果蝇的性别鉴定.doc

果蝇的性别鉴定、性状观察及饲养方法摘要：进行果蝇的性别鉴定、性状观察及了解饲养方法，掌握麻醉果蝇的方法，雌雄蝇的识别，几种突变性状的观察，处女蝇的收集方法，果蝇培养基的配制。记录果蝇的突变性状，主要集中在眼睛的颜色、形状，翅的形状、翅脉的形态，刚毛刚毛（果蝇体表粗、硬、长的毛）的颜色，形态，体色，平衡棒的大小、形态。1.引言：（1）果蝇作为实验材料的优势：果蝇是遗传学研究中最经典的模式动物。果蝇体型小，体长不到半厘米；饲养管理容易，既可喂以腐烂的水果，又可配培养基饲料；一个牛奶瓶里可以养上成百只。果蝇繁殖系数高，孵化快，只要1天时间其卵即可孵化成幼虫，2-3天后变成蛹，再过5天就羽化为成虫。从卵到成虫只要10天左右，一年就可以繁殖30代。果蝇的染色体数目少，仅3对常染色体和1对性染色体，便于分析。作遗传分析时，研究者只需用放大镜或显微镜一个个地观察、计数就行了，从而使得劳动量大为减轻。（2）果蝇的麻醉用采用乙醚来麻醉的方法。（3）果蝇的雌雄的辨别主要是根据果蝇的大小、形态、条纹、性梳来进行辨别。（4）果蝇的突变性状主要集中在眼睛的颜 色、形状，翅的形状/翅脉的形态，刚毛（果蝇体表粗、硬、长的毛）的颜色，形态，体色，平衡棒的大小、形态这些方面。2.实验材料 2.1 试验材料 解剖镜(Olympus)、蓝色塑料板、小毛笔、解剖针、麻醉瓶、培养皿、野生型果蝇、三隐型果蝇、黑檀型果蝇、残翅型果蝇。2.2试验方法2.2.1 试验设计（一）果蝇麻醉及观察选择亲蝇进行杂交或观察果蝇的性状，都要先将果蝇麻醉，使之处于不活动状态。麻醉 果蝇的操作步骤如下：（1）轻拍培养瓶壁，让果蝇震落到培养瓶上。如瓶塞上附着果蝇，则轻轻晃动瓶塞，让他们落到培养基上。（2）拔去麻醉瓶与培养瓶塞，迅速将培养瓶口倒扣在麻醉瓶口上。轻拍培养瓶让果蝇了麻醉瓶中。（3）把麻醉瓶中的果蝇拍落瓶底，拔出瓶塞，在塞子上滴几滴麻醉剂，重新塞入麻醉瓶。果蝇失去附壁能力，纷纷落入瓶底，麻醉即告完成。（4）将麻醉的果蝇置于解剖镜下用小毛笔或解剖针轻轻地拨动观察。如果蝇在观察时苏醒，可用培养皿罩住，再在滤字条上滴几滴麻醉剂，伸入培养皿中再次麻醉。当果蝇翅膀上翘45时，表示已经死亡。仔细进行观察，并做好实验的记录。（如果观察后果蝇不再需要，则将它们倒入尸体盛留器中。）（二）果蝇的生活周期 果蝇属完全变态昆虫，一个完整生活周期可分为卵、幼虫、蛹和成虫4个明显的时期。 25时成蝇一般在交配一两天即开始产卵.受精卵24 小时内就可孵化成幼虫,幼虫经两次蜕 皮成为三龄幼虫.幼虫生活4 天左右来使成蛹.从蛹壳中羽化出来的果蝇812 小时后即可交 配(处女蝇就是指为交配的果蝇)。下图为果蝇生活周期示意图：（三）雌雄果蝇的辨别 黑腹果蝇的一个优势是雌雄蝇的一些表型特征差别很明显，即存在“雌雄二型”现象，很便于雌雄之分别：（1）大小雌雄通常比雄体大 。（2）形态雌体腹部销尖，较宽厚呈卵圆形；雄体腹部钝圆，相对窄小呈柱状。 （3）条纹雌体腹部背面有宽窄相近的5条黑色条纹；雄体腹背只有3条，上部2条窄，最后1条宽且延伸至腹部腹面，呈一明显黑斑。（4）性梳果蝇胸足跗节共有5 亚节。雄蝇第一对胸足跗节的第一亚节基部有一梳状黑色鬃毛结构，即为“性梳”。放大100倍左右可看清这一结构。雌蝇没有性梳。性梳是鉴别雌雄蝇的可靠标志。观察腹部腹面末端外生殖器结构也是分辨雄雌蝇的简单的、可靠的方法。雄蝇外生殖器色深，雌蝇色浅。