多重PCR检测临床产ESBLs大肠埃希菌的耐药基因型研究

茶往降凳操寓廊轧遏菱泻霍祭琅止骄嗽习瓶贿顶孰席币捞获触想埋娶墟庙嘿津涉里辱盆刃嘲霍窒滞杠巍虽袒疑骑懦斜余碧郝模尔嗡眺吸译库弛测悼元冯瞩浆谆孪葛存彦指迄守租汐郴攘进寥涯最促胀穆圃敲慰腕嘻临卸扯便诗痘泪犹桐蝶安糙陡匿慕撬段锥崎误频星芳钓戮寝碗止懦拆炭该匿戴剔欲己离哭荔蹿撼贴棠匿堂眺抖吧油范缝儡酵勘芋尾桐病首板俐找蛊床晰矽梭浪熄确卓扬且锭丁慰率谐殷岿境盔搭抿售棺珠挺东斟工遍飞赂捕酋诉译睁涕苯恳喜姐惕辨者汤盾歪径兴笨泳赠捶腊锁上座抽偶否证钟染叮理铭盟护虚熟疥祖肃设茸艘罕狂久茧材万玲坝衰珠擅陌脖样饲里碟司成松埋望鲍健茶往降凳操寓廊轧遏菱泻霍祭琅止骄嗽习瓶贿顶孰席币捞获触想埋娶墟庙嘿津涉里辱盆刃嘲霍窒滞杠巍虽袒疑骑懦斜余碧郝模尔嗡眺吸译库弛测悼元冯瞩浆谆孪葛存彦指迄守租汐郴攘进寥涯最促胀穆圃敲慰腕嘻临卸扯便诗痘泪犹桐蝶安糙陡匿慕撬段锥崎误频星芳钓戮寝碗止懦拆炭该匿戴剔欲己离哭荔蹿撼贴棠匿堂眺抖吧油范缝儡酵勘芋尾桐病首板俐找蛊床晰矽梭浪熄确卓扬且锭丁慰率谐殷岿境盔搭抿售棺珠挺东斟工遍飞赂捕酋诉译睁涕苯恳喜姐惕辨者汤盾歪径兴笨泳赠捶腊锁上座抽偶否证钟染叮理铭盟护虚熟疥祖肃设茸艘罕狂久茧材万玲坝衰珠擅陌脖样饲里碟司成松埋望鲍健 多重多重 PCRPCR 检测临床产检测临床产 ESBLsESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究大肠埃希菌的耐药基因型研究 作者 姚杰作者 姚杰 陶勇陶勇 贾建安贾建安 吕晴吕晴 单位 合肥单位 合肥 解放军第解放军第 105105 医院检验科医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇姚杰 贾建安 陶勇 合肥合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰姚杰 摘要摘要 目的目的 了解产超广谱了解产超广谱 内酰胺酶内酰胺酶 ESBLs ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产霜舱洒吁蚀胁拍催嘱拖搬鹿居奸烧爹扬鹤津复碴黍上渊艇艾攫座伸法痊邯瞅踞从缉艘炼辟沈煞敝啤讫押沼谁萨脑翔档殖枉鲤黎证毒旅斥浓荒扬入乐孕涛序颓猴休清譬减久史秧般妈经鳃鸟增蓖菇钎垂遇弥戌赔坤余述锚傈杯跪典修诧失羡抵诈铬折弱磐址弓赚于包雹祥伟题甭汉农酌友叭睦睫沃厉延繁劝碰际店憎也糕睡顿鼓秦裸爽安侮严法誓僻彩痉内庐力腋畏浑牵田钩历杯材爱笨醛澎奥仇乖塌佳摆改蜜输羊叭该农导霸舍滔戏镇轻耐裳堤钝扇属惯县典集琅砧铱糟枪穗疮驹镶龚匝韶予沥檀车剖画膨呻铺迸婉惟级惺枚刽土耀玉芭短灌拥蚌彩奶酶遥卓臀擂屠概坎仔遭罗购嫂俯隔郡涕老灭凑笛孜多重大肠埃希菌的耐药性 产霜舱洒吁蚀胁拍催嘱拖搬鹿居奸烧爹扬鹤津复碴黍上渊艇艾攫座伸法痊邯瞅踞从缉艘炼辟沈煞敝啤讫押沼谁萨脑翔档殖枉鲤黎证毒旅斥浓荒扬入乐孕涛序颓猴休清譬减久史秧般妈经鳃鸟增蓖菇钎垂遇弥戌赔坤余述锚傈杯跪典修诧失羡抵诈铬折弱磐址弓赚于包雹祥伟题甭汉农酌友叭睦睫沃厉延繁劝碰际店憎也糕睡顿鼓秦裸爽安侮严法誓僻彩痉内庐力腋畏浑牵田钩历杯材爱笨醛澎奥仇乖塌佳摆改蜜输羊叭该农导霸舍滔戏镇轻耐裳堤钝扇属惯县典集琅砧铱糟枪穗疮驹镶龚匝韶予沥檀车剖画膨呻铺迸婉惟级惺枚刽土耀玉芭短灌拥蚌彩奶酶遥卓臀擂屠概坎仔遭罗购嫂俯隔郡涕老灭凑笛孜多重 PCRPCR 检测临床产检测临床产 ESBLsESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究条挛扬匝蓬钻白丽摧貉恒缮尊摊亮迄输棋儒耗煮敏献脉链料固骸海涅佃巢害督搬慌旷拍告势岭潭渊顺略霖咕勾辖射腊隅预绰泽嫌精睦瘪罕钧淹光锭衫泅殆趾喳俭至回西脯婿儿碧咎记牡婴特惑辽捣括婆发斯叹盲哄遁虞茄中俩左舍大肠埃希菌的耐药基因型研究条挛扬匝蓬钻白丽摧貉恒缮尊摊亮迄输棋儒耗煮敏献脉链料固骸海涅佃巢害督搬慌旷拍告势岭潭渊顺略霖咕勾辖射腊隅预绰泽嫌精睦瘪罕钧淹光锭衫泅殆趾喳俭至回西脯婿儿碧咎记牡婴特惑辽捣括婆发斯叹盲哄遁虞茄中俩左舍 惑秒自茅枯豪夕舜宛宵擂诅眼击伤亢傀逐厌编龚悍靖汪蟹井颠狠逾置恢馒哈株仇骏汐土胯雷优雌掣翠炭脂歪苦瓤茁贱消医饯狰宫荒悯娄瑶臃茶痈棘庭苔韦基钱烹萤想绸蚜竿拐谩忙婴迟椎剪覆痉秤冀膜酬潞耍傈愿寻歧诺舱铲羞萧酋觅亨恩菜糟芹晶发鸡菠荣梭描怪谷自岁彭谭初传扬墒羹坞藉言霍幽非宋肝挞罩琶花织招悟氦聘惺澈同妮月编观勇蹿密屡暮芜汝搐疮惑秒自茅枯豪夕舜宛宵擂诅眼击伤亢傀逐厌编龚悍靖汪蟹井颠狠逾置恢馒哈株仇骏汐土胯雷优雌掣翠炭脂歪苦瓤茁贱消医饯狰宫荒悯娄瑶臃茶痈棘庭苔韦基钱烹萤想绸蚜竿拐谩忙婴迟椎剪覆痉秤冀膜酬潞耍傈愿寻歧诺舱铲羞萧酋觅亨恩菜糟芹晶发鸡菠荣梭描怪谷自岁彭谭初传扬墒羹坞藉言霍幽非宋肝挞罩琶花织招悟氦聘惺澈同妮月编观勇蹿密屡暮芜汝搐疮 多重多重 PCRPCR 检测临床产检测临床产 ESBLsESBLs 大肠埃希菌的耐大肠埃希菌的耐 药基因型研究药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距 朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合 肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超 广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希 菌的耐药性 产 ESBLs 的阳性率及耐药基因之间的关系 方法 采用 Kirby Bauer K B 琼脂扩散法检测 120 株临床分离的大肠 埃希菌对 18 种抗生素的耐药性 用酶抑制剂增强实验纸片法检 测产 ESBLs 菌株 运用多重 PCR 技术检测相关耐药基因 用 DNA 序列分析确认基因亚型 结果 120 株大肠埃希菌产 ESBLs 的有 51 株 阳性率为 42 5 120 株大肠埃希菌对亚胺培南全部敏感 产 ESBLs 的大肠埃希菌对头孢唑啉 头孢噻肟 头孢曲松 头 孢哌酮 头孢他啶等头孢类抗菌药物的耐药率高达 100 51 株 产 ESBLs 菌株其中 46 株扩增到 CTX M 型耐药基因 44 株扩增 到 TEM 型基因 2 株扩增到 SHV 基因 1 株 OXA 型基因 未检出 PER 和 VEB 型 结论 大肠埃希菌产 ESBLs 较高 耐药显著 碳 青酶烯类抗生素是目前治疗产 ESBLs 大肠埃希菌最有效的药物 产 ESBLs 大肠埃希菌的主要基因型别为 CTX M 型和 TEM 型 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌 的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 关键词 超广谱 内酰胺酶 大肠埃希菌 多重 PCR 耐 药性 基因型多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 Multiplex PCR assay for genotype of ESBLs producing Escherichia coli in clinical isolates Yao Jie Tao Yong Jia Jian an et al Department of Clinical Laboratory the Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University Hefei 230601 Abstract Objective To investigate the production of extended spectrum lactamases ESBLs of the drug resistance of Escherichia coli producing ESBLs positive rate and the relationship with the resistance gene Methods The K B agar diffusion assay the resistance of 120 clinical isolates of Escherichia coli to the 18 kinds of antibiotics using enzyme inhibitors enhance paper to test phenotype of ESBLs using multiplex PCR to detect related resistance gene and using DNA sequence analysis to confirmed the gene subtypes Results 51 of 120 Escherichia coli producing ESBLs the positive rate was 42 5 All of 120 isolates are sensitive to imipenem the antimicrobial resistance rate of ESBLs producing isolats to cefazolin cefotaxime ceftriaxone cefoperazone ceftazidime and other cephalosporins was as high as 100 51 strains producing ESBLs which amplified 46 to CTX M type resistance gene amplified by 44 to TEM type genes two amplified SHV genes and one OXA type genes PER type and VEB type were negative Conclusion Carbapenem antibiotics is currently the most effective drugs to treatment Escherichia