芳酸与其酯类药物分析(2)

第六章芳酸及其酯类药物的分析 AnalysisofAromaticcarboxylicacids esters 基本内容 基本要求 一 掌握水杨酸类 苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法 二 熟悉其他芳酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法 三 了解本类药物的体内分析方法 什么是芳酸 苯环 羧基 或其他取代基 分类 水杨酸类苯甲酸类其他芳酸及其酯类 一 水杨酸类药物 一 典型药物结构 水杨酸 salicylicacid SA 第一节结构与性质 阿司匹林 Aspirin ASA 结构 羧基 酯键 性质 酸性 水解 应用 含量测定 酸碱中和 鉴别 检查 对氨基水杨酸钠 PAS Na 结构 芳伯氨基 酚 OH 性质 重氮化 偶合 应用 含量测定 FeCl3反应 鉴别 双水杨酯 salsalate 贝诺酯 benorilate 1 酸性 具 COOH 酸性受苯环 COOH和其它取代基的相互影响 取代基为吸e基 如 X NO2 OH时 酸性 为供e基 如 CH3 NH2时 酸性 取代基位置 邻位 OH取代酸性强 能与邻位 COOH形成分子内氢键 二 主要理化性质 水杨酸阿司匹林苯甲酸 HCl芳酸H2CO3苯酚 2 溶解性 均为固体 有一定熔点 除钠盐溶于水 其余不溶 3 UV和IR光谱特性 分子结构中具有苯环 有UV和IR特征吸收 4 芳伯氨基和酚羟基特性 5 水解特性 ASA 双水杨酯及其制剂应检查水杨酸 对氨基水杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚 一 典型药物结构 苯甲酸及其钠盐 二 苯甲酸类 酸性 弱碱性 紫外吸收 丙磺舒 酸性 紫外吸收 S元素 羟苯乙酯 甲芬那酸 二 主要理化性质 1 溶解性 固体 有一定熔点 除钠盐溶于水 其余不溶 2 UV和IR光谱特性 3 分解反应特性 苯甲酸钠分解为苯甲酸丙磺舒分解为SO24 酸性 游离的羧基 三 其他芳酸类 一 典型药物结构 氯贝丁酯 布洛芬 二 主要理化性质1 溶解性 氯贝丁酯为液体 布洛芬为固体 有一定熔点 水中不溶 有机溶剂中易溶2 UV和IR特征吸收光谱 苯环3 水解 氯贝丁酯具酯键4 酸性 布洛芬 一 与铁盐反应1 含有酚羟基药物可与FeCl3反应 能与FeCl3反应不一定含酚羟基 第二节鉴别试验 Ar OH FeCl3 紫堇色配位化合物 pH4 6 Aspirin 水解 SA FeCl3 紫堇色 PAS Na FeCl3 紫红色 4 氯贝丁酯 碱水解 盐酸羟胺 羟肟酸盐 羟肟酸铁 紫色 弱酸条件 FeCl3 二 重氮化 偶合反应含有芳伯胺基或潜在芳伯胺基的药物均可反应 萘酚 橙黄 猩红 1 直接反应对氨基水杨酸钠2 水解后反应贝诺酯具有潜在芳伯氨基 三 水解反应 1 Aspirin Na2CO3 SA Na CH3COONa H SA CH3COOH mp 156 161 2 双水杨酯 碱水解 酸化 SA mp 158 溶于醋酸铵试液 1 苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物2 丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3 经硝酸氧化成Na2SO43 丙磺舒高温加热分解 生成SO2气体 有臭味 四 分解产物反应 SO42 的反应 1 测定 max min例 布洛芬用0 4 NaOH溶液制备0 25mg ml max 265nm 273nm min 245nm 271nm 2 在 max处测定一定浓度供试液的吸收度A例 羟苯乙酯 5 g ml max 295nm A 0 48 五 紫外吸收光谱法 3 在 max处测定供试液的百分吸收系数例 贝诺酯在 max 240nm 730 7604 在规定的波长测定吸收度比值例 二氟尼柳20 g ml A251 A315 4 2 4 6 六 红外吸收光谱法 水杨酸的红外吸收图谱 3700 2900cm 1 N H O H 1660cm 1 C O 1610 15701480 1440 C C 775cm 1 Ar H 3700 2900cm 1 N H O H 1640cm 1 N H 1580cm 11500cm 1 C C 1300cm 1 C N 1188cm 1 C O 对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱 第三节特殊杂质检查 Aspirin生产工艺 副产物 ASA SA SA 炽灼残渣 苯酚 易碳化物 溶液的澄清度 重金属 Aspirin 一 Aspirin中特殊杂质的检查 1 溶液的澄清度 主要检查Na2CO3中不溶物杂质 有苯酚 醋酸苯酯 水杨酸苯酯等 Aspirin可溶于Na2CO3 而杂质不溶由一定量的Aspirin在碳酸钠试液中应溶解澄清来加以控制 酸性 芳酸 碳酸 酚 游离水杨酸检查 SA 具酚 OH 可与Fe3 呈色Aspirin 无酚 OH 不与Fe3 呈色比色法适用 原料药 片剂 肠溶片HPLC适用 胶囊 泡腾片 栓剂易炭化物检查 检查Aspirin中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质采用与标准比色液比色的方法检查 比色法 主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚 间氨基酚易氧化呈色 而且有毒性 因此要严格控制 双相滴定法 利用间氨基酚溶于乙醚 呈碱性 样品用乙醚提取 HCl滴定 V 0 3mlHPLC USP 内标法 以磺胺作内标 二 对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 方法 三 氯贝丁酯中特殊杂质的检查 主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性杂质 GC HPLC 以4 乙氧基酚作内标 挥发性杂质的检查方法 GC 色谱条件同对氯酚的检查 1 对氯酚检查 一 酸碱滴定法原理 药物具 COOH 第四节含量测定 苯甲酸pKa4 20水杨酸pKa2 98酸性较强 羧酸邻位 OH 吸电子基团 使酸性增加 并有氢键 更增加了其极性 因此 可采取直接滴定法 一 直接滴定法Ch P 2010版 pKa3 6的药物溶于中性醇 可直接用NaOH滴定pKa6 9的药物要用非水溶液滴定法 以Aspirin为例 乙醇作用 溶解ASA 防止ASA在水溶液中滴定过程易水解中性乙醇 对指示剂 酚酞 而言为中性 可消除滴定误差本法特点 简单注意点 若SA不合格 不宜采用本法应用 多国药典用于阿司匹林 双水杨酯 苯甲酸 丙磺舒 布洛芬测定 USP和BP还用于甲芬那酸的测定 二 水解后剩余滴定法USP 32版 1 原理 2 方法 供试品1 5g 0 5mol LNaOH 50 0ml 煮沸 10 放冷 酚酞 0 25mol LH2SO4 V 空白 V0 定 过量 3 讨论 空白试验的目的 SA超过限量时也不适用 4 计算 T 含量 的计算 I份NaOH供试品 I份NaOH空白 VO Vo V 相当于Asipirin消耗NaOH的ml数 剩余V 三 两步滴定法用于 阿司匹林片 肠溶片的含量测定 片剂中有稳定剂 1 原理 水解产物水杨酸SAHAc 枸橼酸 酒石酸 为了避免这些酸类的干扰 采用两步滴定法 第一步中和 Aspirin NaOH 钠盐 H2O 水解产物SA NaOH SA Na H2O 酸性稳定剂 NaOH 中性盐 第二步水解与测定 2 方法 第一步 中和 供试品片粉适量 中性乙醇20ml 酚酞 NaOH 0 1mol L 滴定至粉红色 第二步 水解与测定 中和后的供试液 0 1mol LNaOH40ml 水浴15 0 05mol LH2SO4 V 空白 V0 3 讨论适用于阿司匹林片 肠溶片SA超过限量时也适用 4 计算 二 双相滴定法 1 原理 如苯甲酸钠的含量测定 不溶于水 终点pH突跃不明显 不易观察 易溶于有机溶剂 易溶于水碱性 在水相和有机相中滴定 HCl NaCl 2 方法 溶剂 水 乙醚指示剂 甲基橙滴定液 0 5mol LHCl 水相乙醚相 滴定前 苯甲酸钠 甲基橙 黄色 滴定中 苯甲酸钠 甲基橙 NaCl 黄色 苯甲酸 终点 甲基橙 稍过量HCl NaCl 苯甲酸 橙红色 HCl 乙醚 苯甲酸 H2O 苯甲酸钠 0 5mol L 25ml 1 5g 50ml 2d 甲基橙橙红色 分取乙醚层 5ml水洗涤 洗液并入水层 加乙醚20ml 继续用HCl滴定至水层显持续的橙红色原因 将溶于乙醚中的少量苯甲酸钠提取至水中 三 亚硝酸钠滴定法 原理 对氨基水杨酸钠具芳伯氨基在HCl中与NaNO2发生重氮化反应 Ar NH2 NaNO2 2HCl Ar N2Cl NaCl 2H2O 此法在下章重点讨论 一 直接紫外分光光度法 原料药 对照品比较法片剂 吸收系数法 四 紫外分光光度法 原理 酸性杂质对 氯酚等也有吸收 干扰测定 方法 