茯苓新品种选育与袋料高效栽培技术研究.doc

“茯苓新品种选育与袋料高效栽培技术研究”获科学技术成果鉴定证书湘科鉴委字 2009 第036号 受湖南省科技厅委托，由湖南省怀化市科技局主持，于2009年6月17-18日组织专家在湖南省靖州苗族侗族自治县召开了由靖州苗族侗族自治县茯苓专业协会、靖州苗族侗族自治县科技推广中心、靖州苗族侗族自治县农业技术推广中心3个单位完成的“茯苓新品种选育与袋料高效栽培技术研究”科技成果鉴定会。鉴定委员会专家通过听取汇报、审阅材料与现场测试，经质疑和认真讨论，鉴定结果一致认为：茯苓新品种“湘靖28”具有结苓早，结苓率达96%，生物转化率高，氨基酸、多糖含量高，抗病虫害能力强的特点；茯苓袋料栽培技术产量明显高于传统的段木栽培，同时缩短了生长周期，减少了白蚁危害与杂菌污染，提高了对松木原料的利用率，具有优质、高产、高抗等特点。该成果达到同类研究国内领先水平。1、茯苓新菌种湘靖28的选育：2002年3月茯苓新品种选育与袋料高效栽培课题组在靖州县甘棠镇乐群村八组山上采到一株野生茯苓，经组织培养，菌核分离，将分离的菌丝体进行提纯，复壮核配选优劣汰，选育出了适宜袋料栽培和不需断根栽培的湘靖28新菌株。湘靖28茯苓菌株，菌丝体粗壮，白色，锁状联合体明显。菌丝在种植过程中传引快。结苓早，苓体比较均匀结实，肉质白色或浅黄色，苓皮薄，呈紫红色。湘靖28茯苓菌株与原“578”比较，具有遗传性状稳定、抗杂菌感染能力强，菌丝传引快，菌丝锁状联合体粗壮，结苓早，苓体均匀结实，皮薄，生物学效率高，产量高，质量好等优点。2、茯苓袋料高效栽培技术研究：选择新鲜无腐烂霉变的松树的根、蔸、尾尖、枝条、加工后的边角料、松木屑，锯成33-35cm长，削去粗皮晒干，用小铁丝扎成捆，每捆重5kg左右，另加配料：全干松木屑77%、麦皮或米糠20%、白糖1%、石膏1%、过磷酸钙0.5%、化学纯硫酸镁0.5%、水110-120%作辅料使用。将扎成捆的干菌材放入干净的清水中浸泡10-12小时，捞起沥干多余水份，使材料中的含水量达到60%，将所需配料充分拌匀，保持料内含水量60%进行装袋。用高压聚乙烯塑料袋，袋底垫入部分配料，将菌材装入袋中，袋内上部同样装入部分配料，扎紧口袋，进行高温灭菌。在0.15kg压力下保持4-5小时，常压灭菌温度达到100后，旺火保持14-16小时，匀火再闷6-8小时。将灭菌好的袋料从灭菌锅内取出，放入洁净的操作房间内，当袋料内温度降到28以下时，搬入接种室或接种箱内，在无菌条件下进行接种，每袋料接种100-150g，接种好后扎好袋口及时放入培养室内进行培养，保持室内温度26-28恒温培养。20-30天菌丝长满全袋后，即可下地覆土管理结苓。选择向阳，土壤疏松，PH4.56.5，排水良好的果园地、阔叶林地、旱地或房前屋后的空坪隙地，清除场内杂草，深耕30-40cm、，按宽1米左右开厢，厢长不限，厢向与坡面垂直，厢与厢之间开20-30cm宽、深30-40cm的排水沟兼耕作道，土要整细。将长满菌丝的菌袋一头把薄膜划开一条口子，插进一根全新鲜、长30cm的小松树枝（或松树根）作引木，和菌袋一起横放入土中，每排放两包菌袋，插有引木的放两头，菌袋之间间隔30-40cm，每亩排放30003300袋，再盖土1012cm。