第三章_药物杂质检查

第三章药物的杂质检查 一药物的杂质与限量 Testforpurity 二杂质的检查方法 三药物中一般杂质检查 四特殊杂质的检查与鉴定方法 药典中检查项下包括 有效性 药物生物利用度均一性 含量均匀度 溶出度 重量差异纯度检查 药物中杂质的控制安全性 异常毒性 热源 无菌 一药物的杂质与限量 1 杂质 Impurities 一 药物的杂质与纯度 2 药物的纯度 Purities 药物的纯净程度 药物纯度的要求不断提高 例如 度冷丁1848年收入BP 1970年经GC分离鉴定出两种无效异构体 和 有时高达20 30 指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效 甚至对机体健康有害的物质 药物的纯度和化学试剂的纯度在要求上不同 药物只有合格品与不合格品 一般化学试剂分为4个等级 基准试剂 优级纯或特种试剂 光谱纯 色谱纯 农药残留检测级 分析纯 化学纯 3 药物纯度与试剂纯度 化学试剂硫酸钡 不检查可溶性钡盐 药用规格硫酸钡 检查酸溶性钡盐 重金属 砷盐 例 二 药物杂质的来源 合成过程中 原料不纯或反应不完全 中间体 副产物在精制中未除尽制剂过程试剂 溶剂 还原剂残留异构体 多晶体使用的金属器皿 装置 工具引入的金属杂质 生产过程 贮藏过程 在温度 湿度 日光 空气等外界条件影响下 或因微生物的作用 引起药物发生水解 氧化 分解 异构化 晶型转变 聚合 潮解和发霉等变化 杂质的来源 sourceandsortsofimpurities 生产过程中引入杂质例子 双氯非那胺 生产过程中引入杂质例子 地塞米松磷酸钠生产过程中使用大量甲醇和丙酮 残留溶剂杂质 生产过程 酸度 水解试剂带入乙醇中不溶物 水解中间体 糊精 SO32 产品用H2SO3漂白可溶性淀粉 水解不完全 贮藏过程中引入杂质 如 具有酯键 酰胺 环酰胺 卤代烃等药物易水解 具有Ar OH SH NO2 CHO C C C C等结构的药物在空气中易氧化 如 ASA水解生成SA和醋酸 阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸 生产和贮存过程中均引入的杂质例子 抗甲状腺药卡比马唑 按毒性分类 毒性杂质和信号杂质 如氯化物 硫酸盐 按来源分类 按理化性质分类 工艺杂质 降解杂质 反应物和试剂中混入的杂质 有机杂质 无机杂质 残留溶剂 一般杂质 特殊杂质 三 药物杂质的分类 一般杂质 在自然界中分布较广泛 在多种药物的生产和贮存过程中易引入的杂质 如酸 碱 水分 Cl SO42 铁盐 重金属 砷盐 残渣等 特殊杂质 是指在特定的药物生产和贮藏过程中引入的杂质 也称有关物质 这类杂质随药物不同则不同 四 杂质的限量 定义 指药物中所含杂质的最大允许量 单位通常以 或百万分之几 ppm 10 6 表示 1 杂质限量 LimitTest 杂质限量对于不同杂质各不相同 如As对人体毒性大 其限量规定较严 一般最大限量不超过百万分之十 10ppm 如Pb重金属 允许存在的最大限量一般不超过百万分之五十 50ppm 2杂质限量控制方法 杂质限量控制 限量检查 对照法 灵敏度法 比较法 定量测定杂质含量 以待检杂质标准液一定量为对照 将供试品 对照分别置一支纳氏比色管或锥形瓶中 在相同条件处理后 比较反应结果 在供试液中直接加入试剂 在一定反应条件下观察有无反应出现 取一定量供试品测定特定待检杂质的参数与规定的限量比较 计算 即 L 杂质限量S 供试品量C V 标准液浓度 体积 计算时应注意 单位换算 供试液或标准液的稀释倍数 对照法 示例一茶苯海明中氯化物检查 取本品0 30g置200ml量瓶中 加水50ml 氨试液3ml和10 硝酸铵溶液6ml 置水浴上加热5min 加硝酸银试液25ml 摇匀 再置水浴上加热15min 并时时振摇 放冷 加水稀释至刻度 摇匀 放置15min 滤过 取续滤液25ml置纳氏比色管中 加稀硝酸10ml 加水稀释至50ml 摇匀 在暗处放置5min 与标准氯化钠溶液 10 gCl ml 1 5ml制成的对照液比较 