噬菌斑测病毒滴度

杆状病毒滴度检测实验概要本实验介绍了检测病毒滴度的方法。 实验原理根据噬菌斑数计算病毒滴度。工具/原料 1. 4% agarose gel：2g agrose 50ml 水，高压灭菌 2Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，调PH6.1，定容至100ml，无菌过滤 supplemented Grace：1Grace添加3.33mg/ml Lactalbumin，3.33mg/ml yeastolate，无菌过滤 4. 高温灭活FBS 主要设备1. 6孔板2. 12ml离心管3. 100ml无菌玻璃瓶4. 无菌吸管5. 70水浴锅 实验材料杆状病毒， SF9：5105cells/ml方法/步骤1. 1无菌条件下，2ml/孔细胞（5105cells/ml）种入6孔板，室温孵育1h使其贴壁，孵育后镜检其贴壁程度；2. 2将4% agarose gel放入70水浴锅融解，空100ml无菌瓶与2Grace放入40水浴锅预热；3. 3将杆状病毒用无血清supplemented Grace梯度稀释：10-110-8。4. 4弃6孔板内上清，快速加入稀释好的病毒，1ml/孔，复孔，室温孵育1h。5. 5配置上层琼脂：加20ml高温灭活FBS到2Grace 100ml，25ml 2Grace（含FBS） 12.5ml 无菌水 12.5ml 4% agarose gel，至预热的100ml无菌瓶，轻轻混匀，放入37水浴锅备用；6. 6弃6孔板内上清，快速加2ml上层琼脂，以防菌层干燥，静置10-20min使其凝固；7. 7将6孔板放入27培养箱，培养410天；8. 8计数板中噬菌斑，直至连续两天无变化，加1mg/ml中性红0.5ml，室温孵育2h后计数噬菌斑。END注意事项 病毒滴度（pfu/ml）=1/稀释倍数噬菌斑数1/每孔接种体积滴度某一物质与一定容量的另一物质产生反应所需的量。所谓滴度即病毒悬液的浓度，就是指pfu的数值。滴度是稀释度的倒数。例如上例中的 1 ： 180 的稀释度，其滴度就是 180 。效价是滴度的同义词。效价即滴度，两者通用。当前虽然专业的化学和免疫学词典和专著中对这些词的使用已规范化，但在不少书刊的文章中常见误用，如称效价 1 ： 40 之类。在化学反应中，指产生某一结果所需标准试剂的量。为当量浓度的二十分之一。在制碱与制碳酸氢铵中用以表示氨水的浓度。在免疫学中，指通过血清学方法能显示一定反应的抗体或抗血清的最高稀释倍数；如终点稀释度为1/100，则血清的效价（每1ml的血清中抗体效价）为100抗体单位。在病毒学中，指用噬菌斑方法测得的噬菌体浓度。 噬菌体的效价（滴度）就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。中文名：滴度英文名：titer；titre同义名：效价符号：tt效价测定的方法：一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近100%(一般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染)，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度(效价或滴度)一般不用病毒粒子的绝对数目而是用噬菌斑形成单位(Plague-forming units，简写成pfu)表示。病毒滴度也即病毒的毒力，或毒价，衡量病毒滴度的单位有最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）和半数致死量（LD50），其中以LD50最常用。它是指在一定时间内能使半数实验动物致死的病毒量。然而，病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志，例如以感染发病作指标，则可以半数感染量（ID50）测定；