血型鉴定、交叉配血操作规程

ABO、Rh-D血型鉴定操作规程1.目的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采血2ml抗凝血,避免溶血试剂3. 试剂：长春博讯生物技术有限责任公司4.方法原理【原理】:标准血清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表面相应的抗原在盐水介质中发生特异性的凝集反应。根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。5. 操作:一、玻片法(一般只能做正定型)【正定型】:1、取一张玻片,用蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每一等份左上角标明A、B、D,2、对应加入抗A和抗B抗D标准血清一滴;3、分别加PC(患者1015%红细胞悬液);4、用洁净竹签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2大小;5、轻轻地连续倾斜转动玻片25分钟,观察并记录;【解释】:A端凝集为A型血;B端凝集为B型血;A、B端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,无凝集则为RH阴性。备注:玻片法可作为ABO血型初筛或复检;不适用于抗体鉴定和交叉配血;不适合检测ABO亚型。二、试管法(盐水介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者血清(血浆)中相应的抗体发生特异性结合,形成肉眼可见的凝集反应,从而可推断出受检者的血型。【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可自行新鲜配制);2、受试者血清或血清;3、洁净康氏试管。【正定型】:1、取二支洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加入抗A和抗B血清1滴;3、分别加入病人红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集,则为O型血;抗A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B型血。【反定型】:1、取二支试管分别记上AC和BC;2、分别加入病人血清;3、对应加入A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果;【解释】:首先检查上清液有无溶血,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型血;A、B管均不凝集则为AB型血;A管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。3.卡式法(微柱凝胶技术)【原理】:在含有中性胶的微柱管中相继加入红细胞抗体和红细胞,孵育后相应的抗原和抗体则形成免疫复合物,利用凝胶分子排阻原理在一定的离心力下,该复合物不能通过凝胶间隙浮于胶表面或悬于胶中. 无相应的抗原和抗体,则不能形成免疫复合物, 在一定的离心力下,分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。可用于ABO血型正反定型,RH血型检测或其它应用完全性抗体的血型检测。【试剂】:血型检测卡 ABO试剂红细胞【正定型】:在含有红细胞抗体的微柱凝胶管中加入待检红细胞, 孵育后离心观察结果。分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部,凝集的红细胞不能通过凝胶间隙浮于胶表面或悬于胶中。【解释】:抗A、抗B管均凝集(浮于胶表面或悬于胶中),受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集(沉于微柱腔底部),则为O型血;抗A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B 型血。【反定型】:将抗原吸附在红细胞表面,检测与其相应抗体发生的凝集反应。在ABO血型反定型试验中,将人A或B型血型多糖抗原经媒介化合物联结到O型红细胞上(可长期保存),然后将该具有A型抗原或B型抗原红细胞分别与被检血清在微柱凝胶中反应,检测被检血清中ABO抗体.