求氯化物的限量 0 04 示例三肾上腺素中酮体的检查 取本品0 2g 置100ml量瓶中 加盐酸溶液 9 2000 溶解并稀释至刻度 摇匀 在310nm处测定吸光度不得超过0 05 酮体的百分吸收系数为435 求酮体的限量 0 06 V 100ml C A E 0 05 435 1 15 10 4g 100ml S 0 2g 二杂质的检查方法 化学法 薄层色谱法 TLC 光谱法 物理法 显色反应检查法 沉淀反应检查法 生成气体检查法 滴定法 高效液相色谱法 HPLC 气相色谱法 GC 毛细管电泳法 CE 色谱法 红外分光光度法 IR 可见 紫外分光光度法 原子吸收分光光度法 AAS 热分析法 酸碱度检查法 物理性状检查法 酸碱滴定法 指示液法 pH测定法 氯硝柳胺的特殊杂质检查 显色反应检查法 一 化学法 二 色谱法 药物中的有关物质 包括未反应完的原料 中间体 副产物 异构体 聚合体和降解产物等 其结构和性质往往和药物相近 常难用化学法和光谱法检查 色谱法可利用药物与杂质色谱性质差异 将杂质与药物进行分离与检测 色谱法是有关物质检查的首选方法 在特殊杂质检查中应用很多 具有简便 快速 不需特殊设备 灵敏度较高的优点 1 薄层色谱法 TLC 比移值 薄层涂布 无粘合剂含粘合剂 常加入10 15 煅石膏 CaSO4 2H2O 180 烘4h 或0 5 0 7 羧甲基纤维素钠水溶液 杂质对照品法适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况 供试品溶液自身稀释对照法适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况 仅限于二者的颜色相近或相同的情况 杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照并用法适用于存在多个杂质 对照药物法无合适的杂质对照品 或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分颜色有差异 难以判断限量 检查方法 供试品10 lN 甲基哌嗪10 l50mg ml50 g ml 供试液中如显与对照品相应的杂质斑点 颜色与对照品主斑点比较 不得更深 枸橼酸乙胺嗪检查 N 甲基哌嗪 薄层 硅胶G展开剂 三氯甲烷 甲醇 氨溶液 13 5 1 显色 I2蒸气显色 规定 如显杂质斑点 其颜色与对照溶液所显主斑点相比较 不得更深 吡罗昔康供试液吡罗昔康供试液20mg ml0 20mg ml 吡罗昔康中检查 有关物质 薄层 硅胶GF254 含NaOH 展开剂 三氯甲烷 丙酮 甲醇 25 25 5 检视 紫外灯 254nm 例 氢溴酸加兰他敏中检 其它生物碱 1 2 1 供试品液 2 氢溴酸加兰他敏对照品 2 HPLC法 主要方法 外标法 用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况 加校正因子的主成分自身对照测定法 用于有杂质对照品时 杂质的含量测定不加校正因子的主成分自身对照测定法 用于没有杂质对照品的情况面积归一化法 粗略测量供试品中杂质的含量 供试液 杂质对照品液分别进样测定 1 外标法 杂质对照品法 例 卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查 方法 CHP2010二部色谱柱 LunaC18 2 5 250 4 6流动相 0 01mol L磷酸氢二钠溶液 甲醇 乙腈 70 25 5 用磷酸调节pH值至3 0 0 05流速 1 0ml min进样体积 20 l检测波长 215nm 2 加校正因子的主成分自身对照法 As Cs Ar Cr As 药物对照品的峰面积 Ar 杂质对照品的峰面积 Cs 药物对照品的浓度 Cr 杂质对照品的浓度 供试溶液和供试液稀释后的对照液分别进样 各杂质峰面积乘以相应的 后与对照液主成分峰面积比较 建立方法时 测定校正因子 杂质对照品和药物对照品进样计算校正因子 可直接载入正文 Cs Ax As Cs 