyzygiumjambos(L.)AlstonbyOrthogonalDesignAbstract:ObjectiveTooptimizeextractiontechnologyoftotalflavonoidsinSyzygiumjambos(L.)Alston.MethodsTheultravioletspectrophotometrymethodwasusedtomeasurethetotalflavonoidscontentinethanolextractofSyzygiumjambos(L.)Alstonwithdifferentpolarsolventextraction,withsodiumnitrite-aluminumnitrate-sodiumhydroxideascolorreagentandtherutinasstandardsubstanceandthemaximumabsorptionwave-lengthof510nm.ByL9(34)orthogonalexperimentaldesign,withSyzygiumjambos(L.)Alston,asindexoftotalflavonoidswereinvestigatedethanolconcentration,extractiontime,ethanoldosageandextractiontemperaturefourfactorsontheextractiontotalflavonoidsinSyzygiumjambos(L.)Alston.ResultsTheoptimumextractionprocesstotalflavonoidsinSyzygiumjambos(L.)Alstonwas60%ethanol,70timestheamountofrefluxextraction,80,and2h.ConclusionProvenbytheexperiment,theextractiontechnologyiswellreproducible,accurateandreliable,easytooperateandspread.IthasagreatreferencevaluetofurtherdevelopmentofthetechnologyandtheresearchoftotalflavonoidsinSyzygiumjambos(L.)Alston.Keywords:Syzygiumjambos(L.)Alston;totalflavonoids;orthogonalexperiment;UV-Visspectrophotometry目录摘要.-1前言.12仪器与材料.32.1仪器.32.2药材与试剂.33方法.43.1蒲桃总黄酮含量测定方法.43.2方法学考察.43.3单因素考察方法.53.4蒲桃中总黄酮提取的正交试验.64结果.64.1方法学考察结果.64.2单因素考察结果.94.3蒲桃总黄酮提取的正交试验优选结果.125讨论.135.1最大吸收波长的选择：.135.2提取条件影响程度分析.135.3显色反应分析.146结论.14参考文献.15综述.17致谢.2401前言蒲桃(Syzygiumjambos(L.)Alston)为桃金娘科蒲桃属常绿乔木1，收载于广东省中药材标准(第一册)，又有名称为水蒲桃、响鼓、铃铛果、风鼓和香果等，有此名称，是因为其果实到成熟季节，会散发如玫瑰般的清新香味，同时果核可在果腔内随意滚动，摇动起来有响声。蒲桃原产于马来群岛、印度及我国的海南省，集中分布在亚洲热带地区，也有分布在亚洲亚热带至温带，以及大洋洲的部分地区。蒲桃在我国现在主要分布于海南、台湾、广东、广西、福建、云南和贵州等地区，大半处于半野生状态2。蒲桃多生长在阴湿之地，喜光喜阴，喜温暖湿润的气候，因此常生长在小溪边或者低湿的沟谷里；耐肥沃耐涝，不耐贫瘠干旱，因此湿润且肥沃的土壤较适宜其生长。蒲桃作用繁多，来源广泛，资源甚多，且价廉易得。蒲桃的根系发达，且生长情况较好，因此具备强抗风性，同时还具有抗二氧化硫、抗氯气、抗机动车尾气、抗粉尘等功能，常用于园林绿化、防护植物。民间有将其采摘鲜食，有将其用于酿酒，有将其晒干制成凉茶。而在药用方面，其作用也是不容小觑的，蒲桃的药用部位包括叶、干燥茎、种子、花和果实。