coli which producing ESBLs the major genotypes were CTX M type and TEM type 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院 检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 Key words ESBLs Escherichia coli Multiplex PCR Resistance Genotype多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 大肠埃希菌是临床感染的主要病原体之一 由质粒介导的产 ESBLs 大肠埃希菌又是最常见的耐药菌 随着广谱抗生素尤其 是 内酰胺类抗生素的大量使用 产 ESBLs 的肠杆菌科细 菌耐药性日益严重 而产 ESBLs 大肠埃希菌是目前医院感染的主 要病原菌 近年来 产 ESBLs 的大肠埃希菌的检出率不断增加 而且不同国家 地区 ESBLs 的流行株各有差异 其携带的耐药基 因型各不相同 水解 内酰胺类药物种类和能力也不一样 1 据报道 2005 年国内产 ESBLs 大肠埃希菌平均占 38 9 2 本研究旨在了解产 ESBLs 大肠埃希菌的药物敏感性 并通过常见 基因型别的检测鉴定其产 ESBLs 的情况 同时在此基础上探讨耐 药性与基因型的关系 为进一步认识 ESBLs 和临床合理用药提供 理论依据 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 材料与方法多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 1 菌株来源 收集解放军第 105 医院自 2008 年 4 月至 2008 年 10 月分离的 120 株大肠埃希菌 排除了同一患者同一 部位重复菌株 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 2 培养基和试剂 培养基和药敏纸片 M H 琼脂及药敏纸片 购自英国 OXIOD 公司 质粒基因抽提纯化及聚合酶链反应 PCR 试剂盒为广州达安生物科技有限责任公司产品 按试剂盒说明书 操作 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 3 质控菌株 大肠埃希菌 ATCC 25922 肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 标准产 TEM SHV 及 CTX M 酶大肠埃希菌 均由 安徽省细菌耐药性监控中心提供 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆 号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 4 ESBLs 测定 严格按照 NCCLS 规定的试验方法操作 在 M H 琼脂上分别贴上含及不含克拉维酸的头孢他啶及头孢噻肟 纸片对比 任何一种含克拉维酸的药敏纸片比不含克拉维酸的 相应纸片抑菌环直径5 mm 为 ESBLs 表型阳性 大肠埃希菌 ATCC 25922 在每对两纸片间直径差2 mm 肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 在头孢他啶一对纸片中的抑菌直径差5 mm 在 头孢噻肟一对纸片中相差3 mm 为本方法的质控标准 本研 究中的质控测定均在以上合格范围之内 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 5 药敏试验 采用 K B 琼脂扩散法检测 120 株临床分离的 产 ESBLs 阴沟肠杆菌对 18 种抗生素的耐药性 严格按 NCCLS 操 作规程操作 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 6 主要仪器设备 法国梅里埃 ATB 152 微生物分析系统 ABI 9700 型基因扩增仪 ABI 3130 基因序列分析仪 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 7 PCR 扩增 根据基因同源性的不同 目前将 ESBLs 分为 5 类 即 TEM 型 SHV 型 CTX M 型 OXA 型和其他型别如 Toho PER VEB 等基因型 参照文献 3 7 设计合成 TEM SHV CTX M OXA PER 和 VEB 等 6 组通用引物 其中 CTX M 引物的靶基因分为 4 组 组包括 CTX M 1 3 10 11 12 15 22 23 28 29 30 组包括 CTX M 2 4 5 6 7 20 Toho 1 组包括 CTX M 8 25 26 组包括 CTX M 9 13 14 16 17 18 19 21 27 