【解释】:A、B管均凝集受试者为O型血(浮于胶表面或悬于胶中);A、B管均不凝集则为AB型血(沉于微柱腔底部);A管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。交叉配血操作规程交叉配血的目的是确保为病人选择合适的血液和测定受试者血清中有无任何不规则的抗体,防止输血后产生溶血性输血反应。交叉配血有两类即主侧交叉、次侧交叉,交叉配血实验的结果,主侧是绝对不可以有凝集和溶血现象,次侧在A或B型人输入O型血时,可以有凝集现象,但不可以有溶血现象。一、盐水交叉配血实验(试管法)【原理】:完全抗体(lgM)在盐水介质中能和相应的抗原发生免疫反应,形成肉眼可见的凝集反应。【试剂】:生理盐水【方法】:1、用生理盐水将受血者红细胞制备2%-5%红细胞悬液;2、从供血者血液保存袋上的辫子中获取少量血样,分离血清,生理盐水三洗红细胞,并用生生理盐水将供血者红细胞制备2%-5%的红细胞悬液;3、取洁净塑料试管2支,标明“主侧”“次侧”;4、按标记“主侧”管加受血者血清2滴,加供血者红细胞悬液1滴。“次侧”管加供血者血清2滴,加受血者红细胞悬液1滴。混匀。以1000g(3400r/min)离心15秒,轻轻晃动试管,肉眼观察结果【解释】:两管无凝集,表明ABO血型配血相合。该法主要用于检出是否有ABO血型定型错误,无法检出由于免疫而产生的不完全抗体。若不能明显判定为阴性,可通过显微镜进一步判读,镜下无凝集为阴性。若在室温下操作注意冷凝集影响试验结果。二、凝聚胺交叉配血法【原理】:凝聚胺(Polybrene)是一种大分子阳离子物质,溶解后产生很多正电荷,可以中和红细胞表面的负电荷,使红细胞发生非特异性凝聚,然后再加入解凝聚液(Pesuspending)中和凝聚胺,使正常红细胞重新解聚散开,此时实验结果为阳性;若红细胞被相应的抗体结合,凝聚就不会散开,实验结果为阳性。【材料】:1、受、供血者血清或EDTA抗凝血浆;2、受、供血者35%的红细胞悬液;3、凝聚胺试剂盒(包括低离子介质LIM,凝聚胺溶液,重悬液)。【方法】:1、试管两支,分别表明主、次侧,主侧加受血者血球或血浆2滴,供血者红悬液1滴,次侧管反之;2、立即以1000g离心,观察结果。若阴性则继续试验;若阳性则需分析原因排除干扰后继续后续试验。3、各加低离子液(LIM)0.6ml混匀,室温放置1min。4、再各加凝聚胺溶液2滴;立即以1000g离心1min,弃去试管中液体,轻摇试管观察红细胞凝集情况。若有凝集出现则继续操作,若没有凝集出现则该试验无效。5、加入1滴重悬液,轻摇试管,肉眼观察结果。【解释】1min内凝集消失为聚凝胺试验阴性,1min内凝集不消失为聚凝胺试验阳性。该法简便、快速、灵敏度高、价格适中,且不需特殊设备。该法除交叉配血外,还可用于血型鉴定,不完全抗体筛选等。非常适合于基层医院选用。加入重悬液后应尽快观察结果以免弱反应消失。三、卡式配血(微柱凝胶技术)【原理】:微柱凝胶技术是利用抗原抗体反应与凝胶分了筛技术相结合的产物.通过调节葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径的大小,使分子筛只允许游离红细胞通过,从而达到分离凝集红细胞和游离红细胞的目的。即:将红细胞和血清加在凝胶的上部反应,离心以后,凝集红细胞将受到凝胶的阻碍而停留在凝胶的上部或凝胶中,则证明发生凝集反应,可判为凝集反应阳性,反之,所有红细胞都停留在凝胶底部,证明未发生凝集反应,则可判为凝集反应阴性。（共八管）【材料】:1、受、供血者血清或EDTA抗凝血浆;2、受、供血者35%的红细胞悬液;3、抗人球蛋白交叉配血卡;ABD血型鉴定：（A B Rh三个管）【方法】：1、向A、B、D三个管中滴1滴受血者红细胞悬液。2、37孵育15分钟。3、离心10分钟,判断结果。不规则抗体操作（、三个管）【原理】:选择已知抗体筛查细胞抗原来检测血清中的抗体,用凝胶微柱可清晰地显示出来。【材料】:1、抗体筛查细胞（标准A、B、O细胞悬液）。2、受检者血清;【方法】:1.三管中分别加入抗体筛查、细胞各50ul。2.三管中均加入25ul待检样本血浆或血清3.37孵育15分钟。4.离心,判断结果。【解释】:如在第二管中出现阳性反应,而第一管中出现阴性反应,或者与第二管阳性反应比呈明显的弱阳性反应,提示该待检血清中存在该细胞特异性抗体;如两管都出