据相关资料研究记载，蒲桃叶和花捣烂可以用来治疗痘疮，果实浸酒有安胎、止呕之功效，种子可促进胰岛细胞再生而起降血糖作用，茎的药效为温中散寒、温肺止咳、降逆止呕，可用治疗胃寒呃逆、肺虚寒咳等证3-6。现代药理学研究表明蒲桃茎提取物具有抗菌7,8、抗炎、镇痛9、降血糖10和抗氧化11等作用，在临床应用中对于金黄色葡萄球菌感染、皮肤炎症疼痛、糖尿病等病症的治疗具有广阔前景。黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类天然有机化合物，是植物在长期自然选择过程中产生的一类次生代谢产物，是在体内主要由莽草酸途径和乙酸-丙二酸途径生物合成的一类产物。目前，黄酮类化合物泛指两个苯环通过三个碳原子相互联结形成的一系列化合物，它分布广泛，主要存在于高等植物及羊齿植物的根、茎、叶、花、果实等中，其中以被子植物分布最多。黄酮类化合物在植物体内大半以与糖结合成为苷类的形式存在，少部分以游离形式存在。黄酮类化合物具有许多重要的生理、生化作用清除生物体内的自由基，具1有抗氧化作用12，具有抗肿瘤、调血脂、抑制血小板聚集、抗动脉粥样硬化、抗骨质疏松等各种作用13-16。黄酮类化合物的这些生理活性在抗衰老和预防治疗人类的肿瘤、心血管病等疾病这些方面具备重要意义。正交设计法是研究多因素多水平的一种设计方法，是试验优化的一种常用技术。正交设计法建立在概率论、数量统计之上，运用排列整齐的正交表安排试验方案，再经过综合比较和对试验结果的统计分析，达到减少试验次数而能快速获得最优试验方案的目的。正交设计法设计简单可行，数据点分布均匀，可减少不必要的人力物力财力等资源的浪费，在现代制备工艺和提取工艺的研究中应用广泛17。在对蒲桃的研究中，与生理特性、栽培技术、引种情况、物种比较等方面相关的比较多，虽然已有文献报道了蒲桃属植物中总黄酮的提取工艺研究，但其中以蒲桃叶居多，具体到蒲桃茎提取工艺优化研究仍是甚少。张亮亮18等人研究确定了海南蒲桃叶中黄酮的最佳提取条件为：乙醇体积分数70%，料液比1:20，提取温度80，提取时间3h。由此可将其结果作为参考，对蒲桃茎中总黄酮的提取条件进行更进一步的研究。蒲桃在我国资源量巨大，用途众多，是值得大力开发的植物资源，且中草药的具体化学成分提取、研究与应用日益受到重视，国内外开发中草药植物的力度也在不断加大。近年来，植物药以其天然低毒、来源丰富的特点倍受青睐，而黄酮类化合物更是以其广谱的生理、药理作用引人瞩目。因此，以黄酮类化合物为活性成分的植物药的开发、研究和加工越发受到科学家们的重视。作为石岐凉茶的成分之一的蒲桃，目前仍非常少以药物的身份出现在市面上，由此可见，随着该相关技术的日趋成熟，蒲桃中的黄酮类化合物的开发利用更具有广阔的前景。综上所述，蒲桃在我国资源丰富，药用层面利用却较少，本次实验研究可确定蒲桃茎中总黄酮的最佳提取条件，为科学研究蒲桃茎的药理作用、研发蒲桃相关药物新剂型、推广蒲桃药物的生产等提供可靠的数据。有效的提取方式是进行其他深层研究的先决条件，本次研究有助于更进一步对蒲桃各相关资源进行开发利用。22仪器与材料2.1仪器名称来源UV1102紫外可见分光光度计KQ-500型超声波清洗器CP225D型电子天平AUY型电子天平HH-S4数显恒温水浴锅KQ3200DE型数控超声波清洗器UV1102紫外分光光度计GZX-9246MBE电热恒温鼓风干燥箱WS70-1型红外快速干燥器DFY-300摇摆式高速万能粉碎机上海天美科学仪器有限公司昆山市超声仪器有限公司德国Sartorius公司岛津（中国）有限公司金坛市医疗仪器厂昆山市超声仪器有限公司上海天美科学仪器有限公司上海博迅实业有限公司医疗设备厂巩义市予华仪器有限责任公司温岭市林大机械有限公司2.2药材与试剂名称来源芦丁对照品蒲桃药材乙醇亚硝酸钠硝酸铝氢氧化钠超纯水批号100080-201409，中国食品药品检定研究院3批，由广东益和堂制药有限公司提供天津市富宇精细化工有限公司天津市百世化工有限公司天津市科密欧化学试剂有限公司广州化学试剂厂实验室自制33方法3.1蒲桃总黄酮含量测定方法3.1.1对照品溶液的的制备取芦丁对照品6mg，精密称定，置于20mL容量瓶，加70%乙醇溶液适量，振摇使其溶解，用70%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，芦丁浓度为0.3080mg/mL。同法配制对照品储备液，芦丁浓度为2.920mg/mL。