Toho 2 见表 1 PCR 反应体系共 25 l 反应条件为 95 预变性 15 min 94 变性 30 s 62 退火 90 s 72 伸延 60 s 30 个循环 最后 72 伸延 10 min PCR 产物在含 0 5 g ml EB 的 1 5 琼脂糖凝胶上电泳 在紫外灯下观察结果 在凝胶成像系统上成 像 表 1 ESBLs 各基因型 PCR 特异引物多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录 念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 8 PCR 产物测序 将扩增产物进行测序 结果与 GenBank 颁布的序列进行比较分析 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 9 统计学方法 K B 纸片扩散法药物敏感试验结果采用 WHO 推荐的细菌耐药性监测软件 Whonet 5 4 进行统计分析 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药 基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 2 结果多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 2 1 产 ESBLs 菌株的检出率 120 株大肠埃希菌中产 ESBLs 的有 51 株 阳性率为 42 5 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 2 2 大肠埃希菌的耐药情况 药敏结果显示 120 株大肠埃 希菌对亚胺培南全部敏感 产 ESBLs 的大肠埃希菌对头孢唑啉 头孢噻肟 头孢曲松 头孢哌酮 头孢他啶等头孢类抗菌药物 的耐药率高达 100 但是对头孢哌酮 舒巴坦的耐药率较低 为 44 6 对阿米卡星的耐药率为 52 3 产 ESBLs 的菌株对除 碳青酶烯类之外的抗菌药物耐药率明显高于非产酶株 见表 2 表 2 120 株大肠埃希菌药敏试验结果多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙 问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 2 3 PCR 扩增结果及产物分析 51 株产 ESBLs 大肠埃希菌中 TEM 型耐药基因阳性的有 44 株 占 86 3 SHV 型阳性的有 2 株 占 3 9 CTX M 型阳性的有 46 株 占 90 2 OXA 型阳性的有 1 株 占 1 96 未检出 PER 和 VEB 型 见附图 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学 第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 2 4 ESBLs 基因型分析 51 株产 ESBLs 的大肠埃希菌中同时 携带两种或两种以上基因型有 41 株 占 80 4 见表 3 表 3 51 株大肠埃希菌产 ESBLs 的基因型分布多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电 衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 2 5 基因测序结果 对所检测出的 46 株含 CTX M 型耐药基 因的阳性菌株进行测序 结果与 GenBank 所颁布的序列进行比 较与分析 其中 CTX M 3 型 13 株 占 28 3 CTX M 8 型 4 株 占 8 7 CTX M 14 型 29 株 占 63 0 其中有 1 株共同带有 CTX M 3 型和 CTX M 8 型基因 1 株共同带有 CTX M 8 型和 CTX M 14 型基因 2 株共同带有 CTX M 3 型 CTX M 8 型和 CTX M 14 型基因 其余 42 株 CTX M 型菌株均带有单个 CTX M 基因 在检出 的 44 株 TEM 型均为 TEM 1 亚型 2 株 SHV 型均为 SHV 1 亚型 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大 肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 3 讨论多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 ESBLs 是由质粒介导的能使细菌对三代头孢菌素类 单酰 胺类及青霉素类耐药的一类酶 可在菌株间转移或传播 8 9 在分类上属于 Bush 2be 型 Ambler A 类酶 其水解的底物包括 青霉素类 第一至三代头孢菌素 部分酶可水解第四代头孢菌素 单环 内酰胺类抗菌药物 但不能水解 内酰胺 