版技术分析报告复方感冒口服液的研究.doc

版技术报告复方感冒口服液的研究 作者： 日期：2 复方感冒口服液的研究技术报告 完成单位： 青州市人民医院烟台大学药学院青州市药监局 课题负责人：刘金柱 曹永生 兰永杰 袁相秋 徐本明yanda摘要 目的： 探讨复方感冒口服液组方机理、制备及质量控制、药效学研究、临床疗效。方法：应用中西医理论和现代药学知识，对感冒的病因、病机进行分析归纳，并从现代药理学的研究成果中选择具有解热、镇痛、抗炎、抗病毒、增强免疫作用中药，依据中医的辩证施治和君、臣、佐、使的原则，选药组方、正交法优化蒸馏液提取工艺并水提醇沉法制备、用TLC定性、HPLC定量质量控制、药效学研究、以大青叶合剂为对照药采用多中心随机试验。结果: 复方感冒口服液的组方药物，既符合中西医结合的原则，又尊重了中医药祛风解表、清热解毒、除湿止痛的理论，同时得到了现代药理学证实,具有解热、镇痛、抗炎、抗病毒、增强免疫作用的科学依据、TLC定性斑点明显、HPLC定量准确、平均加样回收率99.63%，试验组和对照组的临床总有效率分别为94.82%-75.01%,两组疗效有显著性差异（P0.05）结论：复方感冒口服液遵循中医的辩证施治和君、臣、佐、使的原则、疗效确切，制备及质量可控。解热、镇疼、抗病毒、提高机体免疫作用明显，治疗组疗效优于对照组。关键词 复方感冒口服液 组方机理 质量控制 药效学疗 效观察1复方感冒口服液的研究目的及理论依据祖国医药学是一个伟大的宝库，在当今的世界医学之中更加显示出灿烂的神奇。开展中药复方感冒口服液的研究，具有如下几个方面的意义，其一是进一步发掘和继承祖国医药学的宝贵遗产；其二是以中西医结合、中药功效与药理学结合为中药研究提供科学依据；其次是为了针对不断变化的感冒类型开发研制新的有效药物；进行有效的治疗，保障民众健康体魄，为社会家庭带来安康；此项选题的目的在于利用祖国医药学的优势，开发治疗感冒病毒对人类带来的危害，确保民族的安康，发挥更大社会效益和经济效益。我们拟定之复方感冒口服液，选择了多味既是中医药认为具有祛风解表、清热解毒、除湿止痛功效的药物，又是现代药理研究证实具有解热、镇痛、抗菌、抗炎、抗病毒、增强抗体免疫功能的药物，药物组成：羌活、防风、葛根、苍术、黄芩、板蓝根、金银花、甘草；将原方中口感不佳的荆芥去掉，从老中医治疗感冒经验方加减变化而来的复方感冒口服液，具有祛风解表、清热解毒，胜湿止痛的作用，临床上应用十分有效；03年后改制成口服液用于临床效果显著，2005年2007我们对流感病毒感冒患者作了治疗观察，临床疗效十分显著，对秋季感冒湿邪重者疗效更佳。结果表明，本品具有明显祛风解表、清热解毒、胜湿止痛（解热镇痛、抗菌消炎、抗病毒）作用。详见后附临床观察材料。该方应用临床多年，应用于临床效果也十分显著，由于过去只是在临床上应用，没有用科学的手段进行研究，因此，没有科学依据，我们现在从组方的理论、制剂的制备、质量控制、药理作用、临床疗效观察等方面进行研究，以科学的知识解释复方感冒口服液的先进性及科学性。2复方感冒口服液组方机理的探讨感冒是内科临床上最常见的疾病之一，一年四季均可发病，但又以冬春两季较为普遍。我院根据临床疾病的病因、病机和临床的表现症状及现代药理研究成果，选择了以羌活、防风、板蓝根、黄芩等为主的药物组成方剂，并制备成口服液，临床应用多年，在预防、治疗普感和流感方面，疗效非常理想，特别是在感冒流行期间，更加显示出了中医药的独特优势。下面从几个方面对复方感冒口服液的药物组方机理进行了阐述，探讨其组方的合理性、科学性和临床的使用价值。复方感冒口服液的组方机理，是将中医和西医对从感冒的病因、病机、临床症状、治疗等理论上进行了有机的结合，再从中药功效及临床应用方面与现代药理作用相结合，取其共同认可的作用，从而达到中医的辩证和西医的辩病相结合，中医临床应用与现代临床应用相结合，中药的功能和现代药理相结合，以此将中西医完整的结合在一起，形成一个全新的药剂，使其充分的发挥出药物最大的作用。通过分析认为，该组方的原理完全符合中医的辩证论治和君、臣、佐、使的相关理论，其功能、主治与药物的作用吻合，配伍合理，方解分析严紧，中药的效能与现代药理作用研究结合恰当，寒热药物搭配科学合理；药物既发挥了中医药祛风解表、清热解毒、除湿止痛的功效；又具有现代药理学方面的解热、镇痛、抗菌、抗炎、抗病毒、增强免疫功能的药效作用，达到了治疗和现代药学的科学性，而且功效主治与临床用符合临床实际病症，具有很好的使用性。经过对制备试验认为，复方感冒口服液的生产制备，既保持了中药传统汤剂和中医气味论治病的特点，又符合现代制剂合剂的标准，各环节均有了操作规程；净化灌装、高压灭菌消毒等，均没有改变药物的有效成分和含量；其制备简单，制备流程、设备操作规范。并且对后序的质量控制奠定了良好的基础。因此将该制备和质量控制作为复方感冒口服液的科学依据，具有其先进性和使用性。