例 红霉素中红霉素B 红霉素C及有关物质的检查红霉素A是主要活性物质 方法 取本品 用磷酸盐缓冲液 pH7 0 甲醇 15 1 溶解并稀释制成每lml中约含4mg的溶液 作为供试品溶液 精密量取5ml 置100ml量瓶中 用磷酸盐缓冲液 pH7 0 甲醇 15 1 稀释至刻度 摇匀 作为对照溶液 照红霉素A组分项下的色谱条件 取对照溶液20ul注人液相色谱仪 调节检测灵敏度 使主成分色谱峰的峰高约为满量程的50 精密量取供试品溶液与对照溶液各20ul 分别注人液相色谱仪 记录色谱图至主成分峰保留时间的3 5倍 红霉素B按校正后的峰面积计算 乘以校正因子0 7 和红霉素C峰面积均不得大于对照溶液主峰面积 5 0 供试品溶液色谱图中如有杂质峰 红霉素烯醇醚 杂质1按校正后的峰面积计算 分别乘以校正因子0 09 0 15 和其他单个杂质峰面积均不得大于对照溶液主峰面积的0 6倍 3 0 其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积 5 0 供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0 01倍的峰可忽略不计 无杂质对照品时采用此法 将供试溶液稀释成一定浓度作为对照溶液 调节检测灵敏度 对照溶液主成分峰高约为满量程的20 25 后 分别进样 将供试溶液中各杂质峰面积及总和与对照溶液主成分峰面积比较 例1 甲硝唑中检 2 甲基 5 硝基咪唑 供试液 0 1mg ml对照溶液 0 01mg ml规定 供试液色谱图中各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主成分峰面积的1 3 不加校正因子的主成分自身对照法 方法 CHP2010二部色谱柱 RezexROA OrganicAcid150 7 8mm 货号 00F 0138 K0 保护柱 03B 0138 K0 保护柱套 AJ0 4490 保护柱芯 流动相 水 用稀硫酸调节pH值至2 5 0 1 流速 0 6ml min进样体积 20 l检测波长 207nm 例 利巴韦林中有关物质的检查 伊维菌素溶液中 有关物质 的检查 对照溶液 供试溶液 稀释10倍 A主 72181 A1 A2 A3 67260 1 2 3 4 峰面积归一化法 总峰面积 除溶剂峰外 杂质峰面积总和 100 规定限量 3 GC法 内标法加校正因子法 用于有杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的含量测定 外标法 用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况 峰面积归一化法 粗略测量供试品中杂质的含量标准溶液加入法 1可见 紫外分光光度法 UV 三 光谱法 地蒽酚 二羟基蒽醌 432nm 地蒽酚基本无吸收 二羟基蒽醌最大吸收 规定 0 01 的供试溶液在432nm处的A 0 12 432nm 一定频率的红外光辐照能导致被照射物质分子在振动 转动能级上的跃迁 当分子中某些化学键或基团 具有偶极特性 的振动频率与红外辐射的频率一致时 分子便吸收此红外辐射 一种共振吸收 若以频率连续改变的红外光辐照试样 由于试样对不同频率的红外光的吸收不同 便得到以吸光度A或透光率T为纵坐标 红外辐射波数或波长为横坐标的红外光谱图 如 OH 3650 3200cm 1有强宽峰 1400 1260cm 1弱峰 NH 3500 3100cm 1有强峰 1650 1550cm 1弱峰 C O 1700cm 1左右有强峰 CH3 CH2 在2960cm 1 2850cm 1有强峰 同时在1450cm 1 1375cm 1有强峰等 2红外分光光度法 此法主要用于药物中无效或低效晶型的检查 甲苯咪唑无效A晶型640cm 1强吸收662cm 1弱吸收C晶型640cm 1弱吸收662cm 1强吸收因此 供试品中若含有A晶型 在此二波长处的吸收度的比值会发生改变 例 甲苯咪唑中A晶型的检查 640cm 1662cm 1供试品D1 D2 