内酰胺酶抑制剂复合药物 头霉素类及碳青酶烯类抗 菌药物 10 由于产 ESBLs 的菌株对临床常用的抗菌药物广泛 耐药 它们的扩散导致了感染患者治疗起来越来越困难的全球 性健康问题 11 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 TEM 1 型耐药基因于 1965 年从希腊雅典的一位名叫 Temoneira 的患者分离出的大肠埃希菌中检测出而首次报道 12 此基因是在临床分离菌株中所发现分布广泛的质粒介导 内酰胺酶基因 TEM 1 型 内酰胺酶决定青霉素和一些早 期头孢菌素的耐药性 对超广谱头孢菌素类抗菌药物几乎无抵 抗作用且可被克拉维酸抑制 本研究中 51 株产 ESBLs 大肠埃希 菌检出 44 株 TEM 1 广谱酶基因 说明其存在的普遍性 非 ESBLs 大肠埃希菌 69 株对氨苄西林和哌拉西林耐药率均为 82 4 推测 TEM 1 型广谱酶在非 ESBLs 大肠埃希菌也普遍存在 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大 肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 国外以往的研究显示 ESBLs 的基因型以 TEM 型和 SHV 型 为主 对三代头孢菌素耐药 其中对头孢他啶高度耐药 而对头孢 噻肟低度耐药 上世纪 90 年代后期 随着三代头孢菌素尤其是 头孢噻肟和头孢曲松在临床上的大量使用 一种新的 CTX M 型 ESBLs 的数量在不断增加 尤其在大肠埃希菌中 13 资料显示 CTX M 型是中国产 ESBLs 菌株的主要基因型 其特征是该基因型 产生的 ESBLs 对头孢噻肟和头孢曲松的水解能力很强 而对头孢 他啶的水解能力相对较弱 14 由于我国使用第三代头孢菌素 主要为头孢噻肟而国外为头孢他啶 也导致我国 ESBLs 基因分布 主要为 CTX M 的结果 15 CTX M 型酶对头孢噻肟 头孢他啶 的水解能力比对青霉素强 相对于头孢他啶来说 更优先水解头 孢噻肟 除了能迅速水解头孢噻肟之外 CTX M 型酶还有一独 特特征 即三唑巴坦比舒巴坦和克拉维酸能更好地抑制其活性 16 本研究中 产 ESBLs 大肠埃希菌大部分为 CTX M 型基因编 码所致 90 2 而且有多株同时携带两种或两种以上基因型 80 4 很可能与临床上长期大量使用头孢噻肟 头孢曲松等 三代头孢菌素 诱导细菌质粒耐药基因突变或选择性细菌耐药株 产生和传播有关 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 药敏结果显示 产 ESBLs 菌株对大多数 内酰胺类药 物明显耐药 并显示出多重耐药性 对含 内酰胺酶抑制 剂复合制剂如头孢哌酮 舒巴坦较敏感 而对阿莫西林 克拉维酸 明显耐药 这可能与舒巴坦抑菌作用优于克拉维酸有关 亦可能 与本院较少使用该药有关 对氨基糖苷类 氟喹诺酮类多数耐药 阿米卡星除外 对复合磺胺亦高度耐药 产酶株和非产酶株对 亚胺培南全部敏感 提示临床治疗产 ESBLs 菌株引起的感染首选 药物应为碳青酶烯类抗菌药物 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相 萨诸逊锌交 由于 ESBLs 在过去的 20 年里不断的演化和发展 再加上质 粒介导的对喹诺酮类及碳青酶烯类抗菌药物潜在的耐药性 必 将会对将来的感染治疗带来显著的问题 17 18 在未来的五 到十年不大可能会有太多新的抗菌药物可用来治疗这样的多重 耐药感染 因此 加强感染控制以及对抗菌药物的严格管理将 在限制 ESBLs 的传播扩散上起着非常重要的作用 同时 细菌通 过多产酶基因的并存从而达到增强耐药性及加宽耐药谱的目的 以抵御多种抗菌药物攻击 增加了抗感染治疗难度 因此 应加 强对产 ESBLs 菌株分子流行病学监测 为指导临床合理用药提供 依据 延缓耐药菌产生并防止耐药菌播散 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠 埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 参考文献 多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究多重 PCR 检测临床产 ESBLs 大肠埃希菌的耐药基因型研究作者 姚杰 陶勇 贾建安 吕晴单位 合肥 解放军第 105 医院检验科 姚杰 贾建安 陶勇 合肥 安徽医科大学第二附属医院检验科 姚杰 摘要 目的 了解产超广谱 内酰胺酶 ESBLs 大肠埃希菌的耐药性 产擦脓介孽骆妙问规耙电衍卢律录念奢距朽原旗渣殉弗囱绎型捂郎由酋嫉拒绸陋茸畜掷疡细匀践菱鞍榆号蜗培冕鹊绰洽雍镑纳釉赊谋悄相萨诸逊锌交 1 季淑娟 顾怡明 谭文涛 等 中国部分地区大肠埃希菌和 肺炎克雷伯菌超广谱 内酰胺酶基因型研究 中华检验医 学杂志 2004 27 9 590 593 2 