第二章清洗与消毒(10).ppt

第二章清洗与消毒,清洗,玻璃器皿的清洗 浸泡刷洗 浸酸 冲洗,胶塞的清洗,自来水冲洗 /水中浸泡 2NaOH(或洗洁精)煮沸1020 min l稀盐酸浸泡/或蒸馏水冲洗后再煮沸1020 min,塑料制品的清洗,必要时，用后经过无菌处理后，尚可反复使用23次 防止划痕用后要立即浸入水中严防附着物干结,除菌滤器清洗,G6除菌滤器的清洗新的G6除菌滤器清洗方法 用过的G6除菌滤器的清洗 不锈钢除菌滤器的清洗刷洗新的或使用后的滤器，流水冲洗15 min，去离子水浸泡24 h，最后用三蒸水浸泡24 h，然后干燥备用。,包 装,皱纹包装纸、硫酸纸、牛皮纸、棉布、铝饭盒、特制玻璃消毒筒、较大的培养皿、锡箔等进行包装。对培养瓶、滤器、存放培养液用盐水瓶、装吸管和胶塞(或培养瓶盖子)的消毒管等的瓶口部分作局部包装密封，再用牛皮包起来备用。对比较小的培养皿、加样器吸头等可以全包装封闭。注射器、金属器械可直接装入铝饭盒内。,消 毒,培养的每个环节的失误均能导致培养失败，细胞培养的每个环节都应严格遵守操作常规，防止发生污染。,物理灭菌法,紫外线消毒,用于空气、操作台表面和不能使用其他法进行消毒的培养器皿。直接照射，方便、效果好，经一定的时间照射后可以消灭空气中大部分细菌。空气中，革兰氏阴性菌最为敏感，其次是革兰氏阳性菌，再次是芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。,直接作用机制是通过破坏微生物的核酸和蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。培养室紫外线灯应距地面不超过2.5 m，照射不到的地方起不到消毒作用。紫外线照射工作台面的距离不应超过1.5 m，照射时间以30 min左右为宜。紫外线可产生臭氧，污染空气，对试剂及培养液都有不良影响，对人皮肤、眼睛都有伤害。因此，不能开着紫外灯进行实验操作。,电离辐射消毒用放射性核素产生的X线和加速器等发出的辐射进行灭菌消毒适用于消毒量大和不适于做高压或滤过等培养用品，如培养瓶、培养皿、培养板、注射器、移液器吸头、离心管等。优点是灭菌时物品不会升温，可直接对密封包装的物品进行灭菌。但由于电离辐射的诱变作用很强，不适合消毒活的生物材料。,湿热消毒即高压蒸汽消毒使用最广泛、效果最好的消毒方法不能装得过满，应保证其内气体的流通，以防止消毒器内气体阻塞而发生危险。在加热升压之前，先要打开排气阀门排放消毒器内的冷空气，然后关闭排气阀门，同时检验安全阀是否活动自如。当达到所需压力时开始计算消毒时间。操作者不能离开工作岗位，要定时检查压力及安全，防止意外事件发生。常用物品消毒压力及时问：培养液和橡胶制品为65 kPa(115)10 min；布类、玻璃制品及金属器械为1013 kPa(1213)20 min。,干热消毒法加热到160以上，并保持90120 min，以杀死细菌和芽孢。用于消毒玻璃器皿。消毒完毕后不可马上将烤箱门打开，以免冷温度骤变而使箱内玻璃器皿破裂。干热消毒的优点是消毒后的器皿干燥、易于储存，缺点是热传导慢。金属器械和橡胶、塑料制品不能使用干热消毒法。 灼烧也是干热消毒灭菌的方法之一。进行细胞培养时，常常利用台面上的酒精灯或煤气灯的火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行灼烧消毒。,过滤除菌过滤除菌是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌目的。用于遇热易发生变性而失效的试剂或培养用液。微孔滤膜器为不锈钢或塑料材质，中间可夹放滤膜。使用这种滤器的关键步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。加压方式有气压和液压(采用蠕动泵)两种方式。负压过滤一般用抽气装置使收集瓶内形成真空，借助大气压液体流过滤膜。正压过滤较负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生气泡等优点。,化学消毒法,利用化学消毒剂来消毒那些不能用物理消毒等方法进行消毒的物品和场地。消毒剂主要是75酒精、甲醛、环氧乙烷、氯已定、戊二醛、碘伏和磺酊、过氧乙酸、乳酸、煤酚皂溶液(来苏儿)等，最常见的是75酒精及1新洁尔灭。75酒精主要用于操作者的皮肤、操作台表面及无菌室内的壁面处理，且对其他灭菌剂(如戊二醛、碘伏、氯已定等)有增效或协同作用。1新洁尔灭则主要用于器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦拭消毒。甲醛是一种广谱灭菌剂，其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。,通常无菌室内的空气和物体表面灭菌就是利用甲醛水溶液或甲醛气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物的杀灭作用。环氧乙烷气体具有广泛的杀菌作用，不损害消毒物品且穿透力强，主要用于消毒塑料用品、不耐高热高压以及不能受潮湿的物品。氯已定又称洗必泰，化学名为1，6一双(正一对氯苯双胍)一己烷，是一种广谱杀菌剂，其毒性低、刺激性小、不产生耐药性，是目前广泛应用的消毒剂之一，主要用于皮肤及创面消毒。,戊二醛是一种广谱、高效灭菌剂