百菌清检测方法.doc

百菌清百菌清和福美双在蘑菇上的残留研究仪器：VARIANGC3800气相色谱仪,ECD检测器及色谱工作站(美国VARIAN公司);1100高效液相色谱仪、紫外检测器及色谱工作站(美国Agile公司);N-1000旋转蒸发仪(日本EYELA公司)SHB-循环式多用真空泵(郑州长城科贸有限公司);高速匀浆机(江苏金坛仪器厂);KQ-100B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);12孔固相萃取装置(美国Supelco公司);C18固相萃取柱(500mg/3mL)(美国Supelco公司)。百菌清(chlorothalonil)标准品(99.9%)、福美双(thiram)标准品(99.8%)购于百灵威化学技术有限公司;30%菇丰(百菌清+福美双)可湿性粉百菌清前处理方法取100g左右缩分后的蘑菇样品,切碎混匀,准确取其20g于100mL具塞三角瓶中,加入25mL正己烷-丙酮-浓硫酸(98%)-水(402011,体积比)混合液,在高速匀浆机中搅碎。用10mL丙酮冲洗匀浆机,合并提取液,超声提取20min,抽滤。用少量丙酮洗涤滤渣,滤液转移至分液漏斗中静置,弃水层。有机层过无水硫酸钠,40减压浓缩。用氮气吹干,用甲醇-水(2080,体积比)定容至2mL,待净化。C18固相萃取柱分别用甲醇和水各5mL预淋活化。加入上述提取液1mL,使其以12滴/s的速度通过C18小柱,用2.5mL水淋洗,通空气使柱干燥。最后用3mL二氯甲烷洗脱,洗脱液用氮气吹干,乙酸乙酯定容至1mL,待GC分析。气相色谱条件色谱柱为毛细管柱,DIKMADM-5(30m0.25mm0.25m);进样口温度300;载气为氮气,流速0.5mL/min;程序升温初始温度150,保留1min,25/min升温至250,保留5min;检测器温度300;进样量1L分流进样,分流比20。标准曲线制作准确称取百菌清标准品配制成700mg/L的百菌清乙酸乙酯标准溶液,将其稀释成6个浓度梯度(0.005、0.01、0.1、0.2、1、2g/mL),分别进样,以峰面积对进样绝对量作标准曲线。百菌清在中药材浙贝上的残留动态研究11 仪器与试剂仪器：岛津GC一9A 带ECD 检测器；岛津CR一3A 数据处理机；高速组织捣碎机。试剂：丙酮、无水硫酸钠(分析纯)；石油醚(光学纯，60 90 C)；标样，百菌清含量为910 。供试药剂：75 百菌清可湿性粉剂(日本SDS BiotechKK制造)。13 分析方法131 提取和净化 提取：称取捣碎后的浙贝叶、块根、土样(经风干过40目筛)各l0 g，分别置于250 mI 具塞锥形瓶中，加入100 mL丙酮，在振荡器上振荡30 rain。将提取液分别滤入250 mL的分液漏斗中，用2O mL丙酮洗涤残渣，加入50 mL质量分数为3 的硫酸钠水溶液，再分别加入40、30、30 mL的石油醚萃取3次，将3次的提取液合并，浓缩至5 mL一 。净化：用 l 6 mm30 cm 的玻璃色谱柱，从下到上依次填入脱脂棉、4 g无水硫酸钠、l0 g中性氧化铝、4 g无水硫酸钠。先用约l0 mI 丙酮石油醚(2：3，体积比)混合溶剂预淋柱子再分别将叶、块根、土样的浓缩液倾入净化柱中，用l00 mL烧瓶收集淋洗液。分别用丙酮石油醚(2：3，体积比)混合溶剂60 mL，分4次淋洗，收集淋洗液，然后浓缩至约2 mL，用石油醚定容至l0 mL，供气相色谱仪测定。132 气相色谱条件 色谱柱：3 mm16 ITI玻璃柱，内填15 OVl7+28 OV一210chromosorb w Aw DMCS(80 lO0目)；柱温：l95 C ；汽化室及检测器温度：2l0C ；载气为N 2(99999 )；流速：5O mLmin；检测器：ECD。固相萃取法测定水中百菌清和拟除虫菊酯11 试剂与仪器百菌清、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯菊酯(联苯菊酯)、高效氯氰菊酯、氟氯氰菊酯(百树得)、三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯等8种农药标样(浓度均为100 mgL)均购自中国国家标准物质研究中心。配成浓度为10 mgL的正己烷混合溶液作为工作溶液。固相萃取装置和Cl8固相柱(3 mL，500 mg)由美国Supelco公司生产。其他试剂均为分析纯。