3.1.2供试品溶液的制备取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精密称定，加70%乙醇溶液70mL，加热回流提取2h，提取液趁热过滤，滤液蒸干，残渣加70%乙醇溶液溶解，转移至25mL量瓶中，加70%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。3.2方法学考察3.2.1线性关系考察精密量取对照品储备液I0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mL，分别置于10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.5mL，6min后，加入10%硝酸铝0.5mL，6min后，再加入4%氢氧化钠5mL，加入70%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，放置15min，作为对照品系列溶液，以不含芦丁的空白溶液为参比，于510nm波长处测定吸光度，以对照品浓度(X)为横坐标，相应对照品吸光度(Y)为纵坐标，绘制浓度-吸光度标准曲线。3.2.2精密度试验取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精密称定，按“3.1.2”项下方法，制备供试品溶液，精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度，重复6次，分别测定其吸光度，计算吸光度的RSD。3.2.3稳定性试验4取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精密称定，按“3.1.2”项下方法，制备供试品溶液，精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，分别在0、0.5、1.0、1.5、2.0和2.5h时，测定其吸光度，计算吸光度的RSD。3.2.4重复性试验取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精密称定，按“3.1.2”项下方法，制备供试品溶液6份，分别精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度，计算总黄酮含量的平均值和RSD。3.2.5加样回收率试验取已知含量的供试品粉末(总黄酮的含量为5.888mg/g)9份，每份约0.5g，精密称定，分别加入对照品储备液0.5、1.0和1.5mL，按“3.1.2”项下方法操作，制备供试品溶液，每个浓度3份，分别精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度，计算总黄酮的平均回收率和RSD。3.2.6样品含量测定取3个不同批次，每批次三份的蒲桃粉末（过三号筛）共9份，每份1.0g，精密称定，按“3.1.2”项下方法操作，制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度值，计算每批次蒲桃中总黄酮的含量及其RSD。3.3单因素考察方法3.3.1乙醇浓度对提取的影响取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精确称定，共5份，分别加入50%、60%、70%、80%和90%乙醇溶液，按“3.1.2”项下方法，制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度，计算总黄酮的含量，绘制相关折线图。3.3.2提取时间对提取的影响取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精确称定，共5份，分别加入70%乙醇溶液50mL，加热回流提取时间分别为1.0、1.5、2.0、2.5和3.0h，其余操作按5“3.1.2”项下方法，制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度，计算总黄酮的含量，绘制相关折线图。