第26章酶促反应法测定生物化学物质

第二十六章酶促反应法测定生物化学物质 第2页 教学目标与要求 掌握 酶促反应法测定生物化学物质定义 分类及其应用原理 UA BIL 尿素 肌酐 葡萄糖 糖化血清蛋白 TG TCH HDL C LDL C TBA酶促反应法测定的原理及其优缺点与注意事项 熟悉 酶促反应法测定其它生物化学物质的原理及其优缺点与注意事项 了解 上述酶促反应法测定生物化学物质的方法学评价 以及其方法的历史演变 第3页 主要内容 酶反应前后光吸收变化测定法 脱氢酶指示系统测定法 过氧化物酶指示系统测定法 酶循环测定法 酶激活和酶抑制测定法 第3页 第一节酶反应前后光吸收变化测定法 一 血清尿酸测定 利用吸光度的差值计算物质的含量 二 血清胆红素测定 第4页 第5页 第5页 尿酸 UA 的酶法测定 包括尿酸氧化酶法 尿酸酶紫外法 尿酸氧化酶传感器检测法等 由于各种方法受试剂 仪器等不同的影响 各方法之间的检测结果偏差较大 结果之间缺乏可比性 目前 临床上主要采用尿酸氧化酶法和酶紫外法测定 一 血清尿酸 UA 测定 尿酸氧化酶法 根据血清尿酸在尿酸酶的作用下生成尿囊素及H2O2 生成的H2O2与4 AA和TOOS在POD的作用下最终生成紫红色的醌亚胺 其颜色深浅与尿酸含量成正比 第6页 第7页 第7页 尿酸紫外法 利用尿酸在282 292nm处有特异吸收峰 在尿酸酶作用下 生成产物在此波长范围无吸收峰 因此 在此波长下测量酶作用前后的吸光度之差 便可计算血清尿酸的含量 该法为目前临床实验室的最佳方法 第8页 本方法需要高质量石英比色皿 在使用紫外分光光度计前需对其波长进行校正 还要注意控制反应条件即温度 时间及溶液的pH值等 第8页 自动生化分析仪通常不具备290nm左右的检测波长 因而该法在临床实验室基本没有采用 尿酸酶紫外法的特异性和抗干扰性好 标本用量少 无需制备无蛋白滤液 而且方法简便快速 血清尿酸 UA 测定方法性能评价 二 血清胆红素测定 胆红素氧化酶法 胆红素呈黄色 在450nm处有最大吸收峰 胆红素氧化酶催化胆红素氧化形成胆绿素 随着胆红素被氧化 胆红素在450nm处吸光度下降 下降程度与胆红素被氧化的量相关 在pH为8 0的条件下 未结合胆红素及结合胆红素均被氧化 因而检测450nm吸光度的下降值反映的是总胆红素的含量 第10页 第10页 该法解决了长期以来用重氮反应法测定胆红素条件的不同 包括试剂种类和浓度不同以及反应时间不同而造成测定值变异大的问题 第10页 特别是对于CB 由于BOD仅对血清CB进行选择性氧化 而不对 胆红素和UB发生氧化反应 因此反应具有较好的特异性 酶法特异性高 重复性较好 血清胆红素测定方法性能评价 第11页 第二节脱氢酶指示系统测定法 一 单酶反应直接测定法 一 血液乳酸与丙酮酸测定 二 血浆 羟丁酸测定 三 血氨测定 脱氢酶指示系统 二 酶偶联脱氢酶指示系统测定法 一 尿素测定 二 肌酐测定 三 血浆碳酸氢根测定 第12页 第12页 根据340nm处吸光度的变化 计算以NAD H 或NADP H 为辅酶的酶促反应中待测物的浓度 氧化时待测物脱下的氢交给了氧化型辅酶 使其转变为还原型辅酶 还原时待测物需要的氢由还原型辅酶提供 使其转化为氧化型辅酶 生化物质在脱氢酶的催化下发生氧化还原反应 概述 第13页 第13页 第14页 第14页 血液乳酸测定的方法有乳酸氧化酶法 酶电极法和乳酸脱氢酶法 血液丙酮酸的酶法测定主要包括乳酸脱氢酶法和丙酮酸氧化酶法 临床血液乳酸与丙酮酸测定大多采用乳酸脱氢酶法 第15页 第15页 脱氢酶法测定乳酸 根据乳酸在乳酸脱氢酶 LD 催化下脱氢生成丙酮酸 氧化型NAD 接受氢转变成还原型NADH 加入硫酸肼可捕获产物丙酮酸促成反应完成 生成的NADH与乳酸为等量摩尔 于340nm波长测定NADH的吸光度 