重庆市动物疫病免疫抗体监测.doc

附件重庆市动物疫病免疫抗体监测技术规范（试行）1范围本规范规定了动物疫病免疫抗体监测的病种、采血（采血器材、采血时间、采血方法、采血数量、全血保存、血清分离与保存）、检测方法、检测结果记录与汇总、血清留样等技术。本规范适用于重庆市行政区域内动物疫病免疫抗体的监测活动。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范。然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究可以使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。引用标准有：中华人民共和国动物防疫法；NY/T 541-2002，动物疫病实验室检验采样方法；NY/SY 150-2000，口蹄疫诊断技术规程；GB/T 18935-2003，口蹄疫诊断技术；GB/T 18936-2003，高致病性禽流感诊断技术；NY/SY 156-2000，猪瘟诊断技术规程；GB 16550-1996，新城疫检疫技术规范。3监测病种动物免疫抗体监测重点是重大动物疫病（口蹄疫、高致病性禽流感、猪瘟、新城疫）。4 采血4.1 采血器材采样所需器材：防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、灭菌剪刀、镊子、手术刀、注射器、针头、记号笔、签字笔、空白标签纸、胶布、抗凝剂、75%酒精棉球、碘酒棉球、15mL的离心管、1.5mLEP管、冰袋、冷藏容器、消毒药品、血清采样单和调查表等。4.2采血时间：免疫注射后21天的动物方可采血。4.3 采血方法对采血部位的皮肤先剃（拔）毛，碘酊消毒， 75%的酒精消毒，待干燥后采血。采血方法推行生猪站立式或仰卧式前腔静脉、牛羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血，采血过程严格无菌操作。4.4 采血数量单一病种抗体监测的每头（只）采集23mL全血，多病种抗体检测的每头（只）采集510mL全血。4.5 全血保存采集好的全血转入盛血试管，斜面存放，室温凝固后直接放在盛有冰块的保温箱，送实验室。从全血采出到血清分出的时间不超过10h。4.6 血清分离与保存4.6.1 分离血清凝固全血在室温24h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入4冰箱48h后，待大量血清析出时，吸出血清。必要时经离心机3000rpm 、30min离心，吸出血清。4.6.2 血清保存及运送分离的血清，一般不加防腐剂。血清若在12周内即可检验，可放在4冰箱内保存；如果保存时间较长，应放在-20-80冰箱内保存。运送血清时可将血清放在盛有冰块的保温箱中运送。4.6.3血清编号及采样单填写采血时应按动物血清采样单的内容详细填写采样单，动物血清采样单一式三份，一份由被采样单位保存，一份由送检单位保存，一份由检测单位保存。动物血清采样单详见附表1。5抗体检测方法 常见动物疫病免疫抗体检测标准及方法详见附表2。6检测结果记录与汇总6.1 抗体效价记录 每份血清检测完毕，分滴度（效价）进行记录。抗体结果记录表详见附表3。6.2 抗体检测结果汇总以监测区县、乡镇、规模畜禽场、行政村为单位，分单位、时间、动物病种、动物种类、动物年（月）龄等分滴度进行汇总。抗体结果汇总表详见附表4。7血清留样血清监测完以后，需要对血清进行编号留存，填写血清留样记录表。血清留样记录表详见附表5。8 附表1、动物血清采样单；2、常见动物疫病免疫抗体检测标准及方法；3、抗体结果记录表；4、抗体结果汇总表；5、血清留样记录表。表1 动物血清采样单血清样品编号动物种类种（蛋）用日龄耳标号免疫情况健康状况采样地点抽样比例市场样品来源地备注疫苗种类生产厂家/批号免疫剂量免疫时间（乡镇、村、养殖场、屠宰场、市场、畜主）被采样单位: 采样时间 采样人（签字）：采样单位:表2 常见动物疫病免疫抗体检测标准及方法分类动物疫病种类执行标准检测方法国家强制免疫的重大动物疫病禽流感GB/T 18936-2003血凝-血凝抑制试验（HA-HI）和琼脂免疫扩散试验（AGP）新城疫GB 16550-1996血凝-血凝抑制试验（HA-HI）口蹄疫GB/T 18935-2003和NY/SY 150-2000正向间接血凝试验（IHA）和液相阻断酶联免疫吸附试验（LaP-ELISA）猪 瘟NY/SY 156-2000正向间接血凝试验（IHA）表3 抗体结果记录表样品编号动物种类血清/组织份数疫苗接种种类接种时间检测项目（检测项目： 依据标准： ）诊断试剂（需要填写试剂名称、厂家、生产批号、有效期等 ）主要仪器血清/组织编号检测项目、方法及结果新编号原编号项目方 法结果新编号原编号项目方 法结果备注检验人复核人检验日期表4 抗体结果汇总表区县监测场点情况检测方法：乡镇、村、养殖场、市场、屠宰场、畜