3.3.3料液比对提取的影响取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精确称定，共5份，分别加入70%乙醇溶液50mL、60mL、70mL、80mL和90mL，其余操作按“3.1.2”项下方法，制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度，计算总黄酮的含量，绘制相关折线图。3.3.4提取温度对提取的影响取蒲桃粉末(过三号筛)1.0g，精确称定，共5份，按“3.1.2”项下方法操作，提取温度分别设在60、70、80和90，制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液2mL，按“3.2.1”项下方法操作，测定其吸光度，计算总黄酮的含量，绘制相关折线图。3.4蒲桃中总黄酮提取的正交试验根据蒲桃总黄酮的性质，考察了乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度4个因素，并结合以上单因素试验结果，设置4因素3水平正交试验见表1，根据因素水平表，以蒲桃总黄酮含量为评价指标，按L9(34)正交表进行实验。正交试验数据处理采用正交试验直观分析法，统计不同水平下提取出蒲桃中总黄酮含量的平均含量，以极差R进行分析。表1正交优选因素水平水平乙醇浓度(A)(%)提取时间(B)(h)料液比(C)(g:mL)提取温度(D)()1601.51:607027021:70803802.51:809064结果4.1方法学考察结果4.1.1标准曲线的建立对照品溶液于510nm波长处测定吸光度结果见表2，以对照品浓度(X)为横坐标，相应对照品吸光度值(Y)为纵坐标，绘制而成的标准曲线的回归方程为Y=9.60010-3X-1.03010-2(r=0.9998)(r0.9990)，见图1。结果表明，芦丁在15.4077.00g/mL浓度范围内与吸光度呈良好线性关系。表2蒲桃总黄酮标准曲线测定结果浓度(g/mL)吸光度15.4030.8046.2061.6077.000.1380.2860.4330.5750.732图1含量测定标准曲线4.1.2仪器精密度试验结果试验结果见表3，吸光度的RSD为0.12%。结果表明，所使用仪器精密度良好。表3仪器精密度试验结果（n=6）7编号吸光度值平均值RSD（%）1234560.4460.4470.4460.4470.4460.4460.44稳定性试验结果试验结果见表4，吸光度的RSD为0.48%。结果表明，此样品于室温条件下放置2.5h内稳定。表4稳定性试验结果（n=6）时间（h）吸光度值平均值RSD（%）00.51.01.52.02.50.4500.4470.4510.4510.4460.4480.4490.484.1.4重复性试验结果试验结果见表5，吸光度的RSD为0.77%。结果表明，此方法重复性良好。表5重复性试验结果（n=6）编号吸光度值总黄酮含量（mg/g）平均值（mg/g）RSD（%）1234560.4500.4400.4460.4480.4420.4395.9645.8525.8885.9265.8785.8445.8920.774.1.5加样回收率试验结果试验结果见表6，计算得出总黄酮的平均回收率为99.4%，RSD为1.4%。符合分析要求。表6加样回收率试验结果(n=3)称样量测得量原含量加入量平均回收RSD8(g)(mg)(mg)(mg)(%)(%)低0.50014.3922.9451.4470044.3532.9461.4070.50024.4182.9451.473中0.50015.8372.9452.893100.00.890.50035.8892.9462.9440.50075.8762.9482.928高0.50047.2832.9464.33699.30.810.50057.2702.9474.3230.50037.3352.9464.3894.1.6样品含量测定结果试验结果见表7，3个不同批次的RSD分别为0.55%、0.49%、1.1%，符合分析要求。表7样品含量测定结果(n=3)批次称样量（g）吸光度值总黄酮含量（mg/g）平均值（mg/g）RSD（%）1231.0021.0011.0021.0021.0031.0021.0011.0021.0000.4470.4420.4440.5880.5950.5910.5240.5320.5215.9255.8785.8637.7647.8427.8146.9507.0196.8705.8887.8086.9460.550.491.14.2单因素考察结果4.2.1乙醇浓度影响考察结果考察结果见表8，图2，蒲桃总黄酮提取含量随溶剂浓度增加而变化，60%70%乙醇溶液提取出的总黄酮含量最大。