诱杀白蚁：按每亩周围选择不同方位挖4-6个长宽各1米、深0.60.8m的土坑，坑内堆放一些茶油枯和培养料及菌种，喷施敌百虫或敌敌畏或佳天下，上面盖一些新鲜松叶枝，再盖好土，对白蚁进行诱杀。菌袋下地后要防长期高温、干旱或阴雨，采取地表覆盖、浇水、开好排水沟等办法调节温湿度，保持料内温度2632，土壤含水量在60%左右。菌袋下地15-20天后就开始结苓。结苓后要经常检查，及时培土，保持土壤疏松和适宜的含水量。在正常的温、湿条件下，经100-120天茯苓陆续生长成熟，特征是结苓处的土层和茯苓表皮没有新的裂纹出现，苓蒂与木质易松脱，证明茯苓已生长成熟，要及时采收。因结苓有迟早，应成熟一批，采收一批。茯苓栽培技术（一）植物特性茯苓多寄生于马尾松或段木上，其生长发育可分为两个阶段：即菌丝（白色丝状物）阶段和菌核阶段。菌丝生长阶段，主要是菌丝从木材表面吸收水分和营养，同时分泌酶来分解和转化木材中的有机质（纤维素），使菌丝蔓延在木材中旺盛生长。第二阶段是菌丝至中后期聚结成团，逐渐形成菌核（亦称结等）。结苓大小与菌种的优劣、营养条件和温度、湿度等环境因子有密切关系。不同品种的菌种，结苓的时间长短也不同，有的品种栽后34个月开始结苓，有些则较慢，需67个月。早熟种栽后910个月即可收获，晚熟的品种则需1214个月。（二）生长特性 茯苓喜温暖、干燥、向阳，忌北风吹刮，以海拔在700米左右的松林中分布最广。温度以1035为宜。菌丝在1530均能生长，但以2028较适宜。当温度降到5或升到25以上，菌丝生长受到抑制，但尚能忍受-15的短期低温不致于冻死。土壤以排水良好、疏松通气、沙多泥少的夹沙土（含沙6070）为好，土层以5080厘米深厚、上松下实、含水量25、pH56的微酸性土壤最适宜菌丝生长。切忌碱性土壤。（三）栽培技术1备料 茯苓生长的营养主要靠菌丝在松树的根和树干中蔓延生长，并分解和吸收其中养分和水分之特点，选用松树作为茯苓的生活原料。为了充分发挥松树的利用效率，目前生产上主要采用椴木栽培和树蔸栽培两种方法。（1）段木备料 每年1012月松树砍伐后，立即修去树桠及削皮留筋，具体要留几条筋，要看树的大小而定，削皮要露出木质部，顺木将树皮相间纵削（不削不铲的一条称为筋），各宽46厘米，削皮留筋后全株放在山上干燥。经半个月以后，将木料锯成长约80厘米的小段，然后就地在向阳处难叠成“井”字形，待敲之发出清脆响声，两端无松脂分泌时即可供用。（2）树蔸备料 即利用伐木后留下的树蔸作材料。在秋、冬季节伐松树时，选择直径12厘米以上的树桩，将周围地面杂草和灌木砍掉，深挖4050厘米，让树桩和根部暴露在土外，然后在树桩上部分别铲皮46向，留下4-6条约36厘米宽未铲皮的筋（也叫引线）。树桩下的粗大树根也可用来栽茯苓，每条树根铲皮3向，留3条引线。根留115厘米长，过长即截断不要，使树蔸得到充分暴晒至干透。干后可用草将树蔸盖好，防止降雨淋湿。2选地挖窑 （1）选地 宜选排水良好的向阳缓坡地，土质深厚、疏松的砂质壤上（含沙量6070）为好。