通过对复方感冒口服液的药效研究证明，解热作用：实验证实复方感冒口服液具有明显解热作用，退热速度快且稳定持久；镇痛作用：热板法及扭体法证实：复方感冒口服液镇痛作用确切；免疫作用：实验证实复方感冒口服能增强机体非特异性免疫功能；抗病毒作用；复方感冒口服液对流感病毒和呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用。该药毒性低、是一种应用安全的药物。从治疗结果来看，复方感冒口服液抗病毒效果良好，对流感功不可没，退热速度快且稳定，全身症状消退快，可作为治疗普通感冒及流感病毒感冒的首选药。由于影响课题研究实施的因素较多，为确保临床观察结果的科学性，在实施研究过程中遵循随机、对照的原则，按照制定的诊断标准，纳入标准排除标准选择研究对象。治疗组用复方感冒口服、对照组用复方大青叶合剂。结果：治疗组疗效明显优于对照组两组疗效有显著性差异（PDCB,其中A与D有显著性影响,取最佳条件A3与D3,结合生产工艺条件,由直观分析得提取挥发油最佳工艺条件A3B1C2D3既挥发油提取中选择药材粒度2040目,加水6倍,冷浸时间3 h,煎煮时间为6 h为最佳工艺。工艺验证 按提取挥发油最佳工艺条件进行验证实验,共2次,挥发油量分别为0. 68 mL, 0. 65mL,平均值为0. 665 mL,高于正交表中全部9个试验结果。 表3方差分析表方差 离差平 来源方和 自由度 方差F值显著性A 0.02282 0.011 3423B0.00120.0051C0.010720.00511D0.020520.010320 SSe0.00120.0051F(2,2)0.01=99F(2,2)0.05=195.5.3 水提取物的试验：板蓝根、黄芩、金银花、甘草、等五味药物的水溶性成分提取情况，采用水煎煮法，提取三次，第一次4h,第二次1h,第三次1h，三次的用水量为药物10倍，10倍，4倍，结果见表。表：葛根等药物煎煮次数得干浸膏比较结果溶剂用量（ml）干浸膏重（g）比较结果10000分两次加入10000分两次加入700030001000600030001000697658118757638130三重量较两次提取多结果表明，以三次提取浸膏重量较多，故本工艺提取次数为三次提取。最佳工艺条件为第一次10倍量水,第二次10倍量水,第三次4倍量水。醇沉条件为室温静置24 h为最佳工艺。5.5.4 乙醇沉淀除杂质的问题：水煎煮时，提取出的方中药物有效成分，同时也溶出不少淀粉、粘液质、蛋白质、树脂鞣质等无效成分，这些成分若不除去，口服液的澄清度就很差，放置不就会产生沉淀，影响质量。采用乙醇沉淀法除去这些杂质，对醇沉后是否影响药效的问题，进行了研究。以醇沉前为甲工艺，醇沉后为乙工艺，将甲乙两组的药液分别对小鼠解热、镇痛、抗炎影响试验。实验选用健康幼年昆明种雄性小鼠42只，体重1113g，随机均分三组，分别为甲、乙药物组和蒸馏水对照组。结果甲、乙两组的制备工艺对小鼠解热、镇痛、抗炎均有效，与对照组比较有显著差异，而两种工艺制备的复方感冒口服液的作用无明显差异。用乙醇的量和浓度实验认为，用乙醇量为药液的5倍，分别沉淀三次，浓度分别为50%、70%、80%，结果以5倍量的乙醇、浓度70%左右、沉淀三次为最好，此时的药液澄清度明显改善。故我们选用三次醇沉淀法去除杂质。5.5.4 防腐剂的筛选：口服液系半无菌制剂，配液、分装均在半无菌条件下进行，为了保证制剂的质量，防止微生物的生长，可加入防腐剂，参照中国药剂学对防腐剂的种类、用量进行了筛选，经对山梨酸、苯甲酸、苯甲酸钠实验认为，三者都有较强的防腐作有，但山梨酸较苯甲酸钠昂贵，苯甲酸久置后产生浑浊，所以本剂选用苯甲酸钠，用量0.3%.5.5.5 关于PH值的调整：药液在配液时的PH值4.0，此时药液较浑浊，将PH值调节在6.0时，溶液澄清，再增大时药液又变浑浊，因此将PH值调节在4.56，以保证灭菌后PH值能保证在4.56.0，可增加制剂的稳定性。5.5.6 制备药液灌装前后对有效成分的影响：分别取灌装前的复方感冒口服液和灌装后消毒的样品各三批，测定PH值、相对密度、黄芩甙的数值，观察其变化情况，结果见下表： 表：三批复方感冒口服液灌装前后的比较灌 装 前灌 装 后批号PH值相对密度黄芩甙含量（mg/ml）PH值相对密度黄芩甙含量（mg/ml）0502010505010507014.504.554.601.151.171.181.801.831.964.504.554.601.151.161.181.801.831.95上述表中试验数据表明，该制剂的灌装前后对所含成分影响不大，可按本方法进行操作。557 根据试结果来确定最佳工艺：实验室筛选出的工艺，在中药制剂室应用多功能提取器重复生产三批样品，结果表明，本工艺适合医院制剂室生产。