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白血病及相关检测试剂盒 上海鸢鹏医药科技有限公司 白血病概述 一类造血 淋巴 干细胞的恶性克隆性疾病 其克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟的能力 或者增殖与分化能力不平衡 而停滞在细胞发育的不同阶段 在骨髓和其他造血组织中大量增生聚积 并浸润其它器官和组织 而正常造血受抑制 白血病细胞特点 自我更新增强 增殖失控 分化障碍 凋亡受阻 2020 4 11 2 tohelpsavinglives 流行病学 1 我国白血病患者约为3 4人 10万人 青壮年恶性肿瘤中排第三位 死亡率占第一位 2 约50 的白血病是由于染色体易位导致基因突变而发病 3 以急性白血病多见 70 各年龄均可发生 男性多于女性 4 占男性恶性肿瘤第6位 女性恶性肿瘤第8位5 成年人中最常见的是aml和cml 儿童中比较常见是all 病因及发病机制 病毒感染 人类i型t细胞白血病病毒物理因素 x射线 r射线化学因素 苯及含苯有机溶剂 化学药物如氯霉素 保泰松等遗传因素 家族性白血病 占7 1000 其他血液病 mds mpd lymphoma mm 阵发性睡眠性血红蛋白尿等最终可能发展为白血病 2020 4 11 4 tohelpsavinglives 白血病的分类 按照发生癌变细胞类型 可分为淋巴细胞性和非淋巴细胞 髓系 白血病 另外有少见的混合细胞性 mixedlineage 根据白血病细胞的成熟程度和自然病程 急性白血病分类 fab 2020 4 11 6 急性白血病 all all 是原始或幼稚淋巴细胞在造血组织中异常增殖所致的恶性血液病 好发于儿童和青少年 往往起病较急 l1 原始和幼淋巴细胞以小细胞 直径 12 m 为主 大小细胞较一致 l2 原始和幼淋巴细胞以大细胞 直径 12 m 为主 大小细胞不一致 l3 原始和幼淋巴细胞以大细胞为主 大小细胞较一致 细胞内有明显空泡 胞浆嗜碱性 染色深 2020 4 11 7 急性白血病 aml 急性髓细胞白血病微分化型 m0 急性粒细胞白血病未分化型 m1 急性粒细胞白血病部分分化型 m2 m2a m2b aml1 eto 急性早幼粒细胞白血病 m3 apl m3a 粗颗粒型 m3b 细颗粒型 pml rara 急性粒 单核细胞白血病 m4 m4a m4b m4c m4eo cbf myh11 急性单核细胞白血病 m5 未分化型 m5a 部分分化型 m5b 急性红白血病 m6 急性巨核细胞白血病 m7 2020 4 11 8 慢性白血病 cml cll 病程发展缓慢 骨髓及外周血中的白血病细胞主要是较晚期的幼稚细胞和成熟细胞 自然病程多在1年以上 分类 慢性髓细胞白血病 cml 造血细胞的异常克隆增殖性疾病 以粒系增生为主 慢性淋巴细胞白血病 cll 简称慢淋 是形态上类似成熟 但免疫学不成熟或功能有缺陷的淋巴细胞恶性增生性疾病 大多数是b淋巴细胞 少数是t淋巴细胞 2020 4 11 9 慢性粒细胞白血病 cml 概念 是一种发生在早期多能造血干细胞上的恶性骨髓增殖性疾病 获得性造血干细胞恶性克隆性疾病 特点 为病程发展缓慢 外周血粒细胞显著增多且不成熟 脾脏明显肿大 自然病程可经历慢性期 加速期和急变期 多因急性变而死亡 本病各年龄组均可发病 以中年最多见临床表现 慢性期 加速期 急变期 2020 4 11 10 慢性淋巴细胞白血病 cll 概念 是由于单克隆性小淋巴细胞凋亡受阻 存活时间延长而大量积聚在骨髓 血液 淋巴结和其他器官 最终导致正常造血功能衰竭的低度恶性疾病 慢淋绝大多数起源于b细胞 t细胞较少 发病情况 我国较少见 欧美国家较常见 90 以上病人在50岁以上发病 男性略多于女性 2020 4 11 11 2008年whomicm分型 m形态学 i免疫学 c细胞遗传学 morphology m区分细胞的形态学特征 图片 染色后普通显微镜下观察细胞形态的变化 immunology i通过抗原抗体反应区分细胞群的变化 cytogenetics c通过染色体培养观察其核型变化 1 通过fish技术通过目的基因荧光信号的状态在荧光显微镜观察其特征 千分子一 能较全面反应细胞遗传学特征 但灵敏度 精确性较差 分子生物学与细胞遗传学的特点和局限性 m分子生物学 molecularbiology m通过目的基因的扩增倍增过程 