黏土、透气性差的土壤不宜采用。最好选生荒土或放荒3年以上的庄稼地；栽过茯苓的地块即应放荒510年方可再种。（2）挖窑 挖窑时间一般在12月下旬至1月底进行。先清除场地的草根、杂木蔸、石块等杂物，然后依备料段木的大小与长短挖窑。窑形为长方形（长度视段水长短而定），深挖2030厘米，宽3050厘米，窑地按坡度倾斜，清除窑内杂物。挖出的土也要保持清洁。场地沿山坡两侧开沟以利排水，如坡度较陡，可在被顶筑坝拦水。（3）下窑与接种 下窑接种时间在春分至清明前后进行。下窑应选连续晴天土壤微润时，把干透心的段木按大小搭配下窑，一般每窑2至多段。细料应垫起与大料一样高，两节段木留皮处应紧靠，使铲（削）皮成“V”形，以便于接种。以重量计，每窑2节段木在15千克左右，最少不宜少于10千克。栽培茯苓所用的苗种，历来沿用菌核组织，通称“肉引”；将其压碎成糊状作种用称为“浆引”；把“肉引”接种于段木，待菌丝充分生长后挖起，锯成小段作种的称“木引”。用“肉引”和“浆引”栽种一窑要耗费茯苓0205千克，用种量大，不经济；“木引”操作繁琐，菌种质量难以稳定，稳产高产也难以保证。近年来采用纯菌种接引，即可获得高产，又可节约大量商品茯苓，是当前广泛应用的最好方法。菌种是用小松木块（长宽厚12厘米*O2厘米*10厘米）装瓶消毒，加适量的培养基质，经接上茯苓原种培养在瓶内长满旺盛的乳白色菌丝，而作为大面积茯苓的接种菌种。接种时在两段木的上半部分用利刀削成长15厘米*10厘米的新口，然后用消毒过的钳或镊子将瓶内的菌种（长有菌丝的松土块）取出，平摆在两段木间的新口处，并加盖松木片或松叶，上面可再放一条段木（若两段水重20千克以上，则不放第三段段木），覆土1015厘米，整个窑面成龟背形。每窑需菌种131/2瓶。利用树蔸栽培在茯苓则于根蔸上削23个新口，然后将菌种分别接种在新口处，盖上松片或松叶，覆土高出树蔸1518厘米，每树蔸一般用菌种051瓶。3田间管理（1）查窑补引 段木接种710天，使长出白色的茯苓菌丝，检查时若发现段木上不长菌或污染杂菌即应进行补缺。方法是将窑的盖土扒开，露出段木，取去一段，以菌丝生长旺盛的窑中取出一段补上，然后将土覆回；或是将不上菌窑内的段木全部取出，晒去水分，再将段木重新削口，放回原窑用菌种接种。（2）培土 茯苓形成菌核（结苓）后，苓体不断增大或因大雨冲刷表土层而露出土面，使茯苓停止生长。故要勤检查，发现窑土裂开或苓体露出要及时用细立培土，同时还应注意拔除杂草和防止人畜进入地内踏踩。4病虫害防治 虫害主要是白蚁，危害严重。接种后当年79月和第二年5-6月份地温高，白蚁繁殖快。防治方法：发现蚁路，及时用药喷在蚁身上，使之带回窑内互相传染中毒死亡，或用煤油或开水灌水蚁穴，并加盖砂土，灭除虫源。（四）采收加工（1）采收 茯苓一般在接种后810个月内成熟，成熟茯苓的一个特征是外皮带黄褐色，届时可以控；另一个特点是长菌核的段木变疏松呈棕褐色，一捏就碎，表示养料已尽，应立即采收。通常是小段木先成熟，大段木后成熟。宜成熟一批收获一批，不宜拖延。一般每窑15-20千克段木约收鲜茯苓2515千克，高产可达2540千克。