表8乙醇浓度的选择编号乙醇浓度(%)总黄酮含量（mg/g）91234550607080905.3215.5326.1855.6235.301图2乙醇浓度对提取的影响4.2.2提取时间影响考察结果考察结果见表9，图3，其他因素不变，随着时间的延长，蒲桃总黄酮的提取率逐渐增加，1.5h2.5h为蒲桃总黄酮的最佳提取时间范围。表9提取时间的选择编号提取时间(h)总黄酮含量（mg/g）123451.01.52.02.53.05.9056.0146.3276.3526.36510图3提取时间对提取的影响4.2.3料液比影响考察结果考察结果见表10，图4，料液比对蒲桃总黄酮的提取效率的影响随着提取溶剂体积的变化而变化，1:601:80为蒲桃总黄酮最佳提取料液比范围。表10料液比的选择编号料液比总黄酮含量（mg/g）123451:501:601:701:801:905.5945.7536.1076.0015.729图4料液比对提取的影响114.2.4提取温度影响考察结果考察结果见表11，图5，随着提取温度的升高，蒲桃总黄酮的提取率逐渐增加，7090为蒲桃总黄酮的最佳提取温度范围。表11提取温度的选择编号提取温度()总黄酮含量（mg/g）1234607080905.2955.4026.0426.352图5提取温度对提取的影响4.3蒲桃总黄酮提取的正交试验优选结果根据蒲桃总黄酮的性质，考察了乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度4个因素，并结合以上单因素试验结果，设置4因素3水平正交试验见表1，根据因素水平表，以蒲桃总黄酮含量为评价指标，按L9(34)正交表进行实验。正交试验数据处理采用正交试验直观分析法，统计不同水平下提取出蒲桃总黄酮含量的平均含量，以极差R进行分析，结果见表12。表12正交试验结果分析试验号乙醇浓度(%)提取时间(h)料液比(g:mL)提取温度()总黄酮含量(mg/g)111115.051212226.459313336371522315.101623125.425731325.547832135.662933214.612K117.6415.9716.5914.77K215.9017.2216.4517.43K315.8316.1816.7817.17K1平均值5.8805.3235.5304.923K2平均值5.3005.7405.4835.810K3平均值5.2775.3935.5935.723极差0.6030.4170.1100.887极差R的结果表明，乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度4因素对蒲桃总黄酮提取含量的影响的显著性为：提取温度乙醇浓度提取时间料液比。蒲桃总黄酮加热回流提取的最优水平搭配为A1B2C2D2，即乙醇浓度为60%，提取时间为2h，料液比1:70，提取温度80为蒲桃中总黄酮的最佳提取工艺。在此条件下进行验证试验，重复试验值为6.499mg/g，RSD为0.35%，符合预测值，说明该方法优选出来的工艺条件准确可靠。135讨论5.1最大吸收波长的选择：取对照品溶液经显色处理后，以不含芦丁的空白溶液为参比，将待测液盛于比色皿中，置于比色池中，在200600nm波长段扫描测定最大吸收度，结果显示，对照品及供试品均在510nm处有最大吸收，故选择510nm为测定波长。5.2提取条件影响程度分析5.2.1溶剂浓度的影响提取黄酮类化合物的乙醇液浓度一般在60%95%之间，60%左右浓度的乙醇溶液适合提取黄酮苷类，90%95%的乙醇溶度适于提取游离黄酮。故本次实验中采取了50%、60%、70%、80%、90%五个梯度浓度，由实验中可看出随着乙醇浓度的上升，提取出来的黄酮量先上升后下降。实验中所出现的乙醇液浓度增大导致黄酮提取量减小的现象，可能是因为存在部分醇溶性杂质有关。随着乙醇液浓度增大，这部分杂质溶出率也增大，与黄酮类化合物竞争，并且和乙醇-水分子进行结合，使得黄酮类化合物溶出减少。5.2.2提取时间的影响由实验结果可看出，随着提取时间的延长，总黄酮的提取量呈现先陡然上升后平缓上升的趋势，从2h后总黄酮的提取量增加量微乎其微，提取率趋于稳定。