兽医微生物实习总结.doc

动物科技学院本、专科生毕业实习总结姓 名： 学 院： 专 业： 班 级： 学 号： 2012年 5 月 31 日学生姓名学号专业班级 指导教师实习地点预防兽医微生物实验室一、实习目的、任务1.熟悉实验室内微生物鉴定的基本流程。2.熟练实验室内细菌的鉴定的操作3.了解沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性；4.熟悉沙门氏菌常规微生物学诊断法；5.掌握沙门氏菌生化试验的方法和原理；6熟悉沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现；二、实习内容 未知细菌的分离鉴定和培养，生化特性，以及微生物实验室常用的实验操作三、实习效果与收获 通过这次实习，使我意识到了自身存在的一些不足，比如动手能力太差，对书本上的知识理解不够深入，最重要的是通过这次实习，我收获了很多。这次实习，我主要做的是对一个细菌的简单的鉴定。沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。1 实验材料1.1菌种：待检的病鸭体内分离的沙门氏菌1.2培养基：半固体培养基、普通平板、麦康凯平板、三糖铁高层斜面、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水1.3生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、枸橼酸盐、硫化氢、尿素1.4生化试剂：吲哚试剂、M-R试剂、V-P试剂2 实验内容2.1 配培养基营养琼脂培养基：称取33.0g营养琼脂于1000mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节PH7.30.1，121高压灭菌15min，冷却后制成平板。麦康凯琼脂培养基：称取55.0g麦康凯琼脂于1000mL蒸馏水中加热煮沸至完全溶解，调节PH7.20.2，121高压灭菌20min，冷却后无菌条件下制成平板。三糖铁琼脂：称取三糖铁琼脂63.4g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121高压蒸汽灭菌15min，冷却后制成高层斜面。枸橼酸盐培养基（购自北京陆桥技术有限责任公司）；葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖微量生化管（购自杭州天和微生物试剂有限公司）；胰蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水麦康凯培养基，呈红褐色，用于肠道菌的分离与鉴定；能分解乳糖的细菌-菌落红色；不能分解乳糖的细菌菌落灰白色。三糖铁琼脂，制成三糖铁高层斜面，呈红褐色，用于测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵作用及能否产生硫化氢；能发酵乳糖、蔗糖，培养基呈黄色；发酵葡萄糖不发酵乳糖、蔗糖，底层呈黄色、斜面部分为红色(少量酸接触空气而氧化细菌生长利用含氮物质,生成碱性化合物)；能产生硫化氢，培养基呈黑色；能产气的细菌，底层琼脂内有气泡。葡萄糖蛋白胨水，黄色液体培养基，用于增菌培养，做MR,VP试验。蛋白胨水，无色液体培养基，用于增菌培养，做吲哚试验。2.2 细菌的分离培养无菌条件下将待检菌，取单菌落分别接种于普通培养基，麦康凯，恒温培养24-48小时后观察菌落的生长情况观察每种平板上细菌的生长情况，比较单个菌落的形态：染色镜检。2.3 观察结果观察麦康凯、普通平板上细菌生长情况。该分离菌在普通琼脂平板上可形成灰白、圆形、光滑、湿润、微隆起、边缘光滑、直径12mm的菌落;在麦康凯培养基上长成半透明、圆形、湿润、直径约0.51mm的菌落。该分离菌为革兰氏阴性小杆菌。分离培养实验操作过程中由于实验不小心出现了写差错，麦康凯平板上长有两种菌落，粉红色与灰白色中间带一黑点的菌落。粉红色的是大肠杆菌，能分解乳糖，第一次划线处有菌苔生成，第二次划线处有较多单个菌落出现，直径约2mm，为扁形光滑突起粉红色菌落，第三次划线处基本没有菌落出现；白色中间带一黑点的菌落为沙门氏菌，不能分解乳糖，第一次划线处看不到，第二次划线处有沙门氏菌菌落，但是仅观察到3个菌落，为扁形光滑突起灰白色菌落，直径约1.5mm，第三次划线处基本无细菌。分析此培养基结果，成功分离得到沙门氏菌的菌落，达到实验目的，但是划线技术不够成熟，划线后细菌在培养基上生长的线条不优美，非常凌乱。普通平板上也成功分离得到沙门氏菌的菌落，达到实验目的，但是依旧划线技术不够成熟，划线结果不甚理想。挑取麦康凯培养基上的沙门氏菌的菌落，做镜检，革兰氏染色，结果显示大部分为紫色，少部分为红色，染色结果不甚理想，但是可以观察到是杆菌。革兰染色脱色时间不够，没有染好，技术不够成熟。2.4做生化试验2.4.1五糖发酵试验在无菌条件下，用接种针将分离纯化的疑似大肠杆菌单菌落接种于五糖微量反应管，并封口标号，置于37恒温培养22-24h后观察结果。变黄色者为阳性，不变色者为阴性。