可采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后 在甲醇溶液中 226nm波长处 采用对照品比较法测定含量 氯贝丁酯的测定 二 离子交换 紫外分光光度法 三 柱分配色谱 紫外分光光度法 讨论 SA与FeCl3 尿素生成紫色水杨酸铁配位化合物 保留于硅藻土色谱柱上用CHCl3洗脱时 高浓度尿素使配位化合物移动较慢 Asipirin先洗脱出 以冰醋酸的乙醚溶液洗脱时 紫色配位化合物解离 SA游离出来 继而被CHCl3洗脱 max 306nm A供 A标 玻璃棉 供试品液 CHCl3 HCl洗脱液1 CHCl3洗脱液2 冰HAc CHCl310ml洗脱液3 冰HAc CHCl385ml 硅藻土 NaHCO3 2 Aspirin的含量测定 在硅藻土 NaHCO3色谱柱中 Aspirin及SA成钠盐保留于柱上 先用CHCl3除去中性或碱性杂质 再用醋酸酸化 使Aspirin游离 以CHCl3洗脱后测定其含量 Ch P 2010 阿司匹林肠溶胶囊 泡腾片 栓剂等含量测定采用此法USP 29 ASA片 对氨基水杨酸钠 甲芬那酸 布洛芬 丙磺舒等及其制剂 采用此法 五 HPLC 阿司匹林肠溶胶囊的含量测定 色谱条件 色谱柱C18 检测波长276nm流动相为乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 系统适用性试验 n 3000 Aspirin与水杨酸钠的R 1 5计算 一 血清中Aspirin和SA的HPLC色谱条件 色谱柱为ODS C18 150mm 4 6mm 5 m 流动相为甲醇 水 正丁醇 磷酸 300 200 10 0 05 检测波长为237nm 内标物为苯甲酸血清样品预处理血清100 l HClO450 l 不同浓度Aspirin和SA 内标液涡旋混合2min离心5min取上清液20 l进样 第五节体内药物分析 回归方程 以峰高比 H标 H内 对浓度回归Aspirin的回归方程 Y 5 8 10 3 5 29 10 2Xr 0 9996SA的回归方程 Y 6 0 10 3 8 33 10 2Xr 0 9981Aspirin和SA的线性范围分别为 1 20 g ml 2 30 g ml回收率 空白血清 五种不同浓度测定 Aspirin为96 0 106 0 SA为92 0 119 5 五种不同浓度均应在线性范围内 色谱条件 色谱柱为LiChrospher100RP 125mm 4mm 5 m 流动相为25 乙腈溶液 醋酸缓冲溶液梯度洗脱 检测波长为254nm 内标物为依他尼酸 尿样品预处理 C8固相萃取柱 100mg填料 ml用甲醇1 0ml 后用0 5ml蒸馏水活化 2 0ml尿样 内标300 l 10 g ml 上柱1 0ml水洗脱生物杂质再用甲醇0 5ml洗脱保留在柱上的丙磺舒和内标 洗脱液0 45 m浸滤膜滤过 取5 l直接进样分析 二 尿中丙磺舒的固相萃取净化 HPLC 运动员违禁药物 线性关系 取空白尿样2 0ml 不同浓度丙磺舒 内标液 按上述方法分析 浓度范围为0 1 g ml 100 g ml A丙 A内对C丙回归回收率 丙磺舒为100 3 n 14 内标为101 3 n 12 三 HPLC测定人血浆中布洛芬含量色谱条件 色谱柱为Shim packCLC ODS 150mm 6mm 10 m 预柱为YWG C18 流动相为甲醇 20mol L磷酸二氢钾缓冲溶液 70 30 pH 4 0 流速为1 0ml min 检测波长为221nm 内标物为肉桂酸 样品预处理 取肝素抗凝血浆0 24ml 内标液 甲醇0 5ml 振荡混匀 离心 1000r min 15min 取上清液10 l直接进样分析 布洛芬和肉桂酸tR为5 15和2 85min 回归方程 以对照品与内标的峰高比对浓度回归其回归方程为 Y 4 05 10 2C 2 0 10 3 r 0 9999 回收率测定 空白血浆 布洛芬对照品高 中 低三种浓度 按样品处理项下测定 测得平均回收率为99 2 1 6 精密度 日内精密度为RSD 1 8 日间精密度为2 8 人血浆样品测定 受试者8人 给药剂量600mg 给药后0 5 0 751 0 1 5 2 0 3 0 4 0 6 0 8 0 10 0 12 0h自肘静脉取血1 5ml 肝素抗凝 按 样品处理方法 项下操作 求算血药浓度 思考与练习 A型题 1 阿司匹林中检查的特殊杂质是A 水杨醛B 砷盐C 水杨酸D 苯甲酸E 苯酚2 对氨基水杨酸钠中检查的特殊杂质是A 水杨醛B 间氨基酚C 水杨酸D 苯甲酸E