（黄秋明）科技创新项目结题报告书修改

项目类别项目批准号B. 理科附件3 华南农业大学大学生科技创新活动项目结题书项目名称： 两种氨基糖苷抗生素抗体制备研究 申 请 人： 黄秋明、陈旭彦 所在院部： 食 品 学 院 专业年级： 03食品科学与工程(质量与安全方向) 联系电话：指导教师: 雷红涛 职称 讲师 立项日期： 二五 年 四 月 七 日 结题日期： 二六 年 四 月 十 日华南农业大学大学生科技创新活动项目指导中心 填 表 说 明 一、 填写结题报告书前，请先咨询指导教师或有关专业教师。申请书的各项内容要求实事求是，逐条认真填写。表达明确、严谨，一律要求用打印稿件。 二 、申请书为A4复印纸，于左侧装订成册。一式三份（至少一份原件），由指导教师和所在院（部）审查并签署意见后报大学生科技创新活动项目指导中心。三 、一级标题三号宋体加粗，用“一、二、三”标示；二级标题四号楷体加粗，用“（一）（二）（三）”标示；三级标题四号仿宋加粗，用“1、2、3”标示；四级标题四号仿宋，用“”标示。示例：一、XXXX课题立项与研究的目的意义（一）XXXX课题立项与研究的目的的意义1、XXXX课题立项与研究的目的意义XXXX课题立项与研究的目的意义四、如表格不够，可以加附页。一、简表项目简况项目名称两种氨基糖苷抗生素抗体制备研究项目类别 B、理科类；申请经费1500元起止年月2005.4-2006.4项目组成员姓 名性别出生年月年级专业班级所在学院上学年综合测评分项目中的分工本人签字黄秋明男1983.903食工4班食品学院抗原合成陈旭彦女1984.1103食工4班食品学院抗体制备指导教师情况姓名雷红涛性别男学位硕士职称讲师研究方向食品安全免疫快速检测授课名称食品化学综合实验 高级食品分析技术 食品营养学项目简介 氨基糖苷类抗生素经常以各种途径残留在肉、蛋、奶等动物源性食品中，不但威胁人们身体健康，而且损害到我国国际贸易利益。本课题以庆大霉素和链霉素为对象，研究不同方法合成其人工抗原，通过紫外光谱法等方法鉴定人工抗原，进一步研制其抗体，为建立氨基糖苷类抗生素免疫快速检测方法奠定基础，为我国食品安全控制做出贡献。二、项目研究的内容与方法1 研究内容1) 人工抗原合成和鉴定：包括庆大霉素和链霉素的衍生或修饰改造、与载体蛋白连接，偶联物纯化、鉴定方法研究等。2) 抗体研制：用合成的人工抗原，选择合适的免疫方式免疫动物，研制抗庆大霉素和链霉素多克隆抗体。2 研究方法1) 人工抗原合成：庆大霉素人工抗原：方法一（EDC法）：一定量的庆大霉素和BSA(免疫原载体)或OVA（包被抗原载体）溶解在1ml水中，逐滴加入一定量的EDC，室温下反应2小时，4度下用PBS进行充分透析。方法二（GDA法）：将一定量的BSA溶于PBS缓冲液中，加入一定量的庆大霉素及新鲜制备的1%的戊二醛，4度下反应3小时，加入一定量的硼氢化钠，4度下反应1小时，透析。链霉素人工抗原：方法一（ACC法）：一定量的NHS与丁二酸酐溶于二氯甲烷中，加入三乙胺后室温搅拌3小时，溶液用乙酸乙酯萃取有机相后干燥。将一定量的干燥产物溶解于DMF中，加入一定量的BSA（溶于PBS中），室温反应1.5小时，超滤后，用MES缓冲液接收渗余物，加入一定量的链霉素（溶于MES中）及EDC，室温反应2小时，反应液超滤后用PBS缓冲液接收。方法二（GDA法）：将一定量的BSA溶于PBS缓冲液中，加入一定量的链霉素及新鲜制备的1%的戊二醛，4度下反应3小时，加入一定量的硼氢化钠，4度下反应1小时，透析。方法三（EDC法）：一定量的链霉素和BSA(免疫原载体)或OVA（包被抗原载体）溶解在1ml水中，逐滴加入一定量的EDC，室温下反应2小时，4度下用PBS进行充分透析。包被抗原制备方法同上，仅将BSA换作OVA。2) 人工抗原鉴定：偶联产物以透析分离纯化，并计算其偶联比。3) 抗体制备：常规法制备鼠多克隆抗体。用三种人工免疫抗原分别免疫小鼠，采用间接ELISA法筛选。三、项目研究过程与资料查阅情况1 研究过程采取上述方法，先微量后常量的方式，通过EDC、GDA等方法分别合成两种抗生素抗原共5种人工抗原，采用紫外光谱法对人工抗原进行了鉴定，进行动物免疫，通过ELISA方法检测抗体。具体过程参见附件技术报告。2 资料查阅情况 由于该研究课题在国内相关研究报道很少，因此在课题研究过程中查阅了一定量的外文文献，参考的外国期刊包括Food and Agricultural Immunology、Biosensors and Bioelectronics以及Analytica Chimica Acta，并在参考外文文献中介绍的方法的基础上，经过具体操作，对实验方法进行改良。四、项目成果完成形式和价值 1 制备出庆大霉素和链霉素类毒物抗原。 2 制备出庆大霉素和链霉素类毒物抗体。 3 提供1份技术报告。为进一步研制两类抗生素的单克隆抗体和建立免疫分析方法提供了借鉴。五、经费使用情况实验动物 200元常规试剂 400元分析检测 300元耗材 500元文献检索等 100元合计 1500元六、申请人对该项目研究工作完成后的认识总结从本实验结果来说，基本上达到了预期目的，基本上掌握了如何开展科学研究的方法，为以后的研究奠定了基础。但由于各方面原因，没有取得可喜的成绩，现总结如下：1、要坚持认真的实验态度。对遇到的问题不能操之过急，应该仔细分析问题出现的原因，查阅有关资料，提高解决问题的能力，知难而上，而不是遇难而退。2、开始试验前要掌握一定的实验研究方法和技巧，这样就可以在实验开始阶段能马上进入状态。另外最重要的是查阅相关文献，吸取别人的研究经验，少走弯路，在别人的研究基础上加以创新。3、由于这是个新颖的课题，只能一步一步地走，难度相当大，最后所得抗体性能尚不理想。 4、整个实验过程应该都是专业学习和实际相结合的综合运用，但是我们并没有做到这一点，在以后的研究当中需要加强这一点。经过半年多的实验，的确使我们获益良多，在各方面包括学习和做事等能力获得了很大的提升，回顾一步一步地走过来的实验历程，每走一步就是一点提升，这就是付出与回报。七、指导教师对项目完成情况的意见该课题组同学前期查阅了很多资料，合理设计了实验方案，实验中独立思考，知难而上，成功合成两种