植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的测定.doc

植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的测定 姓名： 指导老师： 摘 要 本实验以苹果、梨、橘子作为实验材料来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白质的含量。三种水果分别经蒽酮、考马斯亮蓝G-250试剂处理后，在分光光度计的测定下测其吸光度值，从而对照标准曲线计算每种水果的可溶性糖和可溶性蛋白质的含量。关键词 苹果 梨 橘子 蒽酮 考马斯亮蓝G-250引 言 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。植物在个体发育的各个时期代谢活动都发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，本实验介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸存在下生成糠醛，糠醛再和蒽酮作用形成蓝绿色的缩合物，其颜色的深浅代表着糖含量的高低。 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位mg蛋白）表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内（0100g/ml），蛋白质色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。一 可溶性糖含量的测定1 材料与方法1.1 材料、仪器与试剂1.11 材料：苹果 橘子 梨1.12 仪器：分光光度计 恒温水箱 20ml具塞刻度试管（3支） 漏斗 100ml容量瓶 刻度试管 试管架 剪刀 研钵 等1.13 试剂：a 200g/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。b 蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；c 浓硫酸1.2方法a 葡萄糖标准曲线的制作取 6 支大试管，从 0 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。 表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量 试 剂 管 号 0 1 2 3 4 5 100 g/m L 葡萄糖溶液（ m L ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ m L ） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蒽酮试剂（ m L ） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 葡萄糖量（ g ） 0 20 40 60 80 100 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮 10 min ，取出冷却，在 620 n m 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ g ）为横坐标绘制标准曲线。 b样品中可溶性糖的提取称取0.51.0克水果，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后离心（4000r/min离心20分钟），滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。c糖含量测定用移液管吸收1.0ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（g）。（三种水果方法相同，每种水果平行重复2次）2 结果计算 根据光密度值从标准曲线上查出相应的糖含量，按下列公式计算出样品的含糖量： 溶性糖含量（）从标准曲线查得糖的量（g）提取液体积（ml）稀释倍数/测定 用样品液的体积(ml)样品重量(g)106100% 数据处理：1. 3 实验结果及分析2. 植物组织中可溶性糖含量的测定管号123456葡萄糖含量（g）020406080100吸光值00.1020.2350.3630.4890.657实验组苹果橘子梨吸光值0.4060.3080.713样品质量0.63990.99520.5743糖含量(mg/g)0.1020.0510.196二 可溶性蛋白质含量的测定1 材料与方法1.1 材料、仪器与试剂1.11 材料 苹果 橘子 梨1.12 仪器 分光光度计 分析天平 样品容量瓶 移液管 试管 试管架 剪刀 研钵 1.13 试剂 a 牛血清白蛋白 配成100g/ml； b 考马斯亮蓝G-250：称取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 90%乙醇中，加入85%（W/V） 磷酸100ml，最后用蒸馏水定容至1000ml。此溶液在常温下可放置一个月 c 90%乙醇 d 磷酸（85%，W/V）。1.2 方法a 标准曲线的绘制 0100g/ml标准曲线的制作 取6支试管，按表28-1数据配制0100g/ml血清白蛋白液各1ml。准确吸取所配各管溶液0.1ml，分别放入10ml具塞试管中，加入5ml考马斯亮蓝G-250试剂，盖塞，反转混合数次，放置2min后，在595nm下比色，绘制标准曲线。表28-1 配制0100g/ml血清白蛋白液管 号123456100g/ml牛血清蛋白量(ml)蒸馏水量(ml)蛋白质含量(mg)01.000.20.80.020.40.60.040.60.40.060.80.20.081.000.10b 样品提取液中蛋白质浓度的测定 待测样品制备： 称取0.51.0克水果，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后离心（4000r/min离心20分钟），滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 测定：另取1支10ml具塞试管，吸取样品提取液1.0Ml，放入具塞试管中，加入5Ml考马斯亮蓝G250溶液，充分混合，放置2Min后在595nM下比色，记录吸光值，并通过标准曲线查得蛋白质含量。（三种水果方法相同，每种水果平行重复2次）2 结果计算 样品蛋白质含量（mg/g鲜重）=式中 C查标准曲线所得每管蛋白质含量（mg）；V提取液总体积（ml）；a测定所取提取液体积（ml）； W取样量（g）。 3 实验结果与分析植物组织中可溶性蛋白质含量的测定 标准曲线管号012345蛋白质含量（g）020406080100吸光值00.0820.2090.2580.3760.446实验组苹果橘子梨吸光值0.1670.1050.130样品质量（g)0.50.50.5蛋白质含量（mg/g）0.0730.0450.057三 讨论 根据实验数据可得，在本次试验中梨的可溶性的糖含量最高，苹果次之，橘子的可溶性糖含量最低，可溶性蛋白质的含量中含量最高为苹、梨次之、橘子含量最少。 据研究表明每100克苹果中含糖量在10%15%之间，是低糖类水果，苹果和梨中含有少量多糖。多糖