综合耗时长短、经济利益、资源耗费量等多方面因素，可确定1.5h2.5h为理想的提取时间范围。5.2.3料液比的影响料液比，指固态的“料”的质量与作为浸提液的“液”的体积的比。本次实验中料液比的单位为g/mL，蒲桃总黄酮的提取率随着所用提取溶剂体积的增大先增大后减小，料液比太大时，可能由于乙醇浓度大而产生如“5.2.1”项中所述情况，导致黄酮溶出率减小。5.2.4提取温度的影响14将提取温度的考察区间设置为6090。单因素考察结果显示，一定范围内提高温度，可以促进蒲桃中总黄酮溶出，在此区间内，提取率与温度成正比。5.3显色反应分析本实验利用紫外分光光度法测定总黄酮过程中，采用比色法，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂，在提取液中加入亚硝酸钠与硝酸铝后,亚硝酸钠起还原作用，被还原的黄酮类化合物再与铝盐生成络和物,最后加入氢氧化钠溶液，生成2-羟基查耳酮使提取液显色,从而可在510nm波长处出现吸收峰，进行含量测定。这种显色的化合物不稳定,在实验操作中可以明显感受到这个特性，因此，实际操作中，应该安排好实验步骤与操作时间，尽量在相同实验条件、相同环境条件下，且在短时间内快速测出吸光度,这样才能保证结果的准确度.156结论本实验采用乙醇液加热回流提取方法对蒲桃中的总黄酮进行提取，选用芦丁作为对照品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂，用紫外分光光度法在510nm处测定所提取的总黄酮的含量。实验中采用L9(34)正交实验设计，以蒲桃中总黄酮含量为考察指标，考察乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度4个因素对提取的影响，结果可看出4个因素对蒲桃总黄酮提取含量的影响的显著性为：提取温度乙醇浓度提取时间料液比。由正交设计法优选出来的蒲桃总黄酮加热回流提取最佳提取条件为：乙醇浓度为60%，提取时间为2h，料液比1:70，提取温度80。该方法优选出来的工艺简单易操作，稳定性好，经济可行，便于推广使用。在实际生产中，同时也要考虑溶剂消耗，浓缩回收溶剂的耗能等因素，根据实际情况适当调整工艺。16参考文献1中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第五十三卷：第一分册M.北京:科学出版社，1984：68.2杜华波.热带亚热带果树蒲桃J.中国热带农业，2006，（02）：43.3陈定如.水翁、海南蒲桃、蒲桃、洋蒲桃J.广东园林，2007，29（3）：79-80.4广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准:第一册M.广州：广东科技出版社，2004：200.5温放，梁桂友.蒲桃J.广西植物研究所，2012,（04）：155.6方奇南.亚热带优树种蒲桃J.福建热作科技,1992,（03-04）：48.7DjipaCD,DelmeeM,Quetin-LeclercqJ.AntimicrobialactivityofbarkextractsofSyzygiumjambos(L.)alston(Myrtaceae)J.Ethnopharmacol,2000，71(1/2):307.8MuruganS,DeviP,ParameswariNK,etal.AntimicrobialactivityofSyzygiumjambosagainstpathogensJ.IntJPharmSci,2011,3（2）：44.9Avila-PenaD,PenaN,QuinteroL,etal.AntinociceptiveactivityofSyzygiumjambosleavesextractonratsJ.JEthnopharmacol,2007,112（2）：380.10邓家刚，李学坚，覃振林.蒲桃仁提取物降血糖作用的实验研究J.广西植物，2006,26（2）：214.11JayasingheL,RatnayakeRM,MedawalaMM,etal.DihydrochalconeswithradicalscavengingpropertiesfromtheleavesofSyzygiumjambosJ.NatProdRes,2007,21（6）：551.12张永忠，陈学颖，孙艳梅.