凝聚胺操作规程1.doc

北京京都儿童医院输血科专业领域：血库文件编号： JD凝聚胺发交叉配血操作程序版本及修订后：A/0启用日期：2014.12.25编写者： 陈静 审批者：宋国维凝聚胺发交叉配血操作程序1、 目的 建立凝聚胺交叉配血操作规程，确保凝聚胺交叉配血试验操作的准确性和规范性。2、 适用范围 适用于凝聚胺交叉配血的全过程3、 试剂 3.1厂家： 珠海贝索生物技术有限公司 3.2产品有限期：24个月 3.3试剂名称：LIM低离子溶液、Polybren凝聚胺溶液及Resuspending悬浮 液。 3.4实际规格：LIM低离子溶液130ml/支、Polybren凝聚胺溶液20ml/支 Resuspending悬浮液20ml/支 3.5试剂稳定性：试剂未开启：2-8避光保存，稳定至包装盒上的效期二年。 3.5试剂开启后请注明日期并签名，效期6个月。4、 质控操作 按照输血相容性检测室内质控操作程序执行，质控通过后填写血库IQC检测反应记录单5、 检测原理 凝聚胺试验希先利用低离子溶液促进红细胞抗原和血清（血浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间免疫性凝集，让已发生抗体反应的红细胞的间距缩短，更能引起反应的抗体和别的红细胞产生反应二形成免疫性凝集，有凝聚胺引起的非特异性凝集反应可被后加入的悬浮液所中和二离散，如发生免疫性反应凝集就不会散开，为阳性反应（+）；如果未发生免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应（-）。6、标本处理6.1核对信息，将检查申请单信息与样本条码信息进行核对，信息一致方可进行 下述操作。6.2标本收集EDTA-K2抗凝血2ml 标本出现溶血、乳糜血，为不合格样品，不能用于检测6.3标本制备6.3.1EDTA抗凝血2ml,离心3000g/3min,分理出血球与血浆待用。6.3.2制备5红细胞悬液，取50ul血球+1000ul0.9生理盐水。7、 操作步骤7.1取洁净试管两支，分别标注主、次侧。主侧管加受血者血清100ul,加供血者5红细胞悬液50ul；次侧管加供血者血清50ul加受血者5红细胞悬液50ul7.2各加LIM0.65ml,混合均匀后再各加Polybren容易2滴，并混合均匀。7.3用血库专用离心机1000g,离心15秒然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。7.4轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。 7.5最后加入 Resuspending2滴，轻轻摇动试管混合并观察结果。7.6结果判定7.6.1如果在30秒1分钟内凝集散开，代表有Polybren引起的非特异性凝集，配血结果相合。7.6.2如果在30秒1分钟内凝集不开 ，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合7.6.3如反应可凝，可将反应液倒在玻片上用显微镜观察7.7凝集判定标准反应强度凝 集4+强反应，单一凝集块，无游离红细胞3+强反应，几个大的凝集块2+很多小的凝集块中混有大的凝集块，无游离红细胞1+在游离红细胞背景下有很多小的凝集块+/-肉眼可观察游离红细胞下小的凝集块，光镜下可观察到很多小的红细胞凝集块-镜下未见凝集块，红细胞均匀分布 7.5判断结果应仔细核对后填写手工、半自动血型血清学原始记录，避免电子报告与原始记录不符。8、 注意事项8.1标本不能用肝素抗凝，肝素是大分子的阴离子物质，可以中和凝聚胺的阳离子，导致假阴性结果。8.2病人在输血过程中或刚输过液不能抽取标本，某些药物如止血敏、KCI、Vitc等会干扰凝聚胺的作用导致假阴性结果8.3血清量不能多加，会提高致敏过程中的离子强度，降低致敏效果。8.4凝聚胺多加可导致悬浮液无法充分分解非特异性凝集，出现假凝集引起假阳性结果。8.5结果在一分钟内观察，阴性结果红细胞迅速散开，阳性结果红细胞不完全散开，弱凝集在30秒内明显减弱或消失。8.6离心转速不能太快或太慢，离心时间不能过长或过短，以免引起假阳或假阴性结果。9、 记录9.1