2.1 微生物的实验室培养(1).doc

一、培养基1概念：人们按照微生物对营养物质的不同要求，配制出供其_的营养基质。2分类：依据培养基的物理性质可分为(1)液体培养基：_状态的基质。(2)固体培养基：在_状态的基质中加入凝固剂_可制成_培养基。微生物在_培养基表面生长，可以形成肉眼可见的_。3营养(1)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有_、_(提供碳元素的物质)、氮源(提供_元素的物质)和无机盐。(2)在提供上述营养的基础上，培养基还要满足微生物生长对_、特殊营养物质以及_的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加_，培养霉菌时需要将培养基的pH调至_，培养细菌时需要将培养基的pH调至_或_性，培养厌氧微生物时则需要提供_的条件。二、无菌技术1概念：获得纯净培养物的关键是防止_的入侵，无菌技术就是围绕如何避免杂菌的污染展开的。2消毒：用较为温和的_或_方法杀死物体表面或内部的_微生物(不包括_)。3灭菌：指采用强烈的_杀死物体_所有的微生物，包括_。4无菌技术主要包括以下四方面(1)对实验操作的_、操作者的_和_，进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的_、_和_等进行灭菌。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_附近进行。(4)实验操作时应避免已经_处理过的材料用具与_相接触。5实验室常用的消毒和灭菌方法(1)日常生活中经常用到煮沸消毒法。(2)对一些不耐高温的液体，如牛奶，可用_法。(3)接种环、接种针或其他金属用具，可进行_灭菌。(4)能耐高温的、需要保持干燥的物品可进行_灭菌。(5)高压蒸汽灭菌：一般压力在_kPa，温度为_的条件下，维持_min。(6)除了以上方法外，实验室里还用_或_进行消毒。判断正误：(1)所有的培养基中都要加入琼脂()(2)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质()(3)培养基只有液体培养基和固体培养基两种()(4)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底()(5)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌()一、培养基的成分及其类型1碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳营养要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物构成细胞物质和一些代谢产物；有机碳既是碳源又是能源有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源NH3、铵盐、硝酸盐、N2等将无机氮合成含氨的代谢产物有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基酶和核酸的组成成分；参与代谢过程中的酶促反应2.培养基类型划分划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐)鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈现深紫色，并带有金属光泽)1自养型微生物和异养型微生物的培养基成分的主要差别是什么？2液体培养基为什么适合用于工业生产？3如果要从土壤中分离某种微生物，所用的培养基从物理性质和用途两个方面进行分类，该培养基分别属于何种培养基？4某同学将霉菌和金黄色葡萄球菌混在一起，请你用培养基培养的方法将其中的霉菌选择出来。1下列培养基配方中能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是()原料蛋白胨/g10101010乳糖/g5555蔗糖/g5555KH2PO4/g2222伊红/g0.4美蓝/g0.065琼脂/g1020NaCl/g20蒸馏水/mL1 0001 0001 0001 000A. B C D问题导析(1)四种培养基中共有的成分不能作为判断培养基种类的依据。(2)培养基中因为含有_，所以可以鉴定大肠杆菌；培养基中因为含有_，所以可以用来选择培养金黄色葡萄球菌。一题多变(1)表格中的蛋白胨主要为微生物提供何种营养成分？_。(2)乳糖和蔗糖在培养基中的作用是什么？_。(3)如果用培养基培养某种自养微生物，则该配方中的哪种物质可以去除？_。