可计算出血液中的乳酸含量 第16页 第16页 脱氢酶法测定丙酮酸 是乳酸测定的逆反应 丙酮酸在LD的催化下 接受NADH递给的氢 还原为乳酸并生成NAD 根据NADH吸光度的下降值可测定样品中的丙酮酸 本方法使用的偏磷酸易被氢离子催化成正磷酸而失去沉淀蛋白的作用 偏磷酸溶液在4 时仅能稳定1周 丙酮酸标准应用液会发生聚合反应 其聚合体的酶促反应速率与非聚合体不同 故丙酮酸标准应用液必须新鲜配制 血中丙酮酸极不稳定 血液抽出后1min就会减低 如用偏磷酸沉淀蛋白后放4 时可稳定8d 酮体易受饮食影响 剧烈运动时乳酸可在短时间内明显增加 因此 抽血前患者应保持空腹和完全静息至少2h 第17页 第17页 抗凝剂用肝素 氟化钠较好 脱氢酶法测定乳酸和丙酮酸方法性能评价 第18页 第18页 血浆 羟丁酸的测定方法有酸氧化比色法 气相色谱法 酶法和毛细管等速电泳法等 脱氢酶法是血浆 羟丁酸测定的常用方法 第19页 第19页 脱氢酶法测定血浆 羟丁酸 羟丁酸在 羟丁酸脱氢酶的催化下 被氧化生成乙酰乙酸 同时NAD 被还原为NADH 在pH8 5时测定340nm波长下NADH吸光度上升的速率 就可以计算出血浆中 羟丁酸的浓度 第20页 由于易受饮食影响 原则上应空腹取血 羟丁酸避免在室温放置 4 可以稳定30d 第20页 脱氢酶法测定血浆 羟丁酸方法性能评价 试剂中如含有草酸 可以抑制内源性LD对乳酸的氧化反应 第21页 第21页 血氨的测定主要有两类方法 两步法 先从血浆中分离出氨 再进行测定 如离子交换树脂法 一步法 即不需要分离就可以直接测定 如酶法和离子选择电极法 离子交换树脂法是血氨测定的参考方法 氨电极法由于氨气敏电极选择性较高 所以方法特异性好 准确度高 但耐用性差 且电极的稳定性受温度 渗透压 中介液等多种因素影响 目前 酶法由于方法简单 特异性高而被广泛应用 第22页 第22页 谷氨酸脱氢酶法测定血氨 在谷氨酸脱氢酶 GLDH 作用下 血浆中氨与 酮戊二酸和NADPH反应 生成谷氨酸和NADP NADPH在340nm吸光度的下降程度与反应体系中氨的浓度呈正比关系 第23页 该法在pH7 0以上时 ADP是GLDH的稳定剂和激活剂 能加速反应 用NADPH取代原来的NADH 既可缩短反应时间 又能防止假阳性 因为血浆中有许多以NADH为辅酶的脱氢酶 用NADH时易产生负反应 第23页 该法特异性强 快速 是较为理想的氨分析方法 谷氨酸脱氢酶法测定血氨方法性能评价 床旁取血后应立即分离血清并尽快进行测定 防止外源性氨的污染 第24页 第24页 第25页 第25页 尿素的测定方法可分为化学比色法和尿素酶法两大类 尿素酶法简单 快速 准确 特异性强 易于自动化 第26页 酶偶联脱氢酶法测定尿素 尿素酶催化尿素分解产生氨 氨在谷氨酸脱氢酶 GLDH 的作用下使NADH氧化为NAD 然后在340nm下测定吸光度的降低值 用标准对照速率法即可计算出血清尿素的含量 第27页 但该法存在内源性氨和外源性氨 以及内源性脱氢酶和还原型辅酶的干扰 需采用含LD抑制剂 如高浓度丙酮酸 的双试剂法来测定 否则测定结果偏高 第27页 酶偶联脱氢酶法测定尿素方法性能评价 尿素酶偶联脱氢酶法测定血清尿素方法简便 快速 适用于临床常规分析 第28页 第28页 肌酐酶法测定主要有肌酐亚氨酸水解酶偶联谷氨酸脱氢酶法和酶偶联肌氨酸氧化酶法两种 第29页 脱氢酶法测定肌酐 肌酐在肌酐亚氨基水解酶 CRDI 的作用下水解为N 甲基 乙内酰脲和NH4 NH4 与NADPH和 酮戊二酸在GLDH的作用下 生成L 谷氨酸和NADP 记录340nm处吸光度的下降 进而计算出标本中肌酐的浓度 第30页 第30页 该方法的主要缺点是试剂不够稳定 且肌酐酶来源困难 使得试剂盒价格昂贵 影响其在临床实验室的普遍使用 