Varian 3800气相色谱仪配CP8410自动进样器和ECD检测器，美国Varian公司生产，SPBTM-608毛细管柱(30 m025 mm025m)，柱温150oC (2 min)10oCmin270oC(16min)。进样口温度：280oC，检测器温度：300oC，载气N2，柱内恒流：2 ml/min，尾吹N2：28 ml/min，以外标法定量。12 试验方法121 样品制备参照对地表水中百菌清和溴氰菊酯含量的要求，确定3个添加浓度：0050，0010，0001mgkg。分别取500 mL某水厂的水源水，各自对应添加工作溶液25 mL，05 mL，50 m，分别记为1号，2号和3号试样，重复3次，平衡1 h后待测。另取2份500 mL水，不添加工作溶液，作为空白样待测。122 柱活化用10 mL甲醇分两次预淋C8柱，每次浸润5min，开启真空泵，负压抽干后，再用5 mL蒸馏水浸洗C。 柱，使其处于水溶性状态和活化状态备用。123 过柱调节固相萃取装置上的流速开关，将制备好的水样以5 ml/min的流速加入到活化好的C18柱。124 洗涤过完柱后，用5 mL蒸馏水洗涤柱子，将水抽干，待洗脱。125 洗脱洗脱液丙酮：正己烷=3：2(V：V)共5 mL，洗脱Cl8柱，流速控制在2 mlmin以下。126 定容在50cC下，氮气流吹近干，用正己烷10 mL溶解备检。127 进样分析分别稀释工作溶液到25 mgL，05 mgL和005 mgL，定量1号，2号和3号试样提取后的正己烷溶解备检液中的农药浓度。005 mgL的标样、空白试样提取备检液和3号试样提取备检液进样1 ，由于ECD的高敏感性，为了避免超载而污染ECD检测器，其余皆进样0.1l。毛细管气相色谱法检测蔬菜中百菌清残留量的方法探讨1.1 试剂与仪器1.1.1 试剂 丙酮、丁酮、环己烷(均为分析纯,重蒸);弗罗里硅土6080目,600灼烧5h,用前在130条件下烘至过夜;2%无水硫酸钠(分析纯,450灼烧);50%磷酸溶液(分析纯);0.4g/ml百菌清标准贮备液。1.1.2 仪器 SP3420气相色谱仪(附ECD检测器),0.53mm30m农残1号毛细管色谱柱,旋转蒸发仪,15mm250mm层析柱。1.2 气相色谱操作条件用毛细管气相色谱法检测百菌清时,进样口温度为270;柱箱温度为250;检测器温度为300;尾吹流速为40ml/min,采用分流方式进样,分流比为401。1.3 标准曲线制作将百菌清标准贮备液用丙酮稀释配成浓度为0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00g/ml的标准系列溶液,按1.2节中的色谱条件测定每个溶液,以进样量为横坐标,峰高为纵坐标建立工作曲线。1.4 操作步骤称取25.0g样品匀浆,置于250ml锥形瓶中,加入60ml丙酮及50%磷酸溶液2ml,充分振荡2min,过滤。用20ml丙酮洗涤锥形瓶2次,滤液全部移入250ml分液漏斗中,加入2%硫酸钠溶液100ml,摇匀后用环己烷60ml分3次提取,静置分层后,提取液经无水硫酸钠漏斗干燥,浓缩至5ml待净化。将层析柱底部垫少许脱脂棉,依次装入2cm厚无水硫酸钠、7g弗罗里硅土、2cm厚无水硫酸钠,敲实并成一平面。用15ml环己烷预淋层析柱,弃去预淋液。将浓缩的样品提取液全部转移到层析柱中,然后用80ml环己烷丁酮(201)混合液分4次淋洗,收集全部淋洗液,将淋洗液浓缩定容至5ml,进行气相色谱分析,用外标法计算蔬菜样品中百菌清含量2。1.5 实验内容1.5.1 淋洗液用量的筛选实验 根据1.4节中的操作步骤,分别用60ml、80ml、100ml环己烷丁酮(201)淋洗液淋洗层析柱,并在每个层析柱中加入0.400mg/kg百菌清标准溶液,每个处理2次重复,以确定最佳的淋洗液用量。1.5.2 样品回收率实验 以不含百菌清的蔬菜为测定样品,根据1.4节的操作步骤,分别在蔬菜样品中加入0.040mg/kg、0.400mg/kg、4.000mg/k的3个浓度百菌清标准溶液(每个处理重复3次),以确定该方法的准确度。树皮中百菌清残留量的测定1.1.1 试剂 所有试剂均为AR分析纯,水为蒸馏水。(1)丙酮: 重蒸馏。(2)石油醚(沸程为6090),取6080间的馏分。(3)2%硫酸钠水溶液。(4)无水硫酸钠(优级纯),在650活化13h,储于干燥器中备用。(5)百菌清标准品,纯度95%,工业品级。1.1.2 仪器 容量瓶、量筒、烧杯、天平、分液漏斗、布氏漏斗、层析柱、微量注射器、微型植物试样粉碎机(河北黄骅市齐家务科学仪器厂)、ZFQ-85A旋转蒸发器(上海医械专机厂)、电动振荡器(康氏,公私合营电工医疗器械厂)、Varian3400气相色谱仪(用于电子捕获检测器)。