科研训练中期考核填表.doc

甘肃农业大学学生科研训练计划中期考核表学院：（盖章） 填表时间：2011 年11 月 8日项目名称牦牛肉品质鉴定和基因的SSCP测定起止时间2011年 8 月1 2012 年 4 月1项目批注号主持人姓名李艳慧班级、专业08动科一班上学期补课门数 0 门项目经费支出情况资助总金额（元）800（元）剩余金额（元）支出科目 金额（元）备注（注明经费支出时间）总 计项目执行情况一. 项目进展的具体情况（已完成的研究内容）到目前为止,已经完成了：1.对选择牦牛(Bos grunniens)天祝白牦牛(108 头)、甘南牦牛(68 头)和青海牦牛(46头)的采血,DNA的提取保存.2.完成了对DNA的引物设计:扩增牦牛第 4 外显子及部分第 3 和第 4 内含子；根据GenBank 中普通牛 (Bos tauras) LEPR 基因序列(GenBankNo:W_001494806)，再 设计 2对引物 P2和P3，其 中P2引物扩增第5外显子及部分第 4和第5内含子，P 3引物扩增第 8外显子及部分第 7和第 8内含子。3.p2，p3引物完成了pcr条件的摸索，掌握了其最佳的组合温度及退火温度，时间，并通过琼脂糖凝胶电泳的检测，得出明亮的条带。P1引物经多次试验未找到适宜退火温度，电泳检测无明亮条带。4.p2引物所对应的第五外显子继续进行聚丙烯酰胺凝胶电泳的测试。取2 uL PCR 扩增产物，加 入 8 uL 变性上样缓冲，9 8变性 10 min，立 即放入冰浴退火。用 12的非变性聚丙烯凝在 200 V 电压下，电 泳槽内水循环温度 7电泳 19 h，并用银染法染色。经两次实验未发现多态性。二研究中使用的具体材料（含参阅的书籍和论文目录，使用的检索目录，实验材料和有关数据等。）（1）参考的数目：1 F. Gerbens, F. J. Verburg, H. T. Van Moerkerk. et al.Associations of heart and adipocyte fatty acid-binding protein gene expression with intramuscular fat contentin pigs J. Animal Science, 2001, (79):347354.2 李祯, 曹红鹤, 储明星，等.中外11个猪种H-FABP基因PCR-RFLP的研究J. 畜牧兽医学报, 2003，34(4): 313317.3 姜延志, 李学伟. 猪脂肪细胞型结合蛋白基因Bsm位点多态性与肌内脂肪含量的相关研究J. 中国畜牧杂志, 2006, 42(7):13.4 Wang Q, Li H, liu S. et al. Cloning and tissue expression of chicken heart fatty acid-binding protein and intestine fatty acid -binding proteingenes J.AnimBiotechnol, 2005, 16(2):191201.5 Hamilton J A. Fatty acid transport: difficult or easy J. Lipid Res, 1998, (39): 467481.6 Storch J, Thumser AE. The fatty acid transpo -rtfunction of fatty acid-binding proteins J. Biochim Biophys Acta, 2000, (1486): 2844.7 Zimmerman AW, Veerkamp JH. New insights into the structure and function of fatty acid-binding proteins J. Cell Mol Life Sci, 2002,(59): 10961116.8 Likic V A, uranic N, Macura S. et al. A “structural”water molecule in the family of fatty acid binding proteins J. Prot Sci, 2000,(9): 497504.9 Hertzel VA, Bernlohr DA. The mammalian fatty acid -binding protein multigene family: mol ecular and genetic insight into function J.TEM, 2000, (11):175180.10 Kurtz A, Zimmer A, Schnutgen F, et al. The expression pattern of a novel gene encoding brainfatty acid binding protein correlates with neuronal and glial cell development J. Development, 1994,(120):26372649.11 Gerbens F, Rettenberger G, Lenstra J A. et al. Characterization, chromosomal localization and genetic variation of the porcine heartfatty acid binding protein gene J. Mamm Genome, 1997, 8 (5) : 328332.12 周国利, 朱奇, 郭善利，等. 鲁西黄牛H-FABP 基因的多态性及其与肉质性状关系的分析J . 西北农业学报, 2005, 14(3): 57.13 文力正, 赵玉民, 张国梁，等. 草原红牛H-FABP基因单核苷酸多态性及其对肉质的影响J. 中国农学通报, 2008, 24(5): 1721.14 李武峰, 许尚忠, 曹红鹤，等. 3 个杂交牛种HFABP基因第二内含子的遗传变异与肉品质性状的相关分析J. 畜牧兽医学报, 2004, 35(3): 252255.15李兴芳，柏学进，龚宜超等, 渤海黑牛H2FABP基因外显子2的序列测定与分析J.安徽农业科学, 2009, 37 (10) : 4436 443816李兴芳，柏学进，董懿为等,布莱凯特牛心脏脂肪酸结合蛋白基因的序列测定及分析J.中国畜牧兽医 2010，37（9） 17王 卓, 昝林森.,秦川牛H2FABP 基因第1 外显子SNP 及其与部分肉用性状相关性的研究J. 西北农林科技大学学报( 自然科学版), 2008,36(11)18钟金城，马志杰，陈智华，等.