肌酐脱氢酶法与参考方法高效液相色谱法具有良好的相关性 精密度好 准确度高 线性范围宽 不受黄疸 乳糜血 溶血和临床常用治疗药物及体内代谢物的干扰 结果更趋于真值 易于自动化分析 可用于血液及尿液的检测 肌酐脱氢酶法性能评价 相比之下 肌氨酸氧化酶法具有灵敏度高 线性范围宽 试剂稳定性好等优点 第31页 第31页 血浆HCO3 测定方法主要有离子选择电极法 滴定法和酶速率法等 酶速率法为HCO3 直接参与化学反应 操作简单 反应特异 更适合临床常规检测 第32页 酶法测定血浆碳酸氢根 血浆中的HCO3 在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 PEPC 催化下 与磷酸烯醇式丙酮酸 PEP 反应 生成草酰乙酸和磷酸 草酰乙酸和苹果酸脱氢酶 MDH 反应 生成苹果酸 同时将NADH氧化成NAD 在340nm波长处吸光度的降低与样品中HCO3 含量成正比 第33页 第33页 在准备试剂和收集标本时 应严格密封 以最大限度地减少干扰如标本中CO2的挥发 酶法测定血浆碳酸氢根性能评价 试剂浑浊或试剂空白吸光度小于1 0时都不能使用 内源性丙酮酸和LD对反应产生干扰 此干扰可由草氨酸钠消除 第34页 第34页 四 血清总胆固醇 三 血清三酰甘油 一 葡萄糖 第三节过氧化物酶指示系统测定法 过氧化物酶指示系统测定法 二 糖化血清蛋白 五 血清HDL C和LDL C 第35页 第35页 Trinder反应指示终点 生化物质在氧化酶的催化下 生成H2O2 过氧化物酶指示系统是临床生化物质最常用的测定方法 概述 第36页 第36页 葡萄糖的检测方法较多 可归纳为氧化还原法 无机化学法 缩合法 有机化学法 和酶法 生物化学法 三类 酶法包括葡萄糖氧化酶 GOD POD 法 己糖激酶 HK 法 葡萄糖脱氢酶法和葡萄糖氧化酶 氧速率 GOD POR 法 第37页 葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖 根据GOD可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸并同时产生H2O2 生成的H2O2参与Trinder反应 生成醌亚胺色素 在505nm波长下比色检测 生成的吸光度与葡萄糖浓度成正比 第38页 第38页 GOD仅高特异的催化 D 葡萄糖 而葡萄糖中 型约占36 因此葡萄糖的完全氧化需要使 型变旋为 型 葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖性能评价 现在的试剂大多含有变旋酶 可促进 型向 型的转变 延长孵育时间也可以达到自发变旋 第39页 第39页 血清清蛋白在高血糖情况下会发生糖基化 主要是清蛋白肽链189位的赖氨酸与葡萄糖结合形成的高分子酮胺结构 该结构类似于果糖胺 因此糖化血清蛋白 GSP 的测定也称为果糖胺的测定 GSP的常用测定方法有硝基四氮唑蓝 NBT 化学比色法和酮胺氧化酶 KAO 法 NBT法基于酮胺结构可以在碱性环境中与NBT反应生成蓝紫色的化合物 与NBT法相比 KAO法的精密度和准确度更高 第40页 酮胺氧化酶法测定糖化血清蛋白 GSP在蛋白酶K的作用下可形成糖化蛋白片段 该片段在KAO的作用下分解为氨基酸 葡萄糖和H2O2 生成的H2O2即可用Trinder反应测定 第41页 第41页 KAO法稳定 特异性强 具有酶法的基本优点 酮胺氧化酶法测定糖化血清蛋白性能评价 样本在4 可保存3周 20 保存5周 当病人血浆蛋白低于35g L时 GSP偏低 第42页 第42页 血清三酰甘油 TG 测定方法有物理化学法 同位素稀释 质谱法 化学法和酶法三类 酶法是目前临床测定血清TG的常规方法 常用的酶法有甘油磷酸脱氢酶 