（2）加工 将采收茯苓堆放室内避风处，用稻草或麻袋盖严使之发汗，析出水分，再摊开晾干后反复堆盖，至表皮皱缩呈褐色时用刀剥下外表黑皮（即茯苓皮）后，选晴天依次切成块片（长、宽、厚4厘米*4厘米*O5厘米），将切出的白块，赤块分别摊竹席或竹筛上晒干。也可直接剥净鲜茯苓外皮后置蒸笼隔水蒸干透心，取出用利刀按上述规格切成方块，置阳光下晒至足干。一般折干率为50左右。 产品质量：成品以足干，去净外皮，成正方形块，厚薄均匀，白色者为优质。茯苓菌种质量标准及检验规程 茯苓为传统常用中药材，在我国有着两千多年应用历史，人工栽培的尝试始见于一千五百多年前南北朝时期的本草经集注，爰至南宋，栽培技术已臻完备，宋癸辛杂识记载的使用新鲜菌核作种的“肉引栽培”方法，一直沿用至20世纪60年代。20世纪70年代初，在华中农业大学杨新美教授指导下，湖北成功地研制出“茯苓纯菌丝菌种”，并以其代替传统“肉引”作为种源，开创了茯苓的“菌种栽培”。经过几十年的发展，现湖南补天药业有限公司已成功研制出“茯苓激光诱导菌种”，为改良菌种提高茯苓品质迈出了较大的一步。1 茯苓菌种的分级 用于分离茯苓菌种的鲜茯苓菌核称为种苓，由种苓直接分离、培育的一级菌种，称为茯苓母种；母种经扩大培育的二级菌种，称为茯苓原种；原种经扩大培育的三级菌种，直接用于栽培种植，称为茯苓栽培菌种。2 种苓来源及标准2.1 种苓来源在传统产区，选择优良栽培菌株（品系），提前进行培育；在栽培培育出的新鲜菌核中，进行认真挑选。2.2 种苓标准23代，体重2.5 kg以上的优质鲜菌核；个体较大，近球形；外皮较薄，颜色黄棕色或淡棕色，有明显的白色或淡棕色裂纹；生长旺盛，切或掰开后，内部苓肉色白，茯苓气味浓郁，有较多乳白色或淡青色浆汁渗出；外皮完整，无虫咬损伤，无腐烂异样。2.3 种苓的储存与运输种苓选定后要及时进行分离使用；若需暂短储存或运往他地使用，必须埋在湿沙内，以防干燥。3 培养基制备3.1 母种培养基原料为马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，松根或松木屑煎汁40 ml，琼脂20 g，水1 000 ml；将松根（或松木屑）加适量水（以淹没23 cm为度），煎煮30 min，用八层纱布（用水浸湿后拧干）过滤，取滤液静置1 h使沉降，取上清液浓缩至约40 ml，备用。将马铃薯去皮（挖去发芽薯块芽眼），洗净，切成薄片，用水冲洗干净，称取200 g，加水1 000 ml，煮沸至软而不烂为度，用八层纱布（用水浸湿后拧干）过滤，取滤液。称取琼脂20 g，加入马铃薯滤液中，煮至全部溶化。溶液中加入葡萄糖，搅拌溶化，再加入松根（或松木屑）煎汁，并加水补足1 000 ml，分装于试管或三角瓶中；将配制的母种培养基置高压灭菌锅内，用1.0 kg/cm2压力（温度121.3）灭菌30 min；试管趁热摆放斜面，冷却后，备用。3.2 原种培养基原料为小麦粒90%，松木屑10%，营养液（1%蔗糖、0.4%硝酸铵或硫酸铵）；将麦粒精选，除去瘪粒、杂质，洗净，置40左右温度的营养液中浸泡10 h，取出，滤干。