苹果中酵母菌的分离.doc

河南科技大学课 程 设 计 说 明 书课程名称 微生物学课程设计 题 目 学 院 食品与生物工程学院 班 级 生物工程10x 学生姓名 郝有武指导教师 日 期 2012年7月1日 目 录摘 要 前言一 课程设计目的二 设计原理三实验材料与培养基备 1，实验材料 2，马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备 3，豆芽汁培养基的制备 4，YPD培养基的制备四、实验步骤1，接种2，培养3，观察4，分离5，生长曲线的测定五、结果：曲线图六、讨论：分析致谢附图七：参考文献前言酵母菌是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物。可在缺氧环境中生存。目前已知有1000多种酵母，根据酵母菌产生孢子（子囊孢子和担孢子）的能力，可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。不形成孢子但主要通过出芽生殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”（类酵母）。目前已知大部分酵母被分类到子囊菌门。酵母菌在自然界分布广泛，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，而在酿酒中，它也十分重要。而且猫吃了还会胀大，非常的危险。多数酵母可以分离于富含糖类的环境中，比如一些水果（葡萄、苹果、桃等）或者植物分泌物（如仙人掌的汁）。一些酵母在昆虫体内生活。酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为15微米或520微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。酵母菌具有典型的真核细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。 酵母菌的遗传物质组成：细胞核DNA，线粒体DNA，以及特殊的质粒DNA。 大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。 未发现其有性阶段的酵母菌称假酵母。一、课程设计目的1通过课程设计实践，使学生树立正确的设计思想，培养其综合运用微生物学课程的理论知识与生产实际相结合的能力，并在设计中提高其分析问题和解决问题的能力。2学习微生物分离培养的一般方法，掌握设计微生物分离培养方案的一般规律。3进行微生物培养基本技能的训练，如灭菌技术、无菌操作技术、接种技术、稀释平板分离技术、染色技术、显微观察技术等。4学习并掌握真菌用培养基的制备原理及方法，酵母菌死活细胞的鉴别原理与方法，酵母菌生长曲线的测定原理，以及用比浊法测定细菌的生长曲线。5培养学生查阅资料和撰写论文的能力二、设计原理大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5-6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基培养获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长），然后在固体培养基上划线分离之。酵母菌细胞的死活可用美蓝进行区别。原因是美蓝为弱氧化剂，无毒，且还原后变为无色。如果是活的酵母细胞，由于新陈代谢不断进行，细胞内氧化还原电势颇低，还原力强，若有美蓝染料进入活的酵母细胞内，即被还原成无色，而死的细胞或代谢缓慢的衰老，由于它们无还原能力或还原能力弱，仍可被美蓝染成蓝色或浅蓝色。将少量酵母菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线，它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有很重要的指导意义。三、 实验材料与培养基制备1，苹果、梨等、0.1%美蓝染液、1ml的吸管、无菌培养皿、试管、高压锅、恒温培养箱等。2，马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）；原料：马铃薯（80g）、葡萄糖（8g）、琼脂（4g）、蒸馏水（400ml）。配制方法：（1） 先将马铃薯去皮，切片，称80克并加蒸馏水400ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至400ml，制成20%的马铃薯汁。（2） 在200ml20%的马铃薯汁中加入4g琼脂，4g葡萄糖，煮沸熔化，补足水分并在115条件下高压灭菌20分钟。制备马铃薯葡萄糖琼脂平板。3，豆芽汁液体培养基：称取黄豆芽50g，加水100ml，煮沸1h，过滤后补足水分，121湿热灭菌后存放备用，此即为50%的豆芽汁。取50%豆芽汁200ml，葡萄糖50g，水800ml，自然pH，在115条件下高压灭菌20min。4，YPD培养基：配方：1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖。配制方法（1000ml配方）：溶解10g酵母膏，20g蛋白胨于900ml水中，12120min高压灭菌。同时将20g葡萄糖加入100ml水中，12120min高压灭菌。然后在超净台中两者混合。注：葡萄溶液和酵母膏、蛋白胨溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养成分变化，所以要分别灭菌后在混合，但要注意无菌操作。四、 实验步骤 1、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入豆芽汁液体培养基试管中，置28-30，培养24h，可见培养液变浑浊。2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.1ml，注入另一管豆芽汁液体培养基中，置28-30再培养24h或稍长（过长则霉菌长出）。3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.1%美蓝染液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。活酵母可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板。用划线法分离酵母培养液，从而得到单个菌落。5、生长曲线测定：挑取单个菌落接种于30mlYPD液体培养基中，30、180r/min振荡培养24h，取扩大培养的菌液的菌液按照1:100的接种量接种于3瓶50mlYPD培养液中，同样条件下振荡培养，并分别于培养后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30h取菌种培养