第四章-药物定量分析与方法验证

第四章药物定量分析与分析方法验证 第二节分析样品的前处理方法 第一节定量分析方法 第三节药品分析方法验证 练习与思考 基本要求 一 掌握定量分析方法及验证的效能指标 二 熟悉定量分析方法的特点三 熟悉样品的前处理方法 四 了解定量分析样品的前处理方法的进展及在药物分析中的应用 重量分析法容量分析法光谱分析法色谱分析法 第一节定量分析方法 一 重量分析法 生成的沉淀而进行分析的方法 生成沉淀 滤过 洗涤 灼烧 恒重 特点 1 操作繁琐2 结果准确 很少用 一 容量分析法的特点操作简单 快速 比较准确 相对误差 0 2 仪器普通易得常用于测定高含量或中含量组分 原料药含量测定首选 二 容量分析法 二 容量分析法的计算问题1 滴定度 T 每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量 mg 2 滴定度的计算aA 待测物 bB 滴定液 cC dDabT M1 m T m a b M m 滴定液浓度 mol L M 被测物分子量 WA T VB 3 百分含量的计算 1 直接滴定法 W 供试品取样量 设至终点时 消耗滴定液体积为Vml则药物实测质量为V T 浓度校正因数 2 间接滴定法1 生成物滴定法 略 药物 A B滴定2 剩余滴定法 回滴法 药物 A 定 过量 剩余的A B 回滴 V空白试验 V0 滴定剂 3 以相当于标示量 表示 光谱光谱分析法分光光度法分类紫外 可见分光光度法红外分光光度法原子吸收分光光度法荧光分光光度法 三 光谱分析法 三 光谱分析法 一 紫外 可见分光光度法吸收光谱范围 紫外 200 400nm可见 400 760nm灵敏度高 可达10 4g ml 10 7g ml1 特点准确度高 RE 为2 5 仪器价格低廉 操作简单 易普及 应用广泛2 朗伯 比耳定律A ECL吸收系数 摩尔吸收系数 研究分子结构百分吸收系数 含量测定 3 测定方法要求供试品溶液的A应在0 3 0 71 对照品比较法 A供 A对 C供 C对 制剂 原料药 AX AR WX WR 2 吸收系数法 注意 应 100应注意仪器的校正和检定 作为计算浓度的因数进行定量的方法 不是任何情况下都适用的 特别是单色光不纯的情况下 A会随仪器不同而变化 误差较大 但若认定一台仪器 固定其工作状态和测定条件 则C和A间的关系在多数情况下仍符合Lambert Beer定律 3 计算分光光度法 多种 具体按每种药物规定的方法进行如 VA的三点校正法 4 比色法加入显色剂后 按照对照品比较法测定影响显色因素很多 故需注意平行操作空白溶剂 溶剂 显色剂 同法处理 二 荧光分析法灵敏度高 可达10 10g ml 10 12g ml在低浓度进行测定 防止自熄灭作用1 特点用基准溶液校正仪器灵敏度制备荧光衍生物 可提高灵敏度和选择性干扰因素多 需做空白实验样品用量少 操作简单 应用范围较广 2 含量测定原理 当激发光强度 波长 所用溶剂及温度等条件固定时 物质在一定浓度范围内 其荧光强度R与该物质浓度C成正比方法 对照品比较法计算 根据混合物中各组分的色谱行为差异 先行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的方法 是分离分析混合物的最有力手段 按分离原理 吸附 分配 离子交换 排阻色谱分类按分离方法 PC TLC 柱色谱 GC HPLC 特点 高灵敏度 高效能 高速度 应用广泛 四 色谱分析法 1 对仪器一般要求固定相种类 流动相组分 检测器类型不得任意改变其他均可适当改变色谱图20分钟内记录完毕2 系统适用性试验色谱柱的理论板数 n 5 54 tR Wh 2 2分离度 R 2 tR1 tR2 W1 W2 应大于1 5重复性 对照液连续进样5次 峰面积RSD 2 0 拖尾因子 T W0 05h 2d1应在0 9 1 05 一 HPLC法 流动相 真空脱气机 四元泵 自动进样器 紫外检测器 荧光检测器 蒸发光散射检测器 液质联用仪 质谱检测器 流动相 对于以C18为固定相的反相色谱系统 常用甲醇 水 间或加以乙腈 缓冲液等为流动相 有机溶剂比例通常不低于5 四元泵 自动进样器 色谱柱 填充剂常用 十八烷基硅烷键合硅胶 检测器 测定方法1 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 对照液 R ARCR 峰面积含量 内标液 S ASCS 供试液 X AXCX f AS CS AR CR f A S C S Ax Cx Cx f Ax A S C S 例 2 外标法测定供试品中主成分含量 对照液 R ARCR 供试液 X AXCX CXCR AXAR CX CR AX AR 要求 进样量准确 操作条件稳定 二 GC法1 对GC仪器一般要求载气 氮气色谱柱 填充柱或毛细管柱填充柱 内径2 4mm 长1 10m 内装吸附剂高分子多孔小球或涂渍固定液