1.2 分析方法1.2.1 标准溶液和添加水平的配制(1)百菌清标准溶液:准确称取百菌清标准品0.00670g,使其精确至0.00002g,用少量重蒸的丙酮溶解,并用丙酮定溶至100mL,这样百菌清含量为0.67mg/mL。(2)百菌清添加水平(标准工作液):用微量注射器取标准溶液8L于测试试样中,充分混匀,其百菌清含量为5.3610-6。1.2.2 试验部分(1)取样:树皮样品作植物粉碎机至40目左右,经充分混匀后,作为试验样品,用冰箱贮存,备用。(2)称取10.0g试验样品,于100mL锥形瓶中,加入50mL丙酮和0.5mL1N的盐酸溶液,振荡30min,过滤,用一定量的丙酮洗涤滤渣,滤液用丙酮定容至100mL,取定溶后的滤液20mL,移入12.5mL分液漏斗中,加入20mL2%硫酸钠水溶液,用石油醚20,10,10mL分3次提取,合并石油醚提取液过8g无水硫酸钠柱脱水,用少量石油醚洗涤无水硫酸钠柱,将提取液在旋转蒸发器上50浓缩至干,用10mL石油醚定容,供色谱测定用。1.3 色谱条件载气:高纯氮,纯度为99.999%;柱温为180,气化室温度为210,检测器温度为280,载气流速为40mL/min,纸走速为0.5cm/min,色谱柱为OV210,进样量为0.5mL。蔬菜中百菌清与拟除虫菊酯农药残留量的测定1 实验方法1.1 仪器与试剂主要仪器有Aiglent6890N气相色谱仪(美国安捷伦),ECD(微池电子捕获检测器),高速组织捣1.2 分析步骤1.2.1 试样提取 称取25.00g切碎、均匀的蔬菜样品,置于100ml烧杯中,加入50.0ml乙腈,匀浆3min后,过滤于盛有57g氯化钠的100ml具塞量筒中,收集滤液4050ml,盖上塞子,剧烈振荡1min,在室温下静止1h以上,使乙腈相与水相充分分离。1.2.2 试样净化 准确吸取上层乙腈相10.0ml过弗罗里硅土柱(1cm无水硫酸钠+4g弗罗里硅土+1cm无水硫酸钠,用10ml石油醚预淋洗),用20ml石油醚淋洗,收集淋洗液于100ml烧杯中,放在80水浴锅上用氮吹法使其挥发浓缩近干,再用石油醚溶解残渣,定容5.0ml,等待GC测定。1.2.3 色谱测定 采用BPX-608型石英毛细管柱,其规格为30m0.32mm0.25m;载气为高纯氮气,流量为2.0ml/min;尾吹采用氮气,流量为40ml/min;柱的初始温度为200,然后以10min的速度升至270,并保持30min;进样口温度为290;检测器温度为300;进样以不分流进样每次进样1l。按仪器条件,对标准工作液和样品等体积进样,根据峰面积用外标法定量。1.2.4 标准工作曲线的绘制 分别准确吸取各种农药标准储备液1.00ml,置于10.00ml容量瓶中用石油醚定容,配成6种农药的混和标准工作液,浓度为10g/ml。再分别吸取此混和标准工作液0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00ml于容量瓶中用石油醚定容到10.00ml,配成浓度为0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00g/ml系列混和标准工作液,然后按1.2.3节中的色谱条件进行测定。蔬菜中百菌清残留量的高效液相色谱测定方法1 材料与方法11 仪器与试剂111 仪器设备Agilent 1100型高效液相色谱仪；永洁达超纯水器；SB2200超声波清洗器；组织捣碎机；数显恒温水浴锅；旋转蒸发器；层析柱管：1.5 cm(内径)x40 cm(高)。112 试剂百菌清标准品(99.2，Sigma Organics，USA)；甲醇为色谱纯试剂；丙酮及二氯甲烷为分析纯试剂；无水硫酸钠：分析纯，550oC灼烧4 h以上；弗罗里硅土：600oC灼烧4 h以上；弗罗里硅土层析柱：在层析柱管内装入处理过的弗罗里硅土至5 cm高，加一薄层脱脂棉后敲实，用15 ml二氯甲烷预淋洗柱后，备用。12 色谱条件检测器：紫外检测器；检测波长：240 nm；色谱柱：Gemini 5m25046 mm；流动相：甲醇+水(75 +25)；流速：1.0 mlmin；柱温：40 ；进样量10 。13 方法131 标准曲线的绘制 精确称取00100 g百菌清标样用二氯甲烷与丙酮(9:1)混合液溶解并定容至100 ml作为标准储备液，用二氯甲烷将其稀释10倍作为工作液，再稀释成浓度分别为05、10、20、30、4.0 m/系列标准溶液。标准曲线的线性方程式为Y=0139 x，相关系数为099