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文档简介

核酸的理化特性,一.核酸的物理性质,1.酸碱性2.稳定性3.紫外吸收4.溶解性5.黏性6.沉降特性,核酸的稳定性,决定核酸结构稳定的因素,（1）氢键： A=T；G C （2）碱基堆积力,氢键,堆积作用（stacking interaction）,二.核酸的化学特性,1.酸效应2.碱效应3.酶效应4.化学变性,酸效应： 在强酸和高温，核酸完全水解为碱基，核糖或脱氧核糖和磷酸。在浓度略稀的的无机酸中，最易水解的化学键被选择性的断裂，一般为连接嘌呤和核糖的糖苷键，从而产生脱嘌呤核酸。,MaxamGilbert sequencing of DNA,MaxamGilbert sequencing of DNA,碱效应： （1） DNA：当PH值超出生理范围（PH78）时，对DNA结构将产生更为微妙的影响。碱效应使碱基的互变异构态发生变化。这种变化影响到特定碱基间的氢键作用，结果导致DNA双链的解离，称为DNA的变性。,高pH，高温条件下DNA变性,高pH,pH中性,碱基互变异构型,碱基互变异构型：影响碱基配对,（2） RNA：PH较高时，同样的变性发生在RNA的螺旋区域中，但通常被RNA的碱性水解所掩盖。这是因为RNA存在的2-OH参与到对磷酸脂键中磷酸分子的分子内攻击，从而导致RNA的断裂。,RNA存在的2-OH参与到对磷酸脂键中磷酸分子的分子内攻击，从而导致RNA的断裂,酶效应,水解核酸的酶种类很多，非特异性水解磷酸二酯键的酶为磷酸二酯酶，（phosphodiesterase），如牛脾磷酸二酯酶，而专一水解核酸二酯酶称为核酸酶。,化学变性： 一些化学物质能够使DNA/RNA在中性PH下变性。由堆积的疏水剪辑形成的核酸二级结构在能量上的稳定性被削弱，则核酸变性。,RNA的化学(甲酰胺)变性,RNA杂交分析,RNA的化学(甲酰胺)变性的应用：,黏性 DNA的高轴比（axial ratio)和DNA是一个比较刚性分子使得其水溶液具有高黏性（high viscosity），很长的DNA分子又易于被机械力(shearing forces)或超声波(sonication)损伤，同时黏度下降。（注意：机械力和超声波不能是DNA变性。）,沉降特性（DNA） 不同构象的核酸（线形、环形、超螺旋），浮力密度和沉降速率不同，用Cs-Cl密度梯度离心就可以将它们区分开来，这一方法常用于质粒DNA的纯化。 浮力密度： 可根据DNA的密度对其进行纯化和分析。在高浓度分子质量的盐溶液（CsCl）中，DNA具有与溶液大致相同的密度，将溶液高速离心，则CsCl趋于沉降于底部，从而建立密度梯度，而DNA最终沉降于其浮力密度相应的位置，形成狭带，
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