四种异黄酮抗氧化活性的比较研究J.食品科学，2008，（02）：383-386.13延玺，刘会青，邹永青，等.黄酮类化合物生理活性及合成研究进展J.有机化学，2008，28（09）：1534-1544.14杨志峰，朱英，李珊珊.植物黄酮的抗肿瘤作用及构效关系的研究进展J.四川中医，2011，29（9）：35-38.1715张齐雄，施伦勇，刘衍李，等.黄酮类稀土配合物抗骨质疏松症应用展望J.时针国医医药，2012，23（06）：1503-1504.16田景梅，张扬，张云峰，等.黄酮类调节脂肪平衡与降低心血管疾病发生机制的研究进展J.安徽农业科学，2012，40（09）：5259-5351.17刘静.正交设计法在药物制备工艺研究中的应用J.齐鲁药事，2011，（11）：668-669.18张亮亮，陈茄鸿,汪咏梅，等.海南蒲桃叶黄酮的提取及抗氧化性研究J.生物质化学工程，2010，44（2）：27-30.18综述蒲桃中总黄酮的研究价值1蒲桃的基本信息蒲桃属桃金娘科蒲桃属，为常绿乔木或小乔木。别名有水蒲桃、香果、响鼓、风鼓和铃铛果。蒲桃原产于印度、马来群岛和菲律宾等地，在我国的栽种历史颇为悠久。蒲桃集中分布在亚洲亚热带，我国境内主要包括海南、广东、广西、福建、云南等地。蒲桃喜温暖多湿的气候，喜光耐阴；喜湿润，常生长在溪边或沟谷低湿的地方，耐阴湿耐涝，不耐干旱，比较适宜生长在肥沃湿润的酸性土壤或冲积土上1-3。蒲桃具有多领域作用可制成果膏、果饯；可研制成为花茶；其果实、种子、茎叶均可入药，是沙溪凉茶的主要成分之一，有抗菌4，5、抗炎6、降血糖7和抗氧化8等作用；其次还可用于园林绿化或作为观赏植物2。2蒲桃的化学成分2.1挥发油类蒲桃挥发油的化学成分在不同部位中存在差异，蒲桃茎中主要为酸类化合物，而花叶中为单萜、倍半萜、及其二者的氧化物。其中蒲桃叶中含量最高的成分为丁香烯-5-醇，而花茎中的挥发油主成分均为十六酸9。2.2黄酮类罗济文10使用破碳电极，pH值为4.0的磷酸盐缓冲溶液，差分脉冲法对蒲桃叶中的芦丁含量进行测定，测得芦丁质量分数为15.7mg/g，另外采用分光光度法测得的黄酮质量分数为24.5mg/g。2.3三萜类化合物19林大都11在蒲桃茎化学成分研究中，分离得到6个三萜酸类化合物，对其进行薄层鉴别分析后，结果找到5个对应斑点（除了麦珠子酸），并且结果表明蒲桃茎乙酸乙酯提取物的主成分之一是三萜酸类化合物。此外，蒲桃中还有其他化学成分，如鞣酸类，以及其他含量较少的成分。3蒲桃的药理作用3.1抗氧化张镜、刁树平12对海南蒲桃果实中的原花青素进行体外抗氧化活性的相关药理研究，通过分析研究海南蒲桃原花青素分别对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基和亚油酸脂质过氧化半抑制剂量，得出海南蒲桃原花青素总抗氧化、还原力明显高于VC、金属离子螯合力高于EDTA的结论。由此表明海南蒲桃原花青素具有较强的清除自由基与抗氧化活性等体外生物活性。3.2降血糖邱雪莲7等人用海南蒲桃籽提取物以不同剂量连续15d对自发性2型糖尿病KK/4pj-Ay/J小鼠灌胃给药，结果试验组小鼠的空腹血糖和糖耐量得到显著改善，而对小鼠体重影响不大。3.3抗菌、抗炎、镇痛DjipaCD4等人采用琼脂稀释法对蒲桃树皮提取物的抗菌活性进行体外测试，他们研究发现蒲桃树皮提取物对于抑制金黄色葡萄球菌尤其有效，对凝固酶阴性葡萄球菌也有一定作用，由此证明了蒲桃树皮提取物具有抗菌活性。D.vila-Pea,N.Pea6等人对实验小鼠进行皮下注射，通过热板试验、福尔马林试验和握力试验，分别评估蒲桃提取物对热刺激性皮肤疼痛、炎症性皮肤疼痛和肌肉疼痛的镇痛效果，研究证明蒲桃提取物能对皮肤疼痛产生一个持久的镇痛效果，可媲美于吗啡。对炎症性皮肤疼痛，其疗效高于抗炎药双氯芬酸。在对抗肌肉疼痛方面，正常情况下并没有明显改变，但对于炎症引起的肌肉疼痛，蒲桃提取物可显着降低肌肉痛觉敏感度。由此表明了蒲桃提取物具有抗炎镇痛的药理作用。204蒲桃的用途4.1食用蒲桃果实为核果状浆果。果肉呈白色，味酸甜，水分较少，可供鲜食、制果膏果酱、制蜜饯等，果汁经发酵后还可制成饮料。此外，蒲桃始花期为2月，盛花期5月份，6月底为末期，但7月到12月仍保持开放少量花。