实验一母种培养基的配制与菌种分离与培养.doc

实验一 母种培养基的配制与菌种分离与培养实验1、本次实验的目的和要求学会母种培养基的配制方法，掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。2、实验内容或原理（1）母种培养基配制。工艺流程：培养基配方 培养基的配制 分装试管理 灭菌 摆斜面（2）菌种分离与培养（本实验以组织分离为例） 工艺流程：种菇的选择与消毒 组织块的切取 接种 菌丝培养 3、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、解剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯。试剂：75%酒精、高锰酸钾、福尔马林、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。4、实验步骤（1）母种培养基配制a、培养基配方 以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH2PO43g、MgSO4.7H2O1.5g、VB110mg。b、培养基配制 首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200 g，放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。再加入琼脂继续加热泪，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。C、分装试管 培养基配制后应趁热分装，量为试管的1/5。装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每5-10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。D、灭菌 灭菌前将水加至锅内水位标记高度。将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热,当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5 min,关闭放气阀.当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时(灭菌所需压强)开始计时,继续维持该压强30min。灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀,排出锅内剩余蒸汽后,打开锅盖.注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽,以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞,造成以后菌种的污染. （本次采用全自动高压灭菌锅：121，20min）E、摆斜面 当培养基的温度降到60时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。冷却后即成斜面培养基。(2)菌种的分离与培养（本实验以组织分离为例）种菇的选择与消毒 选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害、无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。组织块的切取 将斜面培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上,关闭紫外灯后20min后,再开始进入接种室内进行接种。接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种，才能减少污染。无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速。用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两面，在菌柄 和菌盖交界处用刀切取0.3-0.5cm2的小方块组织,将其移接到试管内培养基的中央，将其移接到试管内培养基的中央。 菌丝培养 接种后置于25恒温箱中培养,2-3天后可见组织块周围发生白色绒毛状菌丝,此时每天要检查杂菌污染情况.培养7-10天后,菌丝即可长满斜面.观察记载详细观察比较母种菌丝生长发育动态，计算出平均每天菌丝生长速度。 菌落的直径（mm）-菌种块直径(mm)试管内菌丝生长的速度=菌落生长的时间（d）观察母种菌丝的表面形态特征。通过镜检，观察菌丝细胞核的变化规律及锁状联合的形成。作业总结制作培养母种、原种及栽培种过程中应掌握哪些基本技能。如何获得优良的菌种？5教学方式 以分组的形式进行实验、讨论6考核要求 掌握母种培养基的配制比例与高压灭菌方法，要求组织分离成功率在50%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。7实验的报告要求 要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。实验分组：全班分三大组，每大组分2小组。实验准备：第二组写板书1人，准备材料2人。实验任务：每小组按配