观察目的基因荧光值的变化 灵敏性和精确性较高 可定量检测 但只能反应已知设计好的目的基因中较小区域里的变化 2020 4 11 13 白血病分子标志物的检测层次 白血病融合基因 近年临床研究表明 大部分白血病中存在着染色体异常 涉及50种以上的染色体畸变 累及数目更多的融合基因 2000年who关于白血病分型的标准中将染色体易位后融合基因检测作为最重要的指标之一 对这些分子标记进行检测分析有利于治疗方案的确定和分析预后 2020 4 11 16 成人all 儿童all tohelpsavinglives 白血病相关常见融合基因 常见白血病融合基因一览 2020 4 11 18 bcr abl ph染色体 tohelpsavinglives bcr abl ph染色体 tohelpsavinglives tohelpsavinglives bcr abl cml的分子指标 如果转录本开始上升 提示治疗失败或欠佳 对这类病人 需每个月检测一次bcr abl转录本 nccn guidelines推荐每三个月检测一次bcr abl转录本 kinaseinhibitorsbindwiththeactivatedbcr ablproteintopreventtumorgrowth tohelpsavinglives apl m3 相关基因与治疗 95 stat5b rar p1p1l rar prk rar numa rar npm rar pml rara plzf rara 1 3 4 正确检测apl分子标记十分重要 基因与治疗 相关融合基因比例 1全反式维甲酸 atra 砷剂初诊时需分亚型 长型预后好短型 变异性预后差 pml rara 不同少见类型rara融合基因 atra敏感性不同 需做区分 探讨 其他类型rara融合基因 基因检测频率与cml基本相同 样本 骨髓 pml rara 急性早幼粒细胞白血病 apl 的特异性分子标志 见于98 的apl病人 tohelpsavinglives tohelpsavinglives apl融合基因rara7种类型 tohelpsavinglives apl相关rara融合基因与atra关系 不同rara类型对atra敏感性不一致 敏感 敏感 敏感 敏感 敏感 部分敏感 不敏感 aml1 eto 2020 4 11 26 aml1 eto 主要发生于m2的白血病中 40 m2b阳性率达90 可作为m2b诊断的重要分子标志 少见于m4和m1 极少见于mds 临床应用 aml的分子分型诊断和预后观察 其阳性时预后良好 tohelpsavinglives 白血病相关分子标志物产品 白血病融合基因初筛白血病融合基因定量检测基因重排检测预后基因检测移植后嵌合率检测 tohelpsavinglives 融合基因筛选 8种常见筛选 13aml筛选 9all筛选 基因类型bcr abl 190 210 230 pml rara s l aml1 eto cbfb myh11 a d e tel aml1 mll af4 sil tal1 e2a pbx1 基因类型bcr abl 190 210 230 pml rara s l v aml1 eto cbfb myh11 a d e mll af9 dek can plzf rara npm1 hlf少见6种rara 基因类型tel aml1 mll af4 e2a hlf e2a pbx1 bcr abl 190 210 hox11 hox11l2 calm af10 sil tal1 42全套筛选 基因类型bcr abl 190 210 230 pml rara s l v aml1 eto cbfb myh11 a d e mll af9 dek can plzf rara 少6 rara npm1 hlf tls egs npm alk aml1 evi1 set can nup98 hoxa9 tel pdgfrb npm mlf1 tel aml1 mll af4 e2a hlf e2a pbx1 hox11 hox11l2 calm af10 sil tal1 tel abl bcr jak2 tel jak2 mll af17 mll af6 mll af1q mll af1p mll enl mll af10 set can 快速寻找可靠的白血病融合基因分子指标 融合基因筛选类型 白血病未区分类型 8种常见筛选 42种筛选 区分核型有异常或很难辨别的类白血病 