流动注射化学发光法测定盐酸米托蒽醌毕业论文.doc

【标题】流动注射化学发光法测定盐酸米托蒽醌 【作者】罗琳 【关键词】化学发光高锰酸钾甲醛盐酸米托蒽醌流动注射分析 【指导老师】何树华 【专业】化学教育 【正文】1. 引言盐酸米托蒽醌（Mitoxantrone Hydrochloride），属蒽环类抗生素，是一种有效抗癌、细胞周期非特异性药物。可杀灭任何细胞周期的癌细胞，增殖与非增殖细胞均受抑制，其抗癌机理是通过与DNA分子结合，抑制核酸合成最终导致细胞死亡。临床上用于治疗临床上主要用于治疗恶性淋巴瘤、乳腺癌和急性白血病。目前测定盐酸米托蒽醌的方法主要有紫外分光光度法16，电化学法2-3，高效液相色谱法4-6，极谱法7等。这些方法有的灵敏度不高，有的仪器昂贵、操作繁琐。如周泽清16等用分光光度法测定盐酸米托蒽醌的含量，其线形范围在4-8mg.L-1，其灵敏度低。又如张志荣用高效液相色谱法研究肝靶向米托蒽醌白蛋白微球。此法准确、可靠，但因仪器昂贵，难普及。利用流动注射化学发光法测定盐酸米托蒽醌,文献中尚未见报道。化学发光法因其具有灵敏度高，线性范围宽，仪器简单，操作方便，分析成本低，易与流动注射技术联用等优点，近年来被广泛地应用于药物分析8-15。本文研究发现，在酸性介质中，高锰酸钾可以氧化甲醛产生化学发光，但是发光率较低，信号较弱，而盐酸米托蒽醌的存在可以大大增强该化学发光强度。据此，结合流动注射技术，建立一种简单而灵敏的测定盐酸米托蒽醌的化学发光新方法。方法的检出限为6.7 ug.L-1（3?），线性范围为0.011.0 mg.L-1,灵敏度较文献16提高了500倍。对0.4 mg.L-1盐酸米托蒽醌平行测定11次,其相对标准偏差为4.6%。该法用于针剂中盐酸米托蒽醌含量的测定,结果令人满意。2. 实验部分2.1仪器和试剂化学数据采集分析系统(西安瑞迈电子科技有限公司); 2恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)；惠普Victra 4电脑；盐酸米托蒽醌标准溶液0.1g.L-1：准确称取盐酸米托蒽醌对照品10mg用二次水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，保存于冰箱中（4）；高锰酸钾储备液0.01mol.L-1：称取1.58g高锰酸钾，用二次水稀释并定容至1L。甲醛，硫酸，硝酸，磷酸，盐酸，多聚磷酸。所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。2.2实验方法按图1所示流路安装好仪器，开启蠕动泵，将各管道依次通过稀硝酸、二次蒸馏水清洗干净，插到相应的溶液中，开启化学发光分析仪和IFFM分析系统，仪器测量参数负高压设为-950V，增益设为2，蠕动泵流速调为6.0mL.min-1的情况下开始测量，待基线稳定后，将流通阀中的高锰酸钾溶液注射到甲醛-样品的混合液中，记录反应的发光强度，以净增光强定量。图1流动注射化学发光测定米托蒽醌示意图Figure. 1 Schematic diagram of the flow injection chemiluminescence system for the determination. MitoxantroneP:蠕动泵（Peristaltic pump）;V:六通阀（valve） F:流通池（flow-cell） D:检测器（detector）3. 结果与讨论3.1条件选择3.1.1反应介质及其浓度的影响分别以浓度为0.5mol.L-1的盐酸、磷酸、多聚磷酸、硫酸为介质,测量高锰酸钾-甲醛-盐酸米托蒽醌的化学发光强度。结果表明,在多聚磷酸和硫酸介质都具有较大的信噪比，考虑到试剂消耗，我们选用硫酸为反应介质。通过进一步实验发现，开始化学发光强度随硫酸浓度的增加而增大;当硫酸的浓度超过1.0 mol.L-1时,发光信号不再增加,基本保持稳定。因此,后继实验中硫酸浓度选用1.0mol.L-1。3.1.2高锰酸甲浓度的影响高锰酸钾作为氧化剂,对化学发光强度影响极大。考察了1.010-55.010-4 mol.L-1范围内不同浓度高锰酸钾对化学发光强度的影响。结果表明,高锰酸钾的最佳浓度为8.010-5 mol.L-1(如图2)。(Mitoxantrone Hydrahloride：0.5mg.L-1，HCHO：12%，H2SO4：1mol/L，-950V)图2高锰酸钾浓度对化学发光强度的影响Fig2 Effect of KMnO4 concentration on the increase CL intensity3.1.3甲醛浓度的影响甲醛的存在可以大大地增强化学发光强度,提高方法的灵敏度。实验了甲醛体积分数从2%20%的甲醛溶液对发光强度的影响。结果表明,化学发光强度随甲醛浓度的增加而增大，且基线稳定。但考滤到试剂消耗,后继实验中我们选用12%(/)的甲醛溶液。3.2线性范围,检出限及精密度在上述选定的条件下,对测定米托蒽醌进行测定，其线性范围为0.011.0 mg.L-1g/mL，回归方程为I=2020.8C+ 1.1689(C:样品浓度mg.L-1, r= 0.9995)。根据IUPAC建议，计算得本方法的检出限为6.7 ug.L-1。对0.4 mg.L-1米托蒽醌平行测定11次,其RSD为4.6%。校准曲线如图3.图3标准曲线Fig3 Calibration curves3.3干扰实验试验了盐酸米托蒽醌针剂中可能有的共存组分的干扰情况，结果表明，如测量误差控制在5%以内，对于质量浓度为0.3mg.L-1的盐酸米托蒽醌；500倍的 K+，Na+，NH4+、，Cl-；100倍的Ca2+，Zn2+，Mg2+，Cu2+，蔗糖，葡萄糖，糊精；50倍的Ba2+， Ni2+，Co2+， PO43-，对盐酸米托蒽醌的测定均不产生干扰。100倍的Sn2+，Al3+，柠檬酸和淀粉对盐酸米托蒽醌的测定产生较小干扰。Cr3+， Mn2+，Pb2+和Fe3+干扰严重。3.4样品分析取盐酸米托蒽醌注射液(标示量:2mg/支)，加二次水稀释至线性范围内浓度。在上述选定的实验条件下进行测定，结果见表1。表1盐酸米托蒽醌针剂含量的测定Table.1 Determination of Mitoxantrone Hydrahloride in injections.样品编号Sample 测定含量Found(mg/支) RSD(%，n=11)No.1 1.9965 4.6No.2 1.9938 4.6No.3 2.0080 4.63.5回收率实验精密移取已知含量的同一批号样品3份，分别加入约为原始含量1倍、2倍和3倍的盐酸米托蒽醌标准品进行测定，计算回收率，结果见表2。表2回收率测定结果Table.2 The results of recovery determination样品编号Sample 原始含量original(mg) 加入量Added(mg) 测定总含量Total(mg) 回收率Recovery（%）No.1 1.9965 0.2 2.1970 100.3No.2 1.9938 0.4 2.3915 99.4No.3 2.0080 0.6 2.6053 99.64. 结论用本文提出的流动注射化学发光法对市售盐酸米托蒽醌针剂