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文档简介

实验九细胞中DNA RNA的显示 I DNA的细胞化学 Feulgen反应 一 实验目的了解Feulgen反应的原理 掌握有关的操作方法 二 实验原理Feulgen反应的原理是根据DNA经1mol L弱酸水解后 打开嘌呤和脱氧核糖连接的键 在脱氧核糖的一端形成游离的醛基 这些醛基就在原位与Schiff试剂结合 形成含醌基的化合物 醌基是一个发色团所以具有颜色 因此凡有DNA的部位 就呈现紫红色 三 实验仪器 材料和试剂1 仪器 用具显微镜 恒温水浴箱 温度计 解剖针 试管 烧杯 载玻片 盖玻片 吸水纸 2 材料洋葱鳞茎3 试剂1N盐酸Schiff试剂亚硫酸水 用镊子撕洋葱鳞茎内表皮 1mol LHCl1ml 蒸馏水 对照组 60 8 10分钟蒸馏水水洗 Schiff试剂1ml遮光染色30分钟 新鲜配制的亚硫酸水1ml洗3次 每次2分钟 蒸馏水水洗5分钟 将染色后的鳞茎内表皮制片 镜检 四 实验步骤 注意问题 水解时间 水解时间一定要合适 不宜过长或不足 否则会影响实验结果 水解时间一般在8 15分钟之间 水解时间的长短要随不同的材料而定 Schiff试剂的质量 在做Feulgen反应时 一个重要的成功因素就是Schiff试剂的质量问题 实验时 要注意试剂颜色是否正常 有无SO2的气味 洗涤剂的重要性 漂洗时 所用的亚硫酸水 最好在每次实验前临时配制 以便保持较浓的SO2 实验对照组 一定要做对照片 以便说明实验结果的真实性 五 作业1 简述Feulgen反应的原理和实验的关键步骤 2 绘图示洋葱鳞茎表皮细胞DNA的分布部位 II RNA的细胞化学 Brachet反应 一 实验目的了解Brachet反应的原理 掌握有关的操作方法 二 实验原理甲基绿 派洛宁 Methylgreen Pyronin 为碱性染料 它能分别与细胞内的DNA RNA结合而呈现不同颜色 当甲基绿与派洛宁作为混合染料时 甲基绿和染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色 派洛宁与核仁 细胞质中的RNA选择结合显示红色 其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用 同时两种核酸分子都是多聚体 而其聚合程度有所不同 三 实验仪器 材料和试剂 一 器材显微镜 镊子 载玻片 盖玻片 吸水纸 二 材料洋葱鳞茎表皮 三 试剂Unna试剂 甲基绿 派洛宁 Methylgreen Pyronin 染色液1M醋酸缓冲液 pH 4 8 5 三氯醋酸 四 实验步骤 用镊子撕洋葱鳞茎内表皮 5 三氯醋酸3ml 90 15分钟70 乙醇洗1分钟 Unna试剂染色30分钟 蒸馏水水洗两次 制片
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