二、消毒和灭菌的比较项目概念常用方法应用的范围消毒使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法：在100 煮沸56 min一般物品巴氏消毒法：7075 煮30 min或在80 煮15 min一些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等紫外线消毒法：30 W紫外线照射30 min接种室、接种箱或超净工作台灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物包括芽孢和孢子灼烧灭菌：用酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧接种环、接种针或其他金属工具干热灭菌：160170 下加热12 h灭菌玻璃器皿(吸管、培养皿)、金属工具的灭菌高压蒸汽灭菌：100 kPa、121 条件下，灭菌1530 min培养基及容器的灭菌注意：消毒与灭菌最大的区别是芽孢和孢子是否存活。1“无菌操作”与人们的生活休戚相关，无时、无处不在。人们的哪些做法体现着“无菌操作”？(1)在人们的日常生活中有哪些“无菌操作”的例子？请列举两例。(2)在人们的生产实践中有一些“无菌操作”，请列举两例。(3)在人体自身健康防护中，也有“无菌操作”，请列举两例。2一些需要保持生物活性的物体如实验者的双手应该使用何种无菌操作？为什么？3对于一些没有生物活性的物体如培养基、接种环、培养皿等要使用何种无菌技术？4无论是接种微生物还是制备培养基中的倒平板，都要在酒精灯火焰附近进行，请简述理由。2培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是()化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线消毒高压蒸汽灭菌巴氏消毒法A BC D 问题导析(1)人的双手具有组织细胞，牛奶中的蛋白质成分在高温作用下会变性，所以对于它们不能采用_的方法处理。(2)无生物活性且容易燃烧的物体如培养基，可采用_进行无菌操作；无生物活性且不易燃烧的物体如接种环，可以采用_进行无菌操作。一题多变(1)接种环灼烧灭菌后为什么不能立即接触菌液？_。(2)选择无菌操作方法的依据除了无菌操作的目的外还有什么？_。1不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一2含C、H、O、N的大分子化合物可以作为()A异养微生物的氮源、能源B异养微生物的碳源、氮源C自养微生物的氮源、能源、碳源D自养微生物的氮源、能源3关于灭菌和消毒的理解不正确的是()A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B消毒和灭菌实质是相同的C接种环用灼烧法灭菌D常用的灭菌方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法4下列实验材料和用具，适合使用消毒方法的是_，适合使用灭菌方法的是_。培养基外植体操作者双手锥形瓶接种环牛奶工作台培养皿提醒：完成作业专题2课题1(1)答案精析预习导学一、1生长繁殖2(1)液体(2)液体琼脂琼脂固体固体菌落3(1)水碳源氮(2)pH氧气维生素酸性中性微碱无氧二、1外来杂菌2物理化学一部分芽孢和孢子3理化因素内外芽孢和孢子4(1)空间衣着手(2)器皿接种用具培养基(3)酒精灯火焰(4)灭菌周围的物品5(2)巴氏消毒(3)灼烧(4)干热(5)1001211530(6)紫外线化学药物预习诊断(1)(2)(3)(4)(5)课堂讲义一、思维激活1自养型微生物可以直接利用一些无机碳源如CO2中的碳元素，而异养型微生物只能利用有机物中的碳元素，所以二者的培养基的主要差别是碳源不同。2因为在液体培养基中营养物质和菌体接触更充分，可以提高菌体和培养基的物质交换效率，所以适合用于工业生产。3从物理性质分该培养基应为固体培养基，从用途分该培养基应属于选择培养基。4可在培养基中加入青霉素，然后将混合微生物在该培养基中培养，存活的就是霉菌。应用示例1D在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别是否存在大肠杆菌，有伊红和美蓝的培养基为鉴别培养基。高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来，有高浓度食盐的培养基为选择培养基。问题导析(2)伊红、美蓝高浓度的食盐一题多变(1)主要为微生物提供碳源、氮源和维生素。(2)可以为微生物提供碳源和能源。(3)乳糖和蔗糖。二、思维激活1(1)被褥、鞋袜要常晒；肉制品储存时用盐腌等。(2)家畜阉割后，要在其伤口涂抹一些酒精或白酒；初冬杨树树干涂刷生石灰水等。(3)打针时，注射部位要用酒精棉球擦洗，一般要在其伤口处涂抹一些碘酒。2应使用消毒的方法，因为用灭菌的方法会杀死或破坏人的皮肤组织细胞。3应使用灭菌的方法，其中培养基一般采用高压蒸汽灭菌，接种环使用灼烧灭菌，培养皿等玻璃器皿使用干热灭菌。4在酒精灯火焰附近进行接种或倒平板，目的是造成一个无菌环境，避免操作过程中受到杂菌的污染。应用示例2A培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；对空气可用紫外线消毒；为了不破坏牛奶的营养成分，可采用巴氏消毒法对其进行消毒。问题导析(1)灭菌(2)高压蒸汽灭菌法灼烧灭菌一题多变(1)因为刚刚灼烧后的接种环温度较高，马上接触菌液会将菌种杀死。(2)还要依据无菌操作的对象。课堂小结固体液体碳源、氮源、水、无机盐对点练习1B该微生物以CO2