将滤出的小麦粒与5%松木屑混拌均匀，装入400 ml盐水瓶或聚丙烯硬塑料瓶内，边装料边振摇，并用扁形铁钩或木棒稍压实，使之均匀装至瓶肩处。将另5%松木屑用营养液润湿，盖在瓶内培养基料表面，厚约0.4 cm。用锥形木棒在瓶中扎一直洞约至瓶底，揩净瓶内壁、外壁沾有的物料，塞紧棉塞或具海绵塞的瓶盖。瓶盖外部用二层报纸包裹，用棉索或橡筋进行包扎；将配制的原种培养基置高压灭菌锅内，用1.4 kg/cm2压力（温度129）灭菌2 h，或置常压灭菌灶内，用流通蒸气（100）灭菌810 h；灭菌后慢慢冷却，备用。 3.3 栽培种培养基（松木屑型培养基）原料为松木屑78%，米糠（或麦麸）20%，蔗糖1%，熟石膏1%，水料比11.01.2；首先将蔗糖溶于水中。将米糠（或麦麸）与熟石膏混匀，再加入松木屑，拌匀。然后加入溶化了的蔗糠水，翻拌均匀，使培养基料含水量为44%70%。即紧握培养基料使指间稍见渗水为度。培养基料配制后放置30 min，待水份均匀透入料中，进行装袋。将聚丙烯塑料袋（12 cm，高24 cm，厚4丝）折角呈方底形，把配制的培养基料装入袋中，每袋400 g左右，随后压实并抹平表面，揩净袋口内外壁表面沾有的物料，套入硬塑料颈圈，把袋口向外翻出1.42.0 cm，盖上具海绵塞的塑料套盖，套盖外部用两层报纸包裹，用棉索或橡筋进行包扎；将配制的栽培种培养基置常压灭菌灶内，用流通蒸气（温度100）灭菌810 h，或置高压灭菌锅内，用1.4 kg/cm2压力（温度129）灭菌2 h；灭菌后慢慢冷却，备用。4 母种分离与培养4.1 分离将预先选好的种苓用清水冲洗至无泥沙，待表面稍干移入无菌室超净工作台上，用0.2%升汞溶液或70%酒精冲洗，进行表面消毒，再用无菌水（通过灭菌处理的清水）冲洗数遍，除去表面药液，打开紫外线灯照射片刻；待种苓表面稍干，用灭过菌的刀具以种苓与培养料（段木）着生部位为中心，纵向切或掰开；用经灭菌的解剖刀或接菌铲挑取长宽各0.40.7 cm，厚0.1 cm一小块白色苓肉，接入试管斜面或培养皿平板母种培养基上。挑取部位为种苓与培养料着生部位对侧，纵轴方向由外向内23 cm处，依次挑取苓肉，进行分离。用同样方法连续接一批试管或培养皿。4.2 母种培养从无菌箱或无菌室内将分离、接种后的试管或培养皿拿出，贴上标签，注明菌种编号、种苓来源、分离接种时间等，然后移入2224恒温箱内培养；分离出的鲜苓块经2 d培养，可看到接种块周围长出白色绒毛状的茯苓菌丝。随着培养时间的延长，可见茯苓菌丝在培养基上伸延，在培养过程中若发现有杂菌污染，要及时剔除。47 d，茯苓菌丝长满培养基表面，即得到一级母种。4.3 母种的提纯复壮与扩大培养将培养好的一级母种置无菌室超净工作台上，用无菌操作法，从菌落边缘（即幼嫩菌丝）挑取长宽各0.40.7 cm左右的菌丝体，移植到另一支母种培养基试管或平板内，于2224恒温箱内培养；培养12 d即可见茯苓菌丝在培养基上呈放射状生长，且较旺盛致密。平板上可见茯苓菌落特有的同心环纹，试管内可见菌丝呈波纹起伏生长。培养7 d左右，大量气生菌丝长满培养基，菌落环纹或波纹消失，并产生特异茯苓香味，即得到二级母种；沿用此种方法，将二级母种先端幼嫩菌丝经转接扩大培养，成为三级母种；茯苓一级母种经12次转管扩大培养，起到提纯和活化作用，培养出的二级、三级母种均可用于扩大生产茯苓原种。