6质量控制的研究6.1复方感冒口服液的质量控制【处方汉语拼音】：Fu Fang Gan Mao Kou Fu Ye【处方】羌活、防风、葛根、苍术、板蓝根、黄芩、金银花、甘草、苯甲酸钠，蔗糖，配制成1000ml药液即得。 【制法】以上八味药物经鉴定，加工炮制合格后，称量配齐，按煎煮法分别煎煮三次。（4hr、1hr、1hr）,煎煮的同时提取蒸馏液备用，将三次煎液合并，沉淀、过滤，浓缩成稠膏状（相对密度1.181.22,80）,取出放凉，再按水提醇沉法加入95%乙醇沉淀，收取上清液，回收乙醇，兑入蒸馏液加防腐剂，取出，冷藏，过滤，再加入糖浆至1000ml，混匀，分装，灭菌，既得。【性状】本品为棕黄褐色液体，味甜【鉴别】（1）取本品40ml,加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5l,供试品溶液，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，使成条状，以氯仿甲醇水（7：2.51：0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（2）取本品20ml，水浴蒸干，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液，另取黄芩甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5l,分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯乙酸乙脂甲醇甲酸（10：3：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】 相对密度 应不低于1.05pH 值 应为4.56.0装量 照装量法（附录XC）应符合口服液装量项下规定微生物限度检查 每1ml中含有细胞数小于100个，霉菌和酶母菌数小于100个，无致病菌。【含量测定】 含量测定照高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.06%磷酸（47：53）；为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩甙峰计算应不低于已于1500。对照品溶液的制备：准确称取黄芩甙对照品（60减压干燥至恒重）7.5mg溶于甲醇，以甲醇定溶至100ml，既得对照品溶液。供试品溶液的制备：取复方感冒口服液1ml水浴蒸干，用甲醇8ml洗溶于10ml容量瓶中，超声处理30min，放置至室温，加甲醇至刻度，摇匀，静置，经0.45m微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取滤液，既得。测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10m,注入液相色谱仪测定，即得。本品每10ml含黄芩甙（C21H18O11）计，不得少于已于1.76mg。62 复方感冒口服液质量控制的实验研究资料复方感冒口服液的质量研究是根据药性、临床、生产等多方面的因素，经过反复实验研究，分析、比较而得来。因我们首先采用蒸馏法，先提取部分含挥发性成分的蒸馏液，再按常规煎煮法提取中药水溶性有效成分，为去除杂质，本乙醇沉淀法除去；为了确保制剂的质量，我们将葛根和黄芩所含的主要成分葛根素、黄芩甙以及PH值、相对密度等作为重要的鉴别和浓度依据，从而确保制剂的质量。试验情况如下：621 性 状；观察了5批样品，颜色均为棕黄色液体，若PH低于4或高于6时，产生沉淀后颜色将会变成淡黄棕色。本品中羌活等含有多种挥发油，气辛，黄芩等味苦，加入糖浆后，味甘苦。622 葛根素的鉴别试验：取本品40ml，水浴蒸干，加甲醇10ml,放置2h,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.51ml使溶解，作为供品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一羧甲基纤维钠为黎合剂的硅胶H薄层板上，使成条状，以氯仿甲醇水（7：2.5:0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。制备不含葛根的液本，以上法制成阴性样品溶液，作阴性对照。见图1。623 黄芩甙的鉴别试验：取本品20ml，水浴蒸干，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取供试液5l,供试品溶液10l，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯乙酸乙脂甲醇甲酸（10：3：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。