用下面的表格来表示雌雄间的主要差别： 雌果蝇雄果蝇体型腹部第一对足大末端尖背面：环纹节、无黑斑腹面：腹片节跗节基部无性能小末端钝背面：环纹节、延续到末端呈黑斑腹面：腹片节跗节基部有黑色鬃毛状性梳观察果蝇的雌雄，学习分辨雌雄的方法。并做好实验记录。（四）突变性状的观察果蝇自发的或诱发的突变数量巨大，从表型上说，果蝇的突变性状主要集中在眼睛的颜色、形状，翅的形状/翅脉的形态，刚毛（果蝇体表粗、硬、长的毛）的颜色，形态，体色，平衡棒的大小、形态这些方面。果蝇常见突变性状如下表：突变性状性状特征棒眼复眼呈狭窄垂直棒形，小眼数少褐眼眼呈褐色卷曲翅翅膀向上卷曲，纯合致死白眼复眼白色黑檀体身体呈乌木色，黑亮残翅翅明显退化，部分残留，不能飞猩红眼复眼呈明亮猩红色（五）收集处女蝇的方法选择生长良好、含有较多即将羽化的蛹的培养瓶，清除瓶中所有成蝇。812 小时内（8 小时内更可靠）从瓶中收集幼蝇，麻醉，收集的雌蝇即为处女蝇。果蝇刚孵化性征没有发育完全的，可根据外生殖器结构分辨雌雄。处女蝇单独存放在一新的营养瓶内。反复收集，直到足够为止。一个杂交实验通常收集510 只处女蝇即可。最好在距杂交实验前一星期左右开始收集处女蝇。这样能将收集到的处女蝇存放几天已检查“处女性”。如培养35天后瓶中出现幼虫则说明收集失败，需重新收集。（六）培养基的配制 1.计算所需培养基及培养瓶的数目(每瓶大致要倒1.52cm 厚的培养基)用水来做一个测量，得出需要配制的培养基的量，在适当多配一些培养基量。2.培养瓶的灭菌根据上一步计算结果，将相应数量的培养瓶用去污粉或洗洁精洗净，控干水分塞上塞子，在高压蒸汽灭菌锅中，1kg/cm2大气压，121灭菌1520min（或160的烘箱中干热灭1小时）。3.培养基的配制果蝇培养基的成分水1000ml琼脂7.5g玉米粉 105g 丙酸6.25g蔗糖 75g酵母粉20g以下以配制1000ml培养基为例说明配制过程 按配方分别取玉米粉、蔗糖、琼脂。量取1000ml水，一半倒入锅中，加琼脂加热熔溶解。水开后加蔗糖，搅拌均匀。然后将玉米粉倒入剩余的水中，搅拌均匀，沿锅边慢慢倒入，边倒边搅（这样玉米不容易结块）。继续煮几分钟，培养基成为糊状物时即可离火（不能太稠，否则无法分装）。加丙酸（防腐）及酵母粉，搅拌均匀即可用。培养基在室温下干燥12天，待其表面完全凝固后使用。3、实验结果3、1外形的观察1） 大小：雌性大于雄性 2） 形态：雌性腹部稍尖，较宽厚呈卵圆形，雄性腹部钝圆，相对窄小呈柱状。雄性的生殖构造更复杂，颜色很深，雌性的却很小浅。3)平衡棒：在果蝇的翅与第三对附肢之间有一对平衡棒，这是双翅目昆虫调整姿势保持平衡的器官。条纹4）条纹平衡棒长翅卷翅残翅5）翅形残翅长翅6）单复眼复眼单眼7刚毛) 刚毛刚毛8）雌雄的腹部结构雌蝇雄蝇9）突变性状的观察对比总结表眼色眼形体色刚毛黑檀体红色椭圆黑色刚毛三隐白色椭圆黄色焦刚毛棒眼红色棒状黄色刚毛残翅红色椭圆黄色刚毛野生红色椭圆黄色刚毛三隐亮红眼棒眼亮红眼野生型黑檀体卷翅暗红眼10）有无性梳性梳结构4.讨论1）实验中发现，雌雄果蝇很容易辨别，但是经常不是很确定，我们都是通过两个同学共同确认之后才确定雌雄。2）果蝇在收集过程中，需要轻拿轻放，否则提醒变化后有可能观察不到想要观察的性状。3）果蝇的麻醉也很需要注意，在观察果蝇的性状的试验中，果蝇麻醉不彻底对实验影响很大，重新麻醉或是暂时麻醉都是比较不方便的。4）果蝇有很多的可以辨认的性状，确实是很好的实验材料，且培养容易。5）实验过程中，团结合作很重要。参考