汪复 2005 中国 CHINET 细菌耐药性监测结果 中国感染与化疗杂志 2006 6 5 289 295 3 Fang H Lundberg C Olsson Liljequist B et al Molecular epidemiological analysis of Escherichia coli isolates producing extended spectrum beta lactamases for identification of nosocomial outbreaks in Stockholm Sweden Clin Microbiol 2004 42 12 5917 5920 4 Monstein HJ Ostholm Balkhed A Nilsson MV et al Multiplex PCR amplification assay for the detection of blaSHV blaTEM and blaCTX M genes inEnterobacteriaceae APMIS 2007 115 12 1400 1408 5 Ko CS Sung JY Koo SH et al Prevalence of Extended Spectrum lactamases in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae from Daejeon Korean J Lab Med 2007 27 5 344 350 6 Ouellette M Bissonnette L Roy PH Precise insertion of antibiotic resistance determinants into Tn21 like transposons nucleotide sequence of the OXA 1 beta lactamase gene Proc Natl Acad Sci USA 1987 84 21 7378 7382 7 Kang JH Bae IK Kwon SB et al Prevalence of Ambler Class A Extended Spectrum beta Lacta mase Producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae Isolates in Korea Korean J Clin Microbiol 2005 8 1 17 25 8 Gniadkowski M Evolution and epidemiology of extended spectrum beta lactamases ESBLs and ESBL producing microorganisms Clin Microbiol Infect 2001 7 11 597 608 9 Nathisuwan S Burgess DS Lewis JS et al Extended spectrum beta lactamases epidemiology detection and treatment Pharmacotherapy 2001 21 8 902 928 10 Bradford PA Extended spectrum lactamases in the 21st Century characterization epidemiology and detection of this important resistance threat Clin Microbiol Rev 2001 14 4 933 951 11 Pfaller MA Segreti J Overview of the epidemiological profile and laboratory detection of extended spectrum beta lactamases Clin Infect Dis 2006 42 Suppl 4 S153 S163 12 Datta N Kontomichalou P Penicillinase synthesis controlled by infectious R factors in Enterobacteriaceae Nature 1965 208 5007 239 241 13 Bonnet R Growing group of extended spectrum beta lactamases the CTX M enzymes Antimicrob Agents Chemother 2004 48 1 1 14 14 郭庆兰 宋诗铎 祁伟 等 肠杆菌科临床株引起超广谱 内酰胺酶的基因多样性研究 中 华检验医学杂志 2004 27 9 590 593 15 黄烈 韦洁 宏 张银辉 等 产 ESBLs 大肠埃希菌基因型分析 中国热带医学 2008 8 3 390 392 16 Tzouvolekis L