制备不含黄芩的液体，以上法制成阴性样品溶液，作阴性对照。见图2。复方感冒口服液（鉴别图谱）图 1 图 2 1 2 3 4 1 2 3 4 1.供试品 1.供试品 2.葛根素对照品(批号:2004018) 2.黄芩甙对照品(批号20040324) 3.葛根素对照品药材 3.黄芩甙对照品药材 4.阴性对照品 4.阴性对照品 (对照品由中国药品生物制品检定所提供) 6.2.4 pH的检查:实验方法:仪器:25型酸度计,以甘汞电极变参比电极,玻璃电极为指示电极.将三批样品的液体分别测定,具体方法,开机30min待机稳定后,按25型酸度计操作方法,先用邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液(PH4.0(进行定位,再以磷酸盐标准缓冲液(PH 6.8)校正无误后,分别从三个包装单位中抽取本品40ml,倾于标准烧怀中,连续测定三次,取读数平均值作为本品的PH值,药液在配液时的PH值得,此时药液较浑浊,将PH值调节在5时,溶液澄清,再增大时药液又变浑浊,因此将PH值调节在4.56.0,以保证灭菌后PH值能保证在4.56.0,可增加制剂的稳定性.经对三批样品所测定数值结果见表.表:不同批号样品的pH值的测定批号20050801200501201200502012005050120050701PH值4.84.74.64.64.5考虑到我们生产的实际情况，我们将pH值定在4.56.0；并且此时的稳定性也最好。625 相对密度检查：实验方法：仪器：比重瓶、分析天平、操作方法：分别取三批样品的液体（按照年版中国药典（一部）附录VIIA相对密度测定法，1比重瓶法（1）进行试验），取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶（50ml）,装满复方感冒口服液试品（温度在20左右）后，装上温度计（瓶中应无气泡），置20恒温水浴中，放置30min，使内容物的温度达到随着供试液温度20，恒定，有过多的液体从塞孔溢出，随时用滤纸擦干，待液体不再由塞孔溢出，立即盖上罩，迅速将此重瓶自水浴中取出，用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时 结果见表。即得样品的数值为1.15,1.18,1.16.表：不同批号样品的相对密度测定结果批号2005080120050811200509212005091420050701相对密度116117115118116考虑到我们生产的实际情况，我们将相对密度控制在1.05以上。626 微生物限度检查：按2005版中国药典（一部）附录项内微生物限度检查法进行检查，三批样品的检验结果为，每1ml中含有细菌数小于10个，霉菌和酵母菌数小于10个。无致病菌；三批样品的检验均复合要求。627 黄芩甙的含量测定：色谱条件 色谱柱：SymmetryC18（150mm3.9mm,5m）;流动相：甲醇-0.06%磷酸（47：53）；流速：1.0ml/min；检测波长：278nm；柱温：25；进样量：10l。 线性关系考察 分别精取对照溶液2.5、5、10、15、20l,按拟定色谱条件进行测定各2次，记录色彩谱峰面积（Y）与进样量（X），以峰面积积分值为纵坐标，以进样的对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=3.96106X+4.55104（r=0.9998）,说明黄芩甙进样量在0.1875l1.5l范围内与峰面积分值呈良好的线性关系。精密度试验 精密吸取对照品溶液10l，按色谱条件项下的进样，连续进样5次，测得黄芩甙峰面积积分值的相对标准差为1.5%（n=5）.稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、1、2、4、8、12、16、24h时注入液相色谱仪中测定，测得黄芩甙的相对标准差为1.9%说明供试溶液在24h内稳定。重现性试验 精密吸取批号为050201的复方感冒口服液，按供试品项下方法制备5分，分别进样10l，按色谱条件进行测定，测得黄芩甙平均含量为1.80mg/ml，RSD=1.3%(n=5),说明本方法重现性良好。加样回收率试验 取已知含量的样品（批号：050201），精密吸取6分，分别加入一定量的黄芩甙对照品，按供试品溶液项下方法制备，并按色谱条件项下进行测定，经计算后回收率试验结果见下表。表：加样回收试验结果（n=5）样品含量加入量测得量回收率XRSD(g)0.2080.2080.2080.2080.2080.208(g)0.1780.1780.2080.208 0.238 0.238(g)0.3820.3830.4130.4160.4390.451(%)98.9699.4799.2