GDH 法和GDH偶联NBT的比色法 以及甘油磷酸氧化酶偶联Trinder反应法 第43页 甘油磷酸氧化酶法测定血清三酰甘油 血清TG可被LPL水解为甘油和脂肪酸 生成的甘油被甘油激酶 GK 及ATP磷酸化后形成3 磷酸甘油 磷酸甘油氧化酶 GPO 氧化3 磷酸甘油产生H2O2 生成的H2O2参与Trinder反应而被测定 第44页 第44页 与GDH法相比 该方法易受到还原性物质的干扰 但是由于方法稳定 测定简单 仍然是目前主要采用的检测方法 由于乳糜微粒含有大量的TG 可影响检测结果 因此需空腹12h以上采血 该法可采用血清或血浆标本 若采用血浆 应将结果乘以标准系数1 03 并在报告单上注明 该法通常被称为GPO PAP法 结果比GDH法约低3 甘油磷酸氧化酶法测定血清三酰甘油性能评价 第45页 第45页 血清总胆固醇 TC 测定方法种类繁多 主要有放射性核素稀释 质谱法 化学法和酶法 酶法的主要方法为胆固醇氧化酶 COD PAP 法 第46页 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 根据GOD可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸并同时产生H2O2 生成的H2O2参与Trinder反应 生成醌亚胺色素 在505nm波长下比色检测 生成的吸光度与葡萄糖浓度成正比 第47页 第47页 样本若未及时检测 置2 8 冷藏可稳定1个月 20 冷冻可稳定1年 因此若采用血浆做为检测标本 应将结果乘以标准系数1 03 并在报告单上注明 同血清TG检测一样 血浆的结果比血清约低3 COD PAP法标本用量小 结果可靠 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇性能评价 第48页 第48页 国外将常规测定HDL C的方法分为3代 第1代为化学沉淀法 第2代为硫酸葡聚糖 镁 DS Mg2 分离法 第3代为匀相测定法 国内的检测方法也可分为3代 第1代为电泳法 第2代为化学沉淀法 1995年中华医学会检验分会曾在国内推荐磷钨酸 镁 PTA Mg2 法作为HDL C测定的常规方法 第3代为目前广泛使用的匀相测定法 血清LDL C的测定相对比较复杂 方法有Friedewald公式法 Planella公式法 聚乙烯硫酸盐 PVS 沉淀法是目前中华医学会推荐的LDL C测定方法 美国CDC测定LDL C的参考方法为超速离心法 脂蛋白定量法 第49页 匀相法测定HDL C 利用一系列反应先将CM VLDL LDL或其反应产物清除 然后加入一种特殊的选择性表面活性剂 使HDL颗粒形成可溶状态 其释放的胆固醇和胆固醇酯与CEH及COD反应 生成的H2O2用Trinder反应测定 第50页 匀相法测定HDL C 同HDL C一样 血清中除LDL C外 HDL CM和VLDL等在某些表面活性剂的作用下 可改变其脂蛋白结构并解离 释放出来的微粒化胆固醇分子与胆固醇酶试剂反应后生成H2O2 因此也需要进行前处理后 剩下完整LDL的颗粒进行下一步反应 第51页 第51页 匀相法测定血清中的HDL C和LDL C的最主要区别在于第一步反应时加入的反应促进剂不同 其目的都是使除了待测物质以外的其他干扰物质被清除掉 从而使测定结果仅仅反映的是待测物质的含量 匀相法测定HDL C和LDL C性能评价 该法具有较好的精密度和线性范围 干扰物质较少 而且样品用量少且无需预处理 自动化程度高 结果精确度 准确度高 因而近来在临床上得到了越来越广泛的应用 缺点是成本相对较高 第52页 第四节酶循环测定法 第52页 三 血清同型半胱氨酸 二 血清胆汁酸 一 血清甘油 四 血浆NH4 酶循环测定法 第53页 概述 