反向点杂交法检测β地中海贫血在产检中的应用.doc

反向点杂交法检测地中海贫血在产检中的应用【关键词】 ,地中海贫血,反向点杂交,基因诊断【摘要】 目的 探讨反向点杂交(RDB)法检测在产检中筛查地中海贫血的应用价值。方法 采用RDB法，检测54例临床似诊为地中海贫血患者。结果 在54例样本中，检出地贫基因携带者17人。结论 ROD法在检测地贫中，具有高通量、特异性强、操作简便无需接触放射性等优点。【关键词】 地中海贫血 反向点杂交 基因诊断 地中海贫血是一种常染色体隐性遗传性疾病，其临床表现的轻重与珠蛋白基因缺失有着密切的关系1。在国家取消强制性婚检之后，我区近年来重型地贫出生率有所回升，而地贫是可以通过产前筛查和产前诊断来避免重症地贫儿出生，从而达到优生优育，提高国民身体健康的目的。作者采用RDB法能针对中国人群常见的8种和少见的9种地贫突变点检测。共检测54例产检时疑诊地贫患者。现报道如下。1 材料与方法11 标本来源 54例样本(27对夫妇)，2005年10月2006年5月在本院产科进行产检及产前咨询者，年龄2238岁。经血液学检测，Hb正常或轻度下降，MCV、MCH轻度下降。HbA2正常或稍偏高。或家族中曾有地中海贫血患者的咨询者。12 仪器与试剂 PCR扩增仪为美国ABI公司 PE5700，分子杂交仪为琛圳生物技术有限公司产品。试剂为亚能生物技术(深圳)有限公司提供。13 样本DNA提取及PCR扩增 严格按产品说明书进行操作。14 杂交、条件洗膜。2 结果在54例样品中，检出地贫基因携带者17例，其中4142M/N 8例；654M/N 5例；-28M/N 2例；7172M/N 1例；17M/N 1例。3 讨论地贫是人类最早阐明其基因结构和分子缺陷的单基因遗传病之一，反向点杂交（RDB）2是目前国内外应用于地贫基因诊断最广泛的方法之一。其原理：是利用探针和特异性扩增PCR产物（靶DNA序列）杂交，方法是先将待用的探针分别点到硝酸纤维膜上，每个探针一个点，并编上号，再将待测和DNA样本（经PCR特异扩增后的产物，在PCR引物5端预先进行生物素标记使扩增后的产物标记有生物素）与之杂交。经扩增后待测样本中的DNA，在适宜的条件下与具有同源序列的探针结合；后经洗涤，除去未结合的DNA样本，通过显色反应，便能显示出杂交探针的信号。这样一次就可以判断所检测的正常珠蛋白基因和及多种异常珠蛋白基因座位检测。在本试验中。在所检测的的54例样本中，检出地贫基因携带者17例，其中4142M/N 8例；654M/N 5例；-28M/N 2例；7172M/N 1例；17M/N 1例，本地区-地贫基因携带最多的是41-42M/N，与报道3一致。其中有一对夫妇同为CD17M/N贫血基因携带者(见图1、2)；一对夫妇各为CD17和INS携带者(见图3、4)。从遗传咨询的角度来讲,他们所生的小孩有1/4机率为纯合子或为多重杂合子，是重度-地贫患者。而重度地贫目前尚未有效地治疗方法，这样的小孩出生会对家庭和社会造成极大的负担。而地贫基因携带者本人不发病或为轻度贫血，但能把不良基因传至下一代。因而对这一群体应进行婚前、产前基因诊断。以避免重型地贫患儿的出生。综上所述，RDB检测-地中海贫血具有灵敏度高，特异性强，即能做单一样本检测，也能大批量同时检测。如能应用于婚前、产前对-地中海贫血基因携带者进行基因诊断，对遗传咨询的开展和避免重症-地中海贫血患儿的出生有重要意义。图1（略） 图2（略） 图3（略） 图4（略） 注:膜上部一排7个点为正常基因位点,在实验中起到质控作用。参考文献1 伍曼仪，黄绍良.现代小儿血液病学M.福建科学技术出版社,2003:243-2462 Saiki RK,Walsh PS,Levenson CH,et al.Genetic analysis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probesJ.Proc Nstl Acad Sci USA，1989，86:62303 潘红飞,唐任光,徐群青,等.诊断