或mds时常用多种融合基因筛选骨髓移植时 常见方法找不到分子靶标时进行筛选 白血病常见大于1 的几种融合类型筛选 包括4种髓系 bcr abl aml1 eto pml rara cbfb myh11 4种淋系 tel aml1 mll af4 sil tal1 mll enl 融合基因筛选类型 白血病大致分类明确 aml all 13aml筛选 9all筛选 bcr abl190 tel aml1 mll af4 e2a hlf e2a pbx1 hox11 hox11l2 calm af10 sil tal1 4种常见髓系 6种少见rara mll af9 dek can 融合基因筛选类型 常见融合基因 3种常见筛选 4种儿童白血病融合基因初筛 tel aml1 mll af4 e2a pbx1 bcr abl190 三种融合 8种剪切体 bcr abl 190 210 230 pml rara l s v aml1 eto 9a 融合基因筛选的意义 更符合2008年who白血病分型需要 有融合基因异常者 可作为白血病残留 mrd 病灶检测的分子指标 对临床治疗监测意义重大 对部份白血病分子亚型与治疗关系的研究奠定了坚实基础 tohelpsavinglives 融合基因定量检测 白血病微小残留病灶 minimalresidualdisease mrd 指患者经诱导治疗后 并根据当时疗效评价标准达到完全缓解 cr 时体内残留的白血病细胞 是导致白血病复发的主要原因 mrd mrd水平与预后的关系 mrd定量检测的靶标 mrd检测频率 定量检测相关分子指标 确定mrd初始水平 三个月后检测mrd 观察mrd水平变化 mrd未下降1 3个log 考虑其他药物或用药方案 每三个月检测mrd 确定是否达到ccr 达到ccr mrd水平下降3 5个log或相关分子指标转阴 每6个月检查mrd 确定mrd水平是否上升 若mrd水平大于10 4或相关分子指标阴转阳 预示复发 tohelpsavinglives 融合基因定量检测的意义 1 补充mic检查的不足 明确诊断 制定个体化治疗方案 2 预后判断 不同融合基因患者具有不同的预后情况 3 疗效评价 判断用药效果 4 监测mrd 5 预测复发 基因重排检测 免疫球蛋白重链基因 igh 及免疫球蛋白 轻链基因 igk 重排检测t细胞受体 链基因 tcrb 及 链基因 tcrg 重排检测 2020 4 11 39 ig重排检测的范围 98 b细胞肿瘤tcr重排 100 t细胞肿瘤 基因重排检测预期用途 1 淋巴瘤的诊断及鉴别诊断2 b淋巴细胞恶性肿瘤的分期3 监测肿瘤治疗后微小残留病灶 mrd 特别是有骨髓转移或原发灶在骨髓中淋巴细胞肿瘤的治疗效果4 辨别淋巴细胞肿瘤初发到复发过程中是否有新的原发灶 在aml中 基因突变与细胞遗传学异常一样普遍 blood 2010 115 3 453 74 预后基因检测 2020 4 11 43 nccn2012年对aml的诊疗指南 预后基因检测靶标 aml 根据是否有染色体异位或融合基因异常来判定选用预后基因的某一种或几种 npm1 cebpa c kit fit3 dnmt3aall 有选择的检测notch1 ikros 良好的预后指征 npm1 46 62 的正常核型aml中可见npm1突变 约40 的npm1突变者伴有flt3 itd突变1 npm1突变为独立的良好预后因素2 nmp1伴flt3 itd则预后差cebpa 15 20 的正常核型aml可见cebpa突变 1 cebpa突变是一项相对良好的预后指征 2 cebpa常发生双突变 表现出更加良好的预后指征3 cebpa突变患者往往同时存在flt3 itd突变 若同时伴随flt3 itd突变 预后仍然不佳 2020 4 11 45 预后差的指征 flt aml中最普遍发生突变的靶基因 flt3 itd突变患者预后较差 且可独立于核型之外c kitd816 1 t 8 21 染色体易位的病人中 c kit突变的患者有较高的复发率和较低的生存期 与c kit未突变患者比较 2 inv 16 染色体易位患者中 c kit突变的病人易复发dnmt3a 在aml中 dnmt3a的突变率在20 30 对于dnmt3a突变患者来说 化疗并不是最好的治疗选择 2020 4 11 46 白血病产品目录1 白血病产品目录2 白血病产品的优势 1 产品优势 公司试剂涵盖了融合基因初筛 定量 预后基因检测 基