第五章生物碱报告.ppt

第五章中药制剂中各类化学成分分析第一节含生物碱 alkaloid 类成分的分析 生物碱的分布 含生物碱量多的科有罂粟科 防已科 茄科 小檗科 毛茛科 芸香科 夹竹桃科 马钱科及茜草科等 中药有三尖杉 麻黄 黄连 黄柏 乌头 延胡索 粉防已 颠茄 洋金花 贝母 百部等 二 生物碱的理化性质 溶解度多数极性较小 属于亲脂性碱 游离状态下几乎不溶于水 成盐后则水溶性增加 易溶于水及醇中 不溶或难溶于苯 氯仿 乙醚等 生物碱和其盐这一相反的溶解性质可以用于它的提取 分离和精制 酸碱性生物碱结构中含氮 多呈碱性 能与无机酸 有机酸成盐N H X N H X 碱性强弱为 季胺 叔胺 仲胺 伯胺 酰胺沉淀反应 三 含生物碱类成分中药制剂的定性鉴别 常用的提取溶剂系统 非极性溶剂系统 一般先用10 的氢氧化铵 碳酸氢钠或氢氧化钠碱化 使生物盐游离 后用氯仿或乙醚提取 缺点是不能提出水溶性生物碱 极性溶剂系统 极性较大的生物碱可用中性甲醇 乙醇 酸水 常用0 1 1 的盐酸 硫酸等 以及缓冲液提取 但提出的杂质较多 需净化 混合溶剂系统 用不同极性的溶剂按不同比例混合 可较好地进行提取 一 一般理化鉴别 二 色谱鉴别 1 薄层色谱法吸附剂的选择 硅胶本身有弱酸性 与生物碱成盐 使吸附力增强 若用中性展开系统 其Rf值小 易拖尾 一般用碱性展开系统或在中性中加少量碱性溶剂 如二乙胺 氢氧化铵或用氨水饱和 展开缸中放一小杯氨水 或制备碱板 在硅胶板中加稀碱溶液 碱性氧化铝因本身带有碱性 故用中性展开剂即可使生物碱得到很好的分离 脂溶性生物碱 用吸附薄层法 用活度较大的吸附剂如硅胶 氧化铝 水溶性生物碱 用硅藻土 纤维素作为支持剂 硅胶板也可以 展开剂的选择 脂溶性生物碱采取极性小的溶剂水溶性用极性大的溶剂但一般用混合溶剂较多 单一溶剂少 显色剂的选择 某些生物碱本身有颜色 可直接于可见光下观察 有紫外吸收的可用紫外检测 但大部分生物碱无色且无荧光 则需喷显色剂 最常用的显色剂有改良碘化铋钾 碘蒸气 氨蒸气 2 纸色谱法3 高效液相色谱法4 气相色谱法 四 含生物碱类成分中药制剂的含量测定 一 总生物碱的含量测定 1 化学分析法 2 分光光度法 1 直接测定法 2 离子对萃取比色法 酸性染料比色法在一定pH介质中 生物碱B可与氢离子H 结合生成生物碱盐的阳离子BH 而酸性染料在此条件下解离为阴离子In 则阴阳离子能定量结合生成有色化合物 离子对 再用合适的有机溶剂将该离子对提取 测定其吸收度值 进而对生物碱定量 注意事项 1 选择适当的pH则生物碱成盐 成为阳离子BH 而酸性染料成为阴离子In 阴阳离子可结合 如pH太低 则水相酸性强 虽然生物碱成盐 但酸性染料亦以酸的形式存在 pH太高则水相碱性强 生物碱以游离状态存在 酸性染料以离子形式存在 都不能使阴阳离子定量地结合 2 酸性染料的选择常用的有溴酚蓝 溴甲酚绿 溴麝香草酚蓝等3 合适的有机溶剂要求对生物碱与酸性染料的结合物有很好的溶解度 氯仿 二氯甲烷 P117 苦味酸盐法 雷氏盐比色法 三 色谱法1 高效液相色谱法离子对色谱 正相色谱 反相色谱 1 流动相方面的改进A 加入硅醇基抑制剂 可在流动相中抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性 使生物碱易出峰 峰形好 最常用的有二乙胺 三乙胺 B 加入离子对试剂 使其与生物碱生成离子对而掩蔽其碱性基团 从而不会与固定相表面的硅醇基作用 常用辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠表面活性剂 反相HPLC的改进 C 也可以加入季铵盐试剂 R3SioH A R3SioH A 硅醇基季铵盐复合物连续添加季铵盐时 平衡向右 因而被分离的生物碱和硅醇基之间的作用被阻碍 从而使生物碱得到很好的分离 常用有溴化四甲基胺 D 在流动相中加入一定浓度电解质缓冲盐 可改变流动相离子强度 稳定pH值及促进离子对作用 从而改善峰形及分离效果 通常用磷酸盐缓冲液 但操作时由于存在盐 做过后应充分洗柱 以免腐蚀柱子 2 固定相方面的改进A 选择C链较短的键合相硅胶为固定相 如C8比C18好 原因是由于硅烷的C链较短则覆盖硅胶的表面较好 只有较少的游离硅醇基 B 封尾技术可使填料的键合更彻底 常用三甲基氯硅烷 TMCS 处理 可减少残余羟基 增加单体覆盖度 3 增加流动相的脂溶性 4 升高柱温 2 薄层色谱法 3 气相色谱法适用于有挥发性的 遇热不分解的生物碱类 如麻黄碱 槟榔碱 苦参碱和颠茄类生物碱 思考题 乌头 注1 的容量法测定的操作程序是 取样品精密称定 加无水乙醇溶液并放置24小时 过滤 减压回收乙醇 至残留液至小量时加2 盐酸溶液 注2 移入分液漏斗中 用乙醚萃取3次 注3 在样品液中滴加氨试液调PH910 注4 再用乙醚 氯仿 3 1 混合液提取 次 注5 合并萃取液 蒸干 加无水乙醇溶解 精密加入硫酸液 0 01mol l 与甲基红指示剂 滴 用氢氧化钠液 0 02mol l 滴