人类免疫缺陷病毒抗体测定标准操作规程

第 5 页 共 5 页 滁州市第一人民医院（南区）检验科 标准操作规程文件编号：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本：1滁州市第一人民医院（南区）检验科标准操作规程项目人类免疫缺陷病毒抗体测定方法（双抗原夹心法）文件编号CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本第1版编写者：郑昕审核者：陶良萍批准者：谢瑞玉批准日期：本规程自2016年11月1日起实施，每3年复审一次复审人：复审日期：文件分发部门和/或个人：医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任临床免疫室规程修订记录：修订号修订内容修订人修订日期1.原理采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆中的HIV1/HIV2型抗体。在微孔板预包被基因重组HIV(1+2)型抗原，当加入的待测样本中存在HIV抗体时，将反应形成抗原抗体复合物，再与加入的酶标记基因工程HIV(1+2)型抗原反应，最后形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。2.样品要求2.1病人准备事项准备事项具体内容禁食/特种饮食不要求禁食，但由于重度脂血可能干扰检测，禁食样品最佳。病人的准备事项安静状态下抽取静脉血，样品采集特殊要求采血时应一针见血，切忌反复穿刺，避免溶血2.2样品类型及处理方法样品类型血清或肝素、枸橼酸钠、EDTA抗凝血浆样品量最佳量5ml最少量3ml收集容器肝素抗凝管（绿帽）运输要求室温稳定性及储藏要求室温2小时冷藏温度（2-8C）4天-20C1月-70C6月标本制备4000转/分离心 5分钟制备血清/血浆标本拒收拒绝采集量不足、肉眼观察有溶血及抗凝剂类型不符的样品3.试剂名称规格储存条件有效期HIV预包被微孔板（包被基因工程HIV抗原）96人份28避光保存12个月HIV酶标抗原（含HRP标记基因工程HIV抗原）1支28避光保存12个月HIV-1型阳性对照（含HIV-1型抗体）1支28避光保存12个月HIV-2型阳性对照（含HIV-2型抗体）1支28避光保存12个月HIV抗体阴性对照（正常人血清）1支28避光保存12个月浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液）2瓶28避光保存12个月底物A(含H2O2)1支28避光保存12个月底物B（含TMB）1支28避光保存12个月终止液（含H2SO4）1支28避光保存12个月4.仪器名称厂家型号全自动酶标分析仪北京天石SM-35.方法性能5.1 特异性：阴、阳性参考品检出情况符合要求。5.2 灵敏度：各亚型的最低检出量符合要求。5.3 精密性：检测精密性参考品，CV15%（N=10）。5.4 稳定性：试剂盒内各组分，37放置6天，产品性能仍符合1-3项标准。6.质量控制6.1 设置阴、阳对照6.2 失控规则：阴性对照OD均值0.1或者阳性对照OD均值0.67.操作步骤 7.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温，微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。7.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀，浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。7.3 编号：取所需数量微孔条固定于支架，按顺序编号。7.4 加样：分别在相应孔中加入50ul阴、阳性对照血清和待测样本50ul。7.5 温育：封板后，置37温育60分钟。7.6 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干。7.7 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100ul。7.8 温育：封板后，置37温育30分钟。7.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干。7.8 显色：每孔加入底物A、B各50ul，混匀，置37温育30分钟。7.9 终止：每孔加入终止液50ul，混匀。7.10 测定：用酶标仪双波长450nm/630nm测定各孔OD值，并记录结果。8.结果判定 样本OD值S/C.O. 1者为HIV抗体反应初筛阳性 样本OD值S/C.O. 1者为HIV 抗体反应阴性 初筛阳性者应重新取样进行双孔复试，复试阳性者应按照“全国HIV检测管理规范”送HIV确认实验室进行相关确认试验。9.危急值及处理 无。10.临床意义 适用于HIV(1+2)型抗体的辅助诊断及献血员筛查。可以有效的减少疾病的传播扩散。12.干扰 溶血、高血脂、高胆红素样本有一定