酶循环法是一种可以大大提高待测物测定灵敏度 减少共存物质干扰 达到高灵敏度和高特异度测定要求的一类技术 根据试剂酶的结合方式和辅酶的用法 可以将酶循环法分为底物循环法和辅酶循环法 根据反应方式的不同又可将底物循环法分为氧化酶脱氢酶反应法和脱氢酶辅酶反应法等 第54页 产物循环 氧化酶 脱氢酶系统测定血清甘油 甘油和ATP在甘油激酶 GK 催化下形成甘油 3 磷酸 G 3 P 后者可被磷酸甘油氧化酶 GPO 氧化为磷酸二羟苯酮 DHAP 而甘油 3 磷酸脱氢酶 G 3 PD 又可将DHAP还原回G 3 P 在此过程中伴有NADH向NAD 的转化 反应反复循环 第55页 第55页 在反复循环中G 3 P和DHAP的量不变 而产物H2O2则随着每次循环不断递增 同时NADH不断递减 在规定时间t内 H2O2累计的量决定于t和每分钟循环次数 因此其灵敏度大大超过一般的酶法分析 产物循环 氧化酶 脱氢酶系统测定血清甘油性能评价 检测的指示系统有 1 用连续检测法测定NADH 340nm 的变化速率 2 产物H2O2可偶联POD 通过Trinder反应比色测定 第56页 第56页 血清总胆汁酸 TBA 的测定方法包括层析法 放免法和酶法等 酶法又可分为酶荧光法 酶比色法和酶循环法 目前推荐的方法是酶循环法 该法灵敏度高 特异性好 已得到广泛应用 第57页 底物循环 脱氢酶 辅酶系统测定血清胆汁酸 3 羟基类固醇脱氢酶 3 HSD 可催化胆汁酸和3 酮类固醇之间的反应 正反应对辅酶硫代氧化型辅酶 thio NAD 的亲和力远远大于辅酶 NAD 而逆反应对还原型辅酶 NADH 的亲和力大于硫代还原型辅酶 thio NADH 当反应系统中有足够的thio NAD 和NADH时 少量胆汁酸生成少量的3 酮类固醇 并在两者之间构成循环 不断产生黄色的硫代还原型辅酶 thio NADH 反应速度与待测物胆汁酸浓度呈正比 第58页 第58页 由于胆汁酸在体内的浓度只有微摩尔水平 因此常规方法难以测定 采用此循环反应 其灵敏度可增加数十倍 只要NADH足够多 时间越长产物越多 直到系统中某一反应物耗尽为止 底物循环 脱氢酶 辅酶系统测定血清胆汁酸性能评价 循环酶法测定血清胆汁酸检测的是395 415nm波长时反应中氧化型thio NAD 转化为还原型thio NADH的增加速度 第59页 第59页 测定同型半胱氨酸的方法包括氨基酸分析仪法 荧光偏振免疫分析 FPIA 酶联免疫吸附法 HPLC法和酶学分析法 其中HPLC法是最常用的方法 但是需要特殊设备 循环酶法是利用酶的底物特性 放大靶物质 被测物 的检测方法 此法仅循环靶物质 具有快速 简便 灵敏度高 易于自动化等特点 第60页 底物循环 脱氢酶 辅酶系统测定血清同型半胱氨酸 在三 乙 羧乙基膦 TCEP 作用下 结合型Hcy转化为游离型Hcy 游离型Hcy与s 腺苷甲硫氨酸 SAM 在Hcy甲基转移酶催化下 形成蛋氨酸 Met 和S 腺苷同型半胱氨酸 SAH SAH被SAH水解酶水解成腺苷和Hcy 形成的Hcy可以循环加入反应 从而放大检测信号 腺苷 Ado 水解为次黄嘌呤 inosine 和氨 氨在谷氨酸脱氢酶的作用下 使NADH转化为NAD 样本中的Hcy的浓度与NADH的变化成正比 第61页 第61页 酶循环法是目前临床测定血清Hcy最新的一种化学方法 与以前免疫化学法 电泳法 色谱法等相比 具有操作简单 可自动化等优点 底物循环 脱氢酶 辅酶系统测定血清同型半胱氨酸性能评价 随着对同型半胱氨酸临床研究的深入 其定量测定意义越来越受到重视 因此本实验的检测方法及试剂具有很高的推广及应用价值 第62页 氨循环 合成酶 脱氢酶系统测定血浆NH4 靶物质NH4 和脱氨 NAD在NAD合成酶和Mg2 存在下可被催化生成亮氨酸和NAD 