动物细胞融合和单克隆抗体

知识回顾 1 动物细胞融合过程 动物细胞A动物细胞B 诱导 融合 2个完整的杂交细胞AB 有丝分裂 膜融合 质融合 核融合 突破了有性杂交方法的局限 使远缘杂交成为可能 主要是应用杂交瘤技术制造单克隆抗体 2 意义 3 应用 三 动物细胞融合 方法 4 植物体细胞杂交和动物细胞融合比较 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶 果胶酶去壁 用胰蛋白酶使细胞分散 物理 化学方法 物理 化学 生物方法 获得部分或完整植株 主要用于制备单克隆抗体 考点疑难分析 克服远源杂交不亲和的障碍 突破有性杂交方法的局限 使远缘杂交成为可能 讨论归纳 高考仿真题练 1 2016 海口模拟 1 动物细胞诱导融合运用的原理是 该过程中区别于原生质体融合的方法是用 处理 细胞膜具有流动性 灭活病毒 2 科学工作者用绿色和红色荧光材料 分别标记人和鼠的细胞膜上的蛋白质 当两个标记细胞融合成一个细胞后 起初一半膜发出绿色荧光 另一半膜发出红色荧光 一段时间后 两种颜色的荧光点均匀分布 如图所示 请分析回答 该实验结果说明了细胞膜 这是因为 若在两个细胞融合成一个细胞后 将融合细胞置于0 条件下再保持40min 则融合细胞仍然是一半膜发绿色荧光 另一半膜发红色荧光 这说明 具有一定的流动性 构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质大都是可以运动的 膜的流动性受温度影响 在低温下分子的运动受抑制 1 单克隆抗体的概念 单个B细胞克隆产生的化学性质单一 特异性强的抗体 将单个B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞分泌的 四 单克隆抗体 1 单克隆抗体 2 制备原理 知识回顾 B BB 瘤瘤 瘤 未融合的B 瘤 一选 选择性培养基 只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 二选 选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点 既能产生特异性抗体 又能大量增殖 2 单克隆抗体制备过程 B淋巴细胞骨髓瘤细胞 诱导融合 B B细胞 B 瘤细胞 瘤 瘤细胞 选择培养基 杂交瘤细胞 B 瘤细胞 克隆化培养 抗体检测 产生所需抗体的杂交瘤细胞 体外培养 单克隆抗体 2 单克隆抗体制备过程图解 用箭头和文字写出概念图 知识自主构建 提纯 讨论归纳 共有几种细胞 1 为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合 小鼠骨髓瘤细胞可大量增殖 B淋巴细胞能产生抗体 2 骨髓瘤细胞是癌细胞吗 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞 具有转移能力的肿瘤细胞 称为癌细胞 所以说 瘤细胞不能等于癌细胞 感悟拓展 3 整个制备过程为何要经过两次筛选 第一次筛选得到杂交瘤细胞 多种 第二次需先在多孔培养板上 在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养 然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群 3 单克隆抗体的应用 1 作为诊断试剂 准确识别各种抗原物质 并与抗原特异性结合 2 用于 运载药物 制成 生物导弹 治疗疾病 主要用于癌症治疗 优点 准确 高效 简易 快速 单克隆抗体的优点 优点 疗效高 毒副作用小 特异性强 灵敏度高 能大量制备 2013年海南卷 31 15分 单纯疱疹病毒I型HSV I 可引起水泡性口唇炎 利用杂交瘤技术制备出抗SV 1的单克隆抗体可快速检测HSV 1 回答下列问题 1 在制备抗HSV I的单克隆抗体的过程中 先给小鼠注射一种纯化的HSV 1蛋白 一段时间后 若小鼠血清中抗 的抗体检测呈阳性 说明小鼠体内产生了 反应 再从小鼠的 中获取B淋巴细胞 将该B淋巴细胞与小鼠的 细胞融合 再经过筛选 检测 最终可获得所需的杂交瘤细胞 该细胞具有的特点是 HSV 1蛋白 体液免疫 脾脏 无限增值且产生专一抗体 骨髓瘤 真题感悟 2 若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体 可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的 中使其增殖 再从 中提取 纯化获得 3 通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV I蛋白 其原因是该抗体具有 和 等特性 腹腔 腹水 纯度高 特异性强 2014新课标 卷 第40题 15分 某研究者用抗原 A 分别免疫3只同种小鼠 X Y和Z 每只小鼠免疫5次 每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价 能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数 结果如下图所示 若要制备杂交瘤细胞 需取免疫后小鼠的B淋巴细胞 染色体数目40条 并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞 染色体数目60条 按一定比例加入试管中 再加入聚乙二醇诱导细胞融合 经筛选培养及抗体检测 得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞 回答下列问题 真题感悟 1 制备融合所需的B淋巴细胞时 所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上 则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的 达到要求后的X Y Z这3只免疫小鼠中 最适合用于制备B淋巴细胞的是 小鼠 理由是 4 Y 2 细胞融合完成后 融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外 可能还有 体系中出现多种类型细胞的原因是 3 杂交瘤细胞中有个细胞核 染色体数目最多是条 4 未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活 原因是 Y小鼠的血清抗体效价最高 骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 淋巴细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的且融合率达不到100 1 100 不能无限增殖 1 2016 河南名校测试 1 单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有 2 单克隆抗体的特点是 特异性强 灵敏度高 并可大量制备 动物细胞培养 动物细胞融合 高考仿真题练 1 若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞 则B细胞是取自小鼠体内的细胞 从小鼠体内提取分离该细胞之前 应给小鼠注射 类物质 2 d过程是一个 过程 该过程的进行常用 或 的诱导 3 假设仅考虑某两个细胞的融合 则可形成种类型的C细胞 因此需用 培养基筛选出D细胞用于培养 D细胞的名称是 其特点是 效应B 抗原 细胞融合 聚乙二醇灭活的病毒 选择性 3 既能无限增殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞 2 2015 甘肃模拟 根据图解回答问题 4 在培养时通过 分裂方式大量繁殖 D细胞体外培养需要注意的条件是 要求答5项 5 单克隆抗体在疾病的诊断 治疗和预防方面 与常规抗体相比 其特点是 特异性强 灵敏度高 有丝 无菌 无毒的环境 充足的营养 适宜的温度和pH 适宜的气体环境 两个过程 动物细胞融合过程 单克隆抗体制备过程 三个 一 一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒 一个新细胞 杂交瘤细胞 一个优势 单克隆抗体特异性强 灵敏度高的优势 课堂小结 重点 课后作业 三维设计P104知命题热点二 1 1 右图为某同学根据杂交瘤技术的方法 设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案 据图