10 A晶型的甲苯咪唑对照品D1D2R D1 D2R D1 D2 R 应小于R 则供试品中A晶型在10 以下 662cm 1 640cm 1 甲苯咪唑 A晶型 C晶型 662cm 1 640cm 1 620cm 1 803cm 1 803cm 1 620cm 1 D1 D2 640cm 1 662cm 1 此法灵敏度高 专属性强 主要用于金属元素的测定 3原子吸收分光光度法 AAS 例 肝素钠中检查钾盐 供试液 供试液 标准KCl 原子吸收 766 5nm测定 b a 则应b a b 利用药物中所含待检元素的原子蒸气 吸收发自光源的该元素特征共振射线 使原子中的电子被激发 原子由基态跃迁到激发态 测定基态原子对辐射能的吸收程度 即可测出供试药物中待检元素的含量 1 热分析法 Thernalanalysis 指研究物质在加热或冷却过程中发生的物理或化学变化与温度变化的关系的一种分析方法 常用的方法有 1 热重分析法 TGA 优点 适于样品量少 贵重样品或空气中易氧化的样品 且分析速度快 四 其他方法 供试品 参比物质 同时升温 T T供 T参 2 差热分析法 DTA 1 不吸热 不放热 2 放热 3 吸热 T 3 差示扫描量热法 DSC 供试品 参比物质 同一温度T E 吸热变化 增补能量 峰向上 放热变化 释放能量 峰向下 2 物理性状检查法 1臭味及挥发性差异 乙醇中检查 杂醇油 2颜色差异 盐酸胺碘酮中检查 游离碘 3溶解行为差异 葡萄糖中检查 糊精 4旋光性质差异 硫酸阿托品中检查 莨菪碱 CHCl3 CHCl3层不显紫红色 Ch P规定黄体酮在乙醇中的比旋度为 186 198 三药物中一般杂质的检查 一 氯化物 二 硫酸盐 三 铁盐 四 重金属 五 砷盐 六 干燥失重 七 水分测定 十 残留溶剂 八 炽灼残渣 比浊法 比色法 九 易炭化物 十一 溶液颜色 十二 溶液澄清度 1 原理 Cl Ag 2 检查法 浑浊 供试品 稀HNO310ml H2O AgNO31ml 标准溶液 稀HNO310ml H2O AgNO31ml 暗处放置5min 避免AgCl分解 一 氯化物 Chlorides 稀释至50ml 稀释至50ml 3 反应条件 1 灵敏度 合适的浑浊度 Cl 以50 80ug 50ml 相当于NaCl标准液5 8ml 为宜 AgCl的浊度梯度明显 2 酸及酸度 HNO3加入量 10ml稀HNO3或1ml浓HNO3 50ml加入作用 加速AgCl浑浊的生成 又可防止形成Ag2CO3 Ag2O Ag3PO4 3 反应条件 3 温度 以30 40 产生的浑浊最大 结果也稳定 但供试液与对照液相同条件下处理 仍可在室温进行 4 避光 暗处放置5分钟后比较 从比色管上方向下观察 1 供试液不澄清 应过滤 其滤纸应用含HNO3的蒸馏水洗净 HNO3 3Cl 3H Cl2 2H2O NOCl Cl2 NO 2 供试液有色 可利用本身颜色为背景或外加试剂调色 4 注意 内消色法 外消色法 标准液 K2SO4 0 1mgSO42 ml 灵敏度 标准K2SO41 0 5 0ml酸及酸度 HCl稀HCl2ml 50ml pH 1 HCl作用 加速BaSO4的生成 又可防止生成BaCO3 Ba3 PO4 2等 SO42 Ba2 HCl BaSO4 浑浊 原理 二 硫酸盐 Sulfates Fe3 6SCN 稀HCl Fe SCN 6 3 红色 比色 1 原理 2 检查法 显色 立即与同法制成的对照溶液比较 加水溶解 稀HCl4ml 过硫酸铵50mg 加水稀释 35ml 30 硫氰酸铵溶液3ml 加水定容 供试品 三 铁盐 Iron ChP USP 硫氰酸盐法 BP 巯基醋酸法 25ml 2 酸 稀HCl在中性或碱性液中 Fe3 可水解生成棕色的水合羟基铁离子或红棕色的Fe OH 3沉淀 故反应应在酸性液中进行 由于HNO3有强氧化性 可能使SCN 被破坏 且HNO3中含有HNO2 能与SCN 生成红色化合物 NOSCN 故不能选用HNO3 3 反应条件 1 供试品取样量 目视比色 Fe3 以10 50ug 50ml为宜 相当于10ugFe3 