唾液淀粉酶最适pH值的测定(论文).doc

唾液淀粉酶最适pH值的测定作者：杨璇璇 黎丁菱 甘杏萍 王雅梅 黎氏贤厚1、 前言 生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸，前者是机体内催化各种代谢反应最重要的催化剂。酶分子中的许多极性基团。在不同的PH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才最容易同底物结合或具有最大的催化活性。许多具有可解离基团的底物和辅酶的荷电状态也受PH改变的影响，从而影响酶对它们的亲和力。此外，PH还可以影响酶活性中心的空间构象，从而影响酶的活性。因此，PH的改变对酶的催化作用影响很大。 酶催化活性最高时反应体系的PH称为酶促反应的最适PH。 测定酶的最适PH值，是进一步了解酶生物学活性的基础。 本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受PH影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶。淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及少量葡萄糖（黄色）。用分光光度计测量出各溶液在660nm处的吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适pH值。 结果测得A在pH值6.08.0范围内变化并且随着pH的增大先减小后增大，pH6.8左右，吸光度值最低，所以唾液淀粉酶最适pH值约为6.8。二、材料与方法1、材料与试剂1) 人唾液中的唾液淀粉酶2) 白瓷板、中试管、试管架、毛刷、吸耳球、玻璃笔、小烧杯、坐标纸、漱口水3) 37恒温水浴箱、分光光度计、沸水浴4) 1.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管、胶头滴管5) 0.025%淀粉溶液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、碘液、蒸馏水2、方法 1 ) 缓冲液的配置：根据下表，配置各个pH值的缓冲溶液各10mlPH值 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 0.2mol/L（ml） 0.615 0.925 1.33 1.88 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.58 4.740.2mol/L（ml） 4.39 4.08 3.68 3.13 2.55 1.95 1.40 0.950 0.650 0.425 0.265 2） 唾液的获取：蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中.3） 唾液的稀释：取10支试管，分别编上号09管号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9唾液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.10.1蒸馏水(ml) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 4)唾液稀释倍数的选取：另取10支试管，分别编上09号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，然后向10支试管内同时加入1ml的0.025的淀粉溶液，振荡混匀后放入37恒温水浴箱中，5分钟后取出，滴加23碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。5） 测量pH： 取12支试管，分别标上号112，按下表操作管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120.02淀粉溶液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 12ml缓冲溶液pH 6.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 37水浴10分钟稀释唾 液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1充分混匀后继续水浴加热，从1号试管中每隔1min取一滴液体，滴入白瓷板中，再滴一滴碘液与之反应，观察颜色变化，当颜色变黄时，取出212号试管，然后沸水浴 15min ，使酶失活，酶促反应停止。然后后取出各试管，冷却至室温，往各支试管滴加12滴碘液。6）测量吸光度并记录数据用分光光度计测出212号试管中溶液的吸光度A值，做好记录7）作图在坐标纸上作出平滑曲线，取曲线最低点对应的pH值，即为唾液淀粉酶的最适pH值 三、结果图表四、讨论 本实验中，当唾液淀粉酶的活性最大时，淀粉被分解得最多，剩余底物的量最少，A值最小，过酸或过碱均会抑制酶的活性，使之分解的底物减少，A值增大。 由所作曲线可知唾液淀粉酶的最适pH值在6.8左右。在PH6.8时唾液淀粉酶的活性随PH的升高而增大，在PH=6.8达到最大值，在PH6.8时唾液淀粉酶的活性随PH的升高而降低，因此唾液淀粉酶的最适pH值为6.8，如果过酸或过碱均会降低酶的催化活性。最适PH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度以及酶纯度等因素的影响。溶液PH高于或低于最适PH时，酶活性降低，远离最适PH时还会导致酶变性。在测定酶活性时，应选用适宜的缓冲液以保持酶活性的相对恒定。五、参考文献 1 许冰 ,