蛋白质沉淀反应实验

蛋白质的沉淀反应一、目的和要求1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识2、掌握几种沉淀蛋白质的方法3、了解蛋白质变性与沉淀的关系二、沉淀反应（一）原理在水溶液中，蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用，所以成为稳定的胶体颗粒。但这种稳定的状态是有条件的。在某些理化因素的作用下，蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性，则会以固态形式从溶液中析出，这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型：1、可逆沉淀反应沉淀反应发生后，蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显著变化。在沉淀因素去除后，又可恢复其亲水性，这种沉淀反应就是可逆沉淀反应，也叫做不变性沉淀反应。属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。2、不可逆沉淀反应蛋白质在沉淀的同时，其空间结构发生大的改变，许多副键发生断裂，即使除去沉淀因素，蛋白质也不会恢复其亲水性，并丧失生物活性，这种沉淀反应就是不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。（二）盐析精品资料1、材料与试剂（ 1）10% 的卵清蛋白溶液（要求新鲜配制）、浓蛋白溶液（2）饱和硫酸铵溶液（ 3）固体硫酸铵（4）滤纸、玻棒2、操作方法（ 1）取试管一支，加入浓蛋白溶液2ml ，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置 10 分钟将出现沉淀。此沉淀物为球蛋白。（2）取上清液于另一支试管。（ 3）向上清液液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻棒搅拌，直至粉末不再溶解为止。静置数分钟后，沉淀析出的是清蛋白。（ 4）向两支试管中分别加水，观察其沉淀是否溶解。（三）重金属盐沉淀nh +3oh-nh 2nh 2prag +prcoo -coo -cooag重金属离子如pb2+、cu2+、hg2+、ag2+等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不溶性金属盐而沉淀：pr重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全，特别是在碱金属盐类存在时。因此， 生化分析中，常用重金属盐除去体液中的蛋白质；临床上用蛋白质解除重金属盐引起的食物中毒。1、材料与试剂（ 1） 10% 的卵清蛋白溶液（ 2 ）0.1mol/l 氢氧化钠溶液（ 3） 3% 硝酸银溶液（4）0.1% 硫酸铜溶液（ 6）试管 3 支2、操作方法（1） ）取试管 2 支，分别编号后各加入1ml 10% 的卵清蛋白溶液。（2） ）各管再加入一滴0.1mol/l氢氧化钠溶液。（3） ）向 1 管加 3% 硝酸银溶液 34 滴；向 2 管加 0.1% 硫酸铜溶液 34 滴。混匀后观察沉淀的生成。（四）生物碱试剂沉淀反应生物碱试剂能与蛋白质分子中的氨基结合生成不溶性沉淀，反应如下：3nh +prcoo-ccl3 coohnh +.oocccl33prcooh1、材料与试剂（ 1） 10% 的卵清蛋白溶液（2 ）5% 三氯乙酸溶液2、操作方法取试管一支， 加 10% 的卵清蛋白溶液20 滴后再加入 5%三氯乙酸溶液 10 滴，混匀后观察沉淀的出现。（五）有机溶剂沉淀反应1、材料与试剂（ 1） 10% 的卵清蛋白溶液（2 ）95% 乙醇溶液2、操作方法取试管 1 支，加 10% 的卵清蛋白溶液10 滴后，再加入 95% 乙醇溶液 20 滴，边加边混匀。静置片刻后观察结果。习题1、盐