牦牛心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的克隆及序列分析J.中国农业科学2006,39(8):1639-165019 Gerbens F, Harders FL, Groenen MA. et al. A dimorphic microsatellite in the porcine H-FABP gene at chromosome 6 J. Animal Genetics,1998,（29）: 398413.20 王彦, 朱庆, 舒鼎铭，等. 鸡H-FABP 基因多态性及其与肌内脂肪含量的相关研究J. 中国畜牧杂志, 2007, 43(11): 15.21D.Nechtelberger,V.Pires,J.Soolknet.et al.ntramuscularfat content and genetic variants at fatty acid-binding protein loci in Austrian pigs J.22 Van Nieuwenhoven F A, Vander Vuss e C J, Gl at z J F. Mem-brane associated and cytoplasmic fatty acid binding proteins J . Lipids, 1996, 31: 223-227.23 U ysal K T , S cheja L, Wiesbrock S M, et al. Improved glucoseand lipid metabolism in genetically obese mice lacking aP2 J .E ndocrinology, 2000, 141: 3388-3396.24 Coe N R, Simps on M A, Bernlohr D A.Targeted disruption of the adipocyte lipid-binding protein ( ap2 protein ) gene impairs fat cell lipolysis and increases cellular fatty acid levels J.Lipid Res, 1999,40:967-972.25 Wulf D M ,Tatum J D, Green R D, et al. Genetic influences on beef longissimus palatability in Charolais and Limousin sired steers and heifersJ.J AnimSci1996,74:2394-240526 Armstrong M K,Bernloh r D A,St rorch J,etal.The purifica-tion and characterization of a fatty acid binding protein specific to pig adipose tissue J.Biochem,1990,267(2):373-378.27 王启贵,鸡FABP基因克隆、表达特性及功能研究D.哈尔滨:东北农业大学,2004.Wang Q G.Cloning, expression and function of chicken FABP genes D.H aerbin:Northeast Agricultural University, 2004.(in Chinese)28 刘艳妍, 昝林森, 牛A-FABP基因的多态性及其与秦川牛肉用性状的关联分析D. 西北农林科技大学, 201029 王卓，昝林森, 秦川牛H-FABP、A-FABP和E-FABP基因SNPs及其与部分肉用性状关联分析D. 西北农林科技大学, 200830 郝荣超,杨国忠,杨翠军.草原红牛及其杂种后代A-FABP第4外显子遗传多态性分析J 基因组学与应用生物学，2010,29 (5 );865-870 .31 刘艳妍,昝林森.A-FABP基因5侧翼区多态性及其与秦川牛肉用性状的关联分析J 畜牧兽医学报, 2010 ,41 (6) :644265032 杨志刚,王宝维,葛文华,等. A-FABP基因内含子2多态性及A-FABP基因在鹅组织中的差异表达研究J 中国畜牧杂志,2009,45(17)33 张学余,韩威,李国辉,等. A-FABP和H-FABP基因多态位点及聚合基因型对白耳鸡胸肌肌内脂肪含量(IMF)的效应分析J 云南农业大学学报,2010,25(4)（2）使用的检索目录：CNKI（3）实验材料：FABP基因.三种不同的PCR扩增引物三具体的研究方法（附实验报告、实习报告、调查报告等）1. 引物设计和 PCR 扩增。 扩增牦牛第 4 外显子及部分第 3 和第 4 内含子，此引物为p1引物；根据GenBank 中普通牛 (Bos tauras) LEPR 基因序列(GenBank No：N W_001494806)，再 设计 2对引物 P2和P3，其 中P2引物扩增第5外显子及部分第 4和第5内含子，P 3引物扩增第 8外显子及部分第 7和第 8内含子。3对引物扩增产物大小分别为 473、42 3和232 bp。2PCR体系建立及条件摸索。（1）.p2引物体系组分(components)用量 (dosage)总用量Up Primer0.6L6LDown Primer0.6L6LTaq酶10L105LDNA模板1L1LddH2O7.8L78LPCR反应程序955 min9430 s7245 s7210 min5245 s435cycle(2) p2引物体系组分(components)用量 (dosage)总用量Up Primer0.6L6LDown Primer0.6L6LTaq酶10L110LDNA模板1L1LddH2O7.8L68LPCR反应程序955 min9430 s7245 s7210 min5530 s435cycle（3）.扩增产物用 1.5琼脂糖凝胶电泳检测，再通过成像仪器分析有无明显条带，从而筛选出最佳PCR条件。具体方法：首先设计20ul体系，然后初步了解PCR仪器的使用方法和原理，先使用梯度PCR仪找出适宜的退火温度区间，再通过常规PCR仪和琼脂糖凝胶电泳来选择最佳温度，从而确定最佳条件。四.导师的指导情况（详列时间及次数等）从2011.8.1到2011.9.1实验进行了一个月，指导教师胡江认真指导实验的整个过程，顺利完成了第一阶段的实验任务。五. 取得的阶段性成果（附具体材料或论文）1.成功的提取DNA样本并设计出适宜的，具可操作性的引物条件。2.p2，p3引物成功的完成了PCR条件的摸索，获得最佳P