HPLC标准操作规程.doc

HPLC标准操作规程1 HPLC日常维护规则：1. 流动相过滤头，在线过滤器的滤片定期拆下清洗（用水超声清洗，不超过15min）(一个月)2. 进样阀每天清洗，使用注射器吸取任意比例的甲醇水，向进针孔注入以上溶液，并不断扳动进样阀（若流动相中含有盐溶液，则先用水清洗后，再用任意比例的甲醇水清洗）3. 清洗柱塞杆：使用含有盐溶液的流动相以后需清洗柱塞杆。用滤纸（或其它易吸水的东西）接在泵头下面，用注射器向泵头后面的孔中注入清水4. 清洗单向阀：若单向阀堵塞，则将其拆下来，黑色滤片朝上，进出口单向阀各放在一个烧杯中，用水超声清洗，不超过15min1 HPLC操作规程1) 开机，先开组织器上开关，再开下边检测器与泵的开关；计算机上打开软件D-2000Elite,进行联机操作。即 初始化确定2) 点击模块的详细信息进行净化操作（打开排液阀），每个管路都要净化每隔2min手动设定泵的流速5ml/min，流动相平衡仪器3) 建立新的应用程序，新的方法文件，新的样品表，完成以上工作后，点击样品采集进入增图接口，待基线平衡后可以开始进样进行测试4) 进样时，进样阀需在Load状态下才可插入进样针，注入样品，然后快速将进样阀扳回injiect位置5) 所有样品测试完毕后，在【模块的详细信息】中手动关掉检测灯，在进行仪器的清洗6) 仪器清洗完毕后，关闭仪器时，先关泵再切断仪器点击确定关闭程序，关计算机，仪器从下到上依次关闭，最终切断电源7) 将进样阀扳至Load状态，盖好盖子2 色谱柱保存色谱柱保存在有机溶剂中，主要是100甲醇或高浓度的甲醇水中，拆下柱子，必须将柱子堵头盖上，拧紧，不能让柱子里干燥。色谱柱中不可用100水冲洗最高为5%的甲醇水3 开机前滤头清洗步骤所有滤头都放在甲醇中，使用之前的处理步骤：1.放入甲醇相中的可直接放置；2.放入水相中的滤头先用纯水冲洗干净，再放在干净纯水中进行purge操作，purge完后放入水相或缓冲盐中在进行purge；4 AFB1的测定条件a) 色谱柱：C18 (250mm4.6mm,5m)b) 流动相：甲醇+水=55+45c) 流速：0.8ml/mind) 检测波长：Ex:365nm Em:435nme) 进样体积：10lf) 连接柱后衍生装置g) 柱温：室温h) 出峰时间：保留时间12.5min5 FumB1的测定条件a) 色谱柱：C18 (250mm4.6mm,5m)b) 流动相：甲醇/NaH2PO4(0.1mol/L) c) 柱温：室温d) 检测波长：Ex:335nm Em:440nme) 流速：1.0ml/minf) 进样体积：20l g) 出峰时间：2022min6 液相使用规律：1. 四个管路ABCD,A管习惯放在甲醇中：B管放入水相中，C管放入乙腈，D管放入缓冲盐，每天试验完成后，四个管路及滤头放在甲醇中不保存，存放滤头的甲醇每15天更换一次2. 每次进样前，都要等上次样品完全跑完，基线跑平（即每分钟内上下波动不超过0.1）后在进下一针样