ml的硫酸铁铵标准液1 5ml 色泽梯度明显 HNO3 必须加热煮沸除去NO 因HNO2可能与SCN 生成红色化合物 NOSCN 3 加入氧化剂 使Fe2 Fe3 过硫酸铵 2Fe2 NH4 2S2O8 HCl 2Fe3 NH4 2SO4 SO42 注意 具环状结构的有机药物 需经700 800 炽灼破坏处理后再依法检查 4 注意 若供试管与对照管色调不一致 或所呈颜色较浅不便比较时 供试管 对照管 正丁醇 或异丙醇 提取 供试正丁醇层 对照正丁醇层 比较 硫氰酸铁配离子在正丁醇等有机溶剂中溶解度大 四 重金属 Heavymetals 重金属 在规定条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠显色的金属 如Ag Hg Pb Cd Bi As Zn Co Ni Cu Sb Sn等 其中以Pb最为普遍 故以Pb为代表 第一法 第四法 重金属含量低的药物 2 5 g 第三法 使用范围 微孔滤膜法 硫化钠法 溶于碱性水溶液而难于溶于稀酸或 在稀酸中生成沉淀的药物 方法 硫代乙酰胺法 溶于水 稀酸 乙醇的药物 炽灼后的硫代乙 酰胺法 含芳环 杂环以及难溶于水 稀酸 乙醇的药物 第二法 ChP ChP 2005年版及以前 收载 1 第一法硫代乙酰胺法 H2S 原来采用FeS HCl H2S 从ChP 90版 开始采用硫代乙酰胺 pH 3 5 H2S CH3CONH2 硫代乙酰胺优点 无恶臭 浓度易控制 H2O 1 原理 2 方法 甲管 乙管 丙管 标准铅溶液 供试品溶液25ml 与乙管同量供试品 醋酸盐缓冲溶液 pH3 5 2ml 标准铅溶液 溶剂溶解 硫代乙酰胺试液 2ml 比较颜色 丙管颜色不浅于甲管时 乙管中颜色与甲管比较 不得更深 丙管颜色浅于甲管时 取样按第二法重新检查 2 第二法炽灼后的硫代乙酰胺法 供试品 固体 蒸干 HNO3 蒸干 HCl 金属氯化物 水浴蒸除HCl 残渣 炽灼残渣 残渣 0 5ml 2ml 调pH值对酚酞显中性 氨试液 醋酸盐缓冲溶液 pH3 5 2ml 供试品 液体 蒸发至干 残渣 甲管 加水稀释成25ml 乙管 配制供试品溶液的试剂 醋酸盐缓冲溶液 pH3 5 2ml 加水稀释成25ml 微热溶解 微热溶解 水15ml 标准铅溶液 甲管 硫代乙酰胺试液 2ml 比较颜色 乙管颜色与甲管比较 不得更深 乙管 如 苯佐卡因 甲硝唑等 3 第三法硫化钠法适合于溶于碱 不溶于稀酸的药物如 磺胺类 巴比妥类等药物 供试品 Na2S NaOH 显色 5ml 5滴 1 适合的酸碱度 硫代乙酰胺 pH3 5醋酸 醋酸钠缓冲液硫化钠 碱性 2 适合的比色浓度 含Pb10 20 g 35ml 相当于标准铅液1 2ml 3 比色方法 白色背景 注意 五 砷盐 Arsenic ChP JP 古蔡氏法 二乙基二硫代氨基甲酸银法 BP 古蔡氏法 次磷酸法 USP 二乙基二硫代氨基甲酸银法 砷斑 AsO43 SnCl2 KI AsO33 新生态H2 AsO33 HgBr2 AsH3 As3 Pb AC 2 Zn 2HCl 黄 棕色 1 古蔡氏法 Gutzeit 1 原理 H2 由Zn 浓HCl制备 与三价砷生成AsH3气体 酸性SnCl2作用 As5 As3 KI被氧化生成的I2转变为I 并与Zn2 形成稳定的配位化合物 有利于砷化氢气体的不断生成 在锌粒表面形成Zn Sn齐 使氢气均匀发生 抑制Sb的干扰 各试剂的作用 KI作用 As5 As3 被氧化生成的I2转变为I 并与Zn2 形成稳定的配位化合物 有利于砷化氢气体的不断生成 抑制Sb的干扰 醋酸铅棉花作用 除去硫化物的干扰 H2S Pb AC 2 2HAC PbS HgS H2S HgBr2 2HBr 2 装置 检砷器 有孔玻璃旋塞 导气管 AsH3发生瓶 60mg 含芳环杂环的药物 有机破坏 碱破坏 酸破坏 ChP 碱破坏 Ca OH 2 无水Na2CO3 2 二乙基二硫代氨基甲酸银 Ag DDC 法 红色胶态银 目视比色法 510nm测定A值 1 白田道夫法 含Sb的药物 如葡萄糖酸锑钠锑盐