亮氨酸经亮氨酸脱氢酶催化形成为氧化异己酸和NH4 同时将NAD 转化为NADH 生成的NH4 进入循环往复反应 在340nm处测定NAD 形成NADH吸光度的增加即可计算出NH4 的含量 第63页 第63页 该法测定血浆NH4 具有快速 特异性高 微量的特点 氨循环 合成酶 脱氢酶系统测定血浆NH4 性能评价 在技术上酶法不需预先分离氨 没有碱水解步骤 减少了阳性偏差 第64页 第五节酶激活和酶抑制测定法 一 无机离子测定 一 丙酮酸激酶法测定钾离子 二 半乳糖苷酶法测定钠离子 三 淀粉酶法测定氯离子 四 异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子 酶激活和酶抑制测定法 二 微量元素测定 一 超氧化物歧化酶法测定铜离子 二 碳酸酐酶法测定锌离子 三 有机磷测定 第65页 概述 第65页 酶激活剂 Mg2 Zn2 K Cl 第66页 第66页 第66页 AddTitle ClicktoedittitlestyleClicktoedittitlestyleClicktoedittitlestyle ClicktoedittitlestyleClicktoedittitlestyleClicktoedittitlestyle 无机离子 微量元素可使该酶重新具有活性 利用一些物质抑制酶的活性 酶激活 酶抑制 根据酶活性被抑制的程度来测定其抑制物浓度 称为酶抑制剂法 如有机磷的测定 第67页 第67页 丙酮酸激酶法测定钾离子 磷酸烯醇式丙酮酸和ADP在丙酮酸激酶 PK 的催化下 可生成丙酮酸和ATP 丙酮酸又与LDH系统偶联 经LDH催化生成乳酸的同时 NADH氧化成NAD 钾离子的存在可使PK活性显著增强 故NADH在340nm吸光度的变化可间接反映血清钾离子的浓度 第68页 第68页 第68页 半乳糖苷酶法测定钠离子 邻硝基苯 D 半乳糖 ONPG 在钠依赖性 半乳糖苷酶作用下生成半乳糖和邻硝基苯酚 后者的生成速率与标本中钠离子的浓度成正比 在405nm波长处检测邻硝基苯酚的变化可计算出钠离子的含量 第69页 第69页 第69页 第69页 淀粉酶法测定氯离子 淀粉酶可催化2 氯 4 硝基苯 D 麦芽三糖苷 CNP G3 解离生成2 氯 4 硝基 CNP 和麦芽三糖 G3 CNP的最大吸收峰在405nm 连续监测405nm吸光度变化可直接反映CNP生成量 其与酶活力成正比 氯离子是 淀粉酶的激动剂 因此反应速率的变化可反映氯离子的浓度 第70页 第70页 第70页 第70页 第70页 异柠檬酸脱氢酶法测定镁离子 在适当浓度的两种金属螯合剂EDTA和GEDTA 乙二醇二乙醚二胺四乙酸 中 用镁离子作为激活剂 通过异柠檬酸脱氢酶 ICD 催化异柠檬酸脱氢 使NADP 还原成NADPH 在同样的条件下 与镁的标准液比较 即可求得血清镁的含量 第71页 第71页 酶激活剂法在检测无机离子时与其他传统测定方法相比具有较为明显的优势和更为广阔的应用前景 它具有酶法常有的优点且抗干扰能力较强 酶激活剂法测定无机离子性能评价 测定钾离子需要注意的是 当氨离子在有锰或镁离子存在时对PK有显著的激活作用 故需用GDH消除NH4 的干扰 淀粉酶法测定氯离子时所需底物分子量小 用量少和不需加用辅助酶 测定成本相对较低 同时其线性范围较宽 特异性与稳定性好 其突出优点是表现在抗干扰方面 不易受卤族元素溴 碘及硫氰酸等阴离子的干扰 第72页 第72页 第72页 第72页 第72页 第72页 超氧化物歧化酶法测定铜离子 黄嘌呤 xanthine 在黄嘌呤氧化酶 XO 的作用下可以生成O2 该物质可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲臜 后者在560nm处有强吸收 而SOD可清除O2 从而抑制了