5 原种制备 按照“茯苓母种质量标准”选择优质母种，备用。将预先准备的优质母种置接种箱内，用无菌操作法，挑取长、宽各1.4 cm左右的菌块（连同培养基），或用打孔器挖取直径1.2 cm的菌块。迅速接种移入原种培养基瓶内中央孔边，随即塞（盖）严瓶口，贴上标签；将接种后的原种瓶置2224恒温箱或培养室内培养；培养12 d，可见母种菌块上的菌丝恢复生长并逐渐向纵深延伸。7 d左右，待茯苓菌丝伸长至原种瓶2/3时，即可移入常温室内继续培养。培养过程中，必须经常检查，并调整培养温、湿度，若发现菌丝生长异常，要及时分析原因，采取补救措施，若有杂菌污染，坚决剔除。 6 栽培菌种制备 按照“茯苓原种质量标准”选择优质原种，备用；将预先准备的优质原种置接种箱内，用无菌操作法，将原种瓶打开，去除原种表面的菌膜及表层培养物。用接种枪或接种匙挖取4g左右略加捣碎的原种块，接种移入栽培种培养基袋口中央，随即原样封口；将接种后的栽培菌袋置2428培养室内培养；培养12 d，即可见原种接种块上的茯苓菌丝恢复生长并向袋内纵深延伸。7 d左右，待茯苓菌丝伸长至培养袋1/3时，即可移入低温室内进行常温培养。培养过程中，必须经常检查，认真记录，发现杂菌污染，及时剔除。7 茯苓菌种分级质量标准7.1 茯苓母种质量标准菌龄710 d；菌丝色白、均匀、致密、粗壮，茯苓特异香气浓郁；菌丝体表面可见晶莹的露滴状分泌物；菌种试管完整无损，棉塞严密，无杂菌污染。7.2 茯苓原种质量标准菌龄1530 d；菌丝生长旺盛，诘白、均匀、致密，爬壁现象明显，可见根状菌索。菌丝体尖端可见乳白色露滴状分泌物，茯苓特异香气浓郁；菌种瓶完整无损，无杂菌污染。7.3 茯苓栽培菌种质量标准菌龄3045 d；菌丝洁白致密，生长均匀，布满菌袋内；菌丝体尖端可见乳白色露滴状分泌物，茯苓特异香味浓郁；菌袋完整无破损，无发黄菌丝，无子实体长出，无杂菌污染。8 茯苓菌种质量标准检验规程 首选检查菌种菌龄，如母种为710 d，原种1530 d，栽培菌种3045 d。检验菌种培养容器，如试管、菌种瓶、菌种培养袋等，必须完整、无破损，棉塞或瓶盖、袋口严密，封闭。菌丝生长旺盛，色洁白、均匀、致密，布满培养容器内，无杂菌污染。菌丝体尖端可见乳白色露滴状分泌物。打开培养容器，可嗅到浓郁的茯苓特异香味。湘靖28基本信息 品种名称：湘靖28 品种类别：茯苓 审定编号：XPD0072010 品种来源：湖南省靖州县湘桂黔食药用菌研究所，自选 种植区域：该品种适宜于湖南省种植品种简介 湘靖28，茯苓新品种，结苓早，结苓率达96%，生物转化率高，氨基酸、多糖含量高，抗病虫害能力强。2009年6月17日至18日，“湘靖28”品种茯苓在湖南省怀化市靖州县顺利通过湖南省农业厅组织的专家评审；“茯苓新品种选育与袋料高效栽培技术研究”同时顺利通过省科技厅委托怀化市科技局组织的专家鉴定，成果已达到同类研究国内领先水平。据有关资料显示，在旱地栽培“湘靖28”，其生物学效率达42%70%，平均亩产鲜茯苓达8500kg以上。