可见蒲桃花期长且花量大，因此市场上又用蒲桃花窨制低档乌龙茶，制成花茶；且蒲桃花花粉花蜜均较多，香气浓，又可成为良好的蜜源1,2,13。4.2药用蒲桃与岗梅、铁包金等共同组成石岐外感凉茶，具有疏风清热、解暑消食、镇咳等功效，临床用于治疗外感发热、头痛、咳嗽等症状和预防流行性感冒14。蒲桃具有抗炎抗菌等功效，可用于治疗痘疮、肠炎、痢疾。蒲桃种子提取物具有降低血糖之功效，可用于治疗糖尿病。蒲桃果肉可治呃逆不止，肺胃虚寒所致咳嗽。海南蒲提取物对L6细胞砷中毒有缓解作用，可考虑将其应用到砷中毒的治疗当中15。4.3园林应用蒲桃属植物，桃金娘科，常绿乔木或灌木，树形优美，树冠茂密，生长快速，根系发达，具有强抗二氧化硫能力，可抗污染、防风，是良好的园林绿化树种，且其枝繁叶茂，花香淡雅，亦可作为园景观赏植物3。5黄酮的药理作用据各种文献及相关资粮记载，黄酮作为一类低分子的天然活性物质，具有对人体意义重大的多种生理活性。张永忠16等人使用四种不同浓度的异黄酮溶液进行对猪油的抗氧化实验，实验表明，异黄酮具有清除羟自由基、超氧阴离子自由基等作用，并且异黄酮中所含羟基个数及羟基位置的差异可能会影响其抗氧化能力。21黄酮具有抗肿瘤功效，可通过从多方面作用于肿瘤细胞而起到抑制肿瘤发生、增殖、迁移、侵袭等效果，包括抑制细胞周期、诱导细胞凋亡和影响细胞的信号传导等17。黄酮类物质对心血管系统也有明显的作用，其药理作用主要有抑制血小板功能以减少血小板聚集，降低甘油三酯、低密度脂蛋白等以调节血脂水平，防止过氧化的低密度脂蛋白损伤血管细胞，和预防动脉粥样硬化等方面18。此外，黄酮类化合物的共同药理作用还有抗炎、抗病毒、抗骨质疏松等19,20。6黄酮的提取方法黄酮类化合物存在植物体内种类繁多，状态不一，其对应的提取方法也各式各样，有溶剂提取法、超声提取法、超滤法、超临界流体萃取法、酶解法、微波提取法、大孔树脂吸附法等21-23。6.1溶剂提取法水提法由于提取效率差，杂质多，后处理繁杂，故不常用。常用的提取溶剂为甲醇和乙醇，而由于乙醇无毒安全性高，实际生产和研究中往往更倾向于乙醇。极性小的溶剂，如氯仿、乙醚等和高浓度的醇（90%95%）更适于提取苷元；苷类宜用极性较大的溶剂提取，如甲醇、乙醇、丙酮等，醇浓度为60%左右为宜。6.2超声提取法超声波提取原理是利用超声波在液体中产生“空穴作用”，破坏植物细胞和细胞膜结构，从而增加细胞内容物通过细胞膜的穿透能力，有助于黄酮类化合物的释放与溶出。超声波提取操作极其简便，设备装置简单，无需另置加热，提取效率高，可以避免高温对提取成分的破坏。6.3微波提取法微波提取法是利用微波（频率在300300,000MHz之间的电磁波）的高频电磁波穿透提取介质，加速被提取成分向提取溶剂界面的扩散速率，缩短提取22组分分子的扩散时间，提高提取速率。微波提取法环保、提取率高、速度快、节省溶剂、副产物少，可对其进行进一步的研究，扩大其在实际生产中的应用。6.4超临界流体萃取法超临界流体萃取法常使用CO2作为溶剂，其原理是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。CO2稳定、安全性高、无毒、来源广，该提取方法萃取速度快、效率高、且没有溶剂残留的问题存在，属于先进高效的新生技术，但是技术要求高、价格昂贵，目前还难以投入到实际大规模生产中。7蒲桃中总黄酮的研究展望蒲桃虽在传统使用中历史悠久，其在食用及园林绿化应用中较为常见，在民间使用频率也不低，但其并未编入中华人民共和国药典当中，在临床药物应用中频率低、范围窄，没有得到很好的推广使用。一直以来对蒲桃的研究处于不温不火的层面，至今还没有形成一个全面系统的研究成果。但我们也可以看到，近几年国内外对蒲桃的药理作用、化学成分鉴定、提取方法等方面的研究也在不断深入。随着化学用药副作用多、开发周期长、用药相对昂贵等缺点的日益显现，经济、来源广、纯天然的中药药物日益受到青睐。蒲桃在我国资源丰富，价廉易得，且安全性高，而黄酮类化合物具有多种对人体有利的生理活性，提取较易，且研究程度较高，因此，对蒲桃中的总黄酮进行研究开发利用具备一定的可行性和经济效益。目前所做的针对蒲桃药理的研究，多停留在蒲桃种子和蒲桃叶，对蒲桃茎的研究非常少，本次研究优化蒲桃茎中总黄酮的提取工艺，可以为蒲桃的药理研究、化学成分等提供可靠数据，使蒲桃得到更充分的开发利用。23参考文献1杜华波.热带亚热带果树蒲桃J.中国热带农业，2006，（02）：43.2温放，梁桂友.蒲