4.2三糖铁试验用接种针将疑似大肠杆菌单菌落划线接种于三糖铁斜面上并进行穿刺，于37恒温培养22-24h后观察斜面底层颜色变化及产气情况。若斜面和底层变黑则有H2S产生。若斜面和底层均变成黄色为产酸，若为红色为产碱。4.3IMVC试验吲哚试验：将疑似大肠杆菌的菌落分别接种于蛋白胨水培养基，在培养24h后的蛋白胨水培养基内加3-4滴二甲苯，摇动数次，静置1-3min，待二甲苯上升后，沿试管壁徐徐加入两滴吲哚试剂，观察其颜色变化。在二甲苯和培养物之间出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者为阴性。甲基红试验：将疑似大肠杆菌的菌落分别接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，在培养24h后的葡萄糖蛋白胨水培养物内加入甲基红试剂5滴，培养基呈红色者为阳性，呈黄色者为阴性。VP试验：将疑似大肠杆菌的菌落分别接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，培养24h后，将葡萄糖蛋白胨水培养物内加入3-5滴6萘酚溶液（甲液），然后加入等量的16KOH（乙液），用力振荡，数分钟内出现红色者为阳性，不变色者为阴性。柠檬酸盐利用试验：用接种针将疑似大肠杆菌单菌落划线接种于柠檬酸盐斜面上并进行穿刺，培养24h后观察柠檬酸盐斜面培养基上有无细菌生长并观察其颜色变化。若变为蓝色则为阳性，若仍呈绿色为阴性。阴性。2.4.2三糖铁试验用接种针将疑似大肠杆菌单菌落划线接种于三糖铁斜面上并进行穿刺，于37恒温培养22-24h后观察斜面底层颜色变化及产气情况。若斜面和底层变黑则有H2S产生。若斜面和底层均变成黄色为产酸，若为红色为产碱。2.4.3IMVC试验吲哚试验：将疑似大肠杆菌的菌落分别接种于蛋白胨水培养基，在培养24h后的蛋白胨水培养基内加3-4滴二甲苯，摇动数次，静置1-3min，待二甲苯上升后，沿试管壁徐徐加入两滴吲哚试剂，观察其颜色变化。在二甲苯和培养物之间出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者为阴性。甲基红试验：将疑似大肠杆菌的菌落分别接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，在培养24h后的葡萄糖蛋白胨水培养物内加入甲基红试剂5滴，培养基呈红色者为阳性，呈黄色者为阴性。VP试验：将疑似大肠杆菌的菌落分别接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，培养24h后，将葡萄糖蛋白胨水培养物内加入3-5滴6萘酚溶液（甲液），然后加入等量的16KOH（乙液），用力振荡，数分钟内出现红色者为阳性，不变色者为阴性。柠檬酸盐利用试验：用接种针将疑似大肠杆菌单菌落划线接种于柠檬酸盐斜面上并进行穿刺，培养24h后观察柠檬酸盐斜面培养基上有无细菌生长并观察其颜色变化。若变为蓝色则为阳性，若仍呈绿色为阴性。2.5 生化结果判定2.5.1靛基质试验（吲哚试验）取出试管（蛋白胨水）乙醚1ml，振荡，静置，待分层后沿管壁加入对二甲基氨基苯甲醛3-5滴，在分界处出现红色玫瑰吲哚为阳性。2.5.2葡萄糖蛋白胨水一分为二（1）甲基红（MR）试验：取出试管加入甲基红3-5滴，摇匀，培养基变红色为阳性，不变色为阴性（2）VP试验：取出试管VP甲液0.6ml，摇匀再加VP乙液0.2ml，15min后看结果，变红为阳性，不变为阴性，橙色为结果不可信，需重做。靛基质试验(吲哚试验)原理：细菌若含有色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。培养基：蛋白胨水试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+培养基液面为黄色：应用：用于肠道杆菌的鉴定试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+培养基液面为黄色：应用：用于肠道杆菌的鉴定甲基红试验原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性。培养基：葡萄糖蛋白胨水试剂：甲基红试剂(pH4.2红色-pH6.3黄色）结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌V-P试验原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。培养基：葡萄糖蛋白胨水结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+培养基不变色：应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌。细菌生化反应结果记录表三糖铁糖发酵甲基红VP试验吲哚硫化氢脲酶枸橼酸盐斜面底层硫化氢葡萄糖乳糖麦芽糖甘露醇蔗糖沙门红黄+-+-+-+-+总之，通过这几个月的实习，我收获了很多的理论知识的同时，也收获了很多的实践经验，本次实习，我认真努力的完成老师的安排，虽然有些实验结果不是令人很满意，但我在