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文档简介

将样品点在距滤纸一端约2 3cm的某一处 该点称为原点 然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层 这样混合氨基酸在两相中不断分配 由于分配系数 Kd 不同 结果它们分布在滤纸的不同位置上 物质被分离后在纸层析图谱上的位置 可用比移值 Rf 来表示 所谓Rf 是指在纸层析中 从原点至氨基酸停留点 又称为层析点 中心的距离 X 与原点至溶剂前沿的距离 Y 的比值 如图 在一定条件下 如温度 展层剂的组成 层析纸质量等不变 某种物质的Rf值是常数 因此可作为定性依据 由于氨基酸无色 可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色 从而作定性分析 本实验利用纸层析法分离氨基酸 三 操作 1 在层析缸中装入展层剂 其高度约1 5 2cm 2 准备滤纸 戴上手套 取层析滤纸 长22cm 宽14cm 一张 在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线 在此直线上每间隔2cm作一记号 为点样位置 即原点 如图 注意事项 手不能直接接触滤纸 直线与底边平行 3 点样 用毛细管依次将Lys 赖 Gly 甘 Pro 脯 Val 缬 Leu 亮 和混合样品分别点在这6个位置上 点样点干后再点一次 注意每点在纸上扩散的直径 最大不超过3mm 纸层析点样标准图 LysGlyProValLeu混合样品 4 展层 将点好样的滤纸 点样面朝外 卷成筒状 用透明胶纸粘接或用线缝好 纸的两边不能接触 将滤纸直立于层析缸中 注意 点样的一端在下 展层剂的液面需低于点样线1cm 滤纸勿与缸壁接触 盖好层析缸盖 进行展层 待溶剂上升15 20cm时 取出滤纸 用铅笔描出溶剂前沿界线 电吹风吹干 5 显色 用喷雾器均匀喷上0 1 水合茚三酮正丁醇溶液 然后用电吹风吹干即可显出各层析斑点 卷成筒状的滤纸 四 计算 用直尺测量并计算出各种氨基酸的Rf值 试剂和器材 1 试剂 1 氨基酸溶液 0 5 m V 的赖氨酸 脯氨酸 缬氨酸 苯丙氨酸 亮氨酸溶液及它们的混合液 各组分的浓度均为0 5 2 展层剂 正丁醇 冰醋酸 水 4 1 3 V V 3 显色剂 0 1 m V 水合茚三酮正丁醇溶液 2 器材
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