肌钙蛋白和肌红蛋白测定试剂盒介绍.ppt

技术背景 心脑血管病现已成为我国人口死亡的主要原因 名列第一位 心血管疾病特别是心肌损伤的发病率逐年增加 因此早期进行诊断和积极的治疗 对挽救病人的生命有重要意义 技术背景 WHO1979年制订的AMI的诊断标准1 有剧烈而持久的胸痛史 2 明确的心电图改变 包括ST段抬高和异常的Q波出现 3 系列酶的水平的改变 早期浓度升高 随后恢复正常浓度 技术背景 随着医学科学研究的进展 心肌损伤的血液生化标志物已从早先的以酶活性为主的检测发展到目前的以蛋白质质量浓度为主的检测 包括多种标志物 AST LD及其同工酶以及 羟丁酸脱氢酶等以酶活性为主的检测项目在诊断心脏疾病时已逐渐少用以至不再应用 技术背景 25 的AMI病人发病早期没有典型的临床症状 约30 的AMI病人缺乏心电图 ECG 的特异改变 CK MB的敏感性和特异性也不尽如人意 心肌损伤理想的生化标志物 在心肌细胞中的浓度很高 而在其它组织中的浓度很低 特异性强在心肌损伤后能很快释放入血 敏感性高在多日内保持异常 窗口期长检测所需时间短 肌钙蛋白是迄今为止 基本符合上述标准的标志物 心肌损伤理想的生化标志物 国际临床化学联盟 IFCC 的心肌标志物标准化委员会 CSCM 和美国临床生化学院 NACB 建议 在临床工作中运用两类心肌损伤标志物 一是有胸痛发生后几小时即增高的早期标志物 二是发病后持续增高的具有高度专一性的确定标志物 早期标志物 心肌损伤后6h内血中就升高 肌红蛋白 Mb 优点出现早 2h 敏感性高 阴性有助于排除AMI 血中半衰期短 观察有无再梗死以及梗死有无扩展 是AMI溶栓中评价再灌注与否的较敏感准确的指标 缺点特异性不高 早期标志物 心肌损伤后6h内血中就升高 C反应蛋白优点早期即出现异常增高且 窗口期 较短 在心肌损伤的早期诊断和预后估计有较好的临床价值 超敏CRP对心梗有一定预报价值 缺点特异性不高 晚期标志物 发病后6 9h血中增高并持续数天 对心肌损伤的敏感性和特异性都较高 心肌肌钙蛋白 cTn 有cTnI和cTnT两种亚型 因cTn灵敏度高 特异性强 发病后持续时间长 是目前诊断心肌损伤较好的确定标志物 新修订MI的诊断标准 ESC和ACC于2000年联合发表文件 重新修订MI的诊断标准 最重要的是将检测到心肌损伤标志物 主要是cTn 的异常变化作为诊断MI急性发病的必要条件 新修订MI的诊断标准 心肌损伤标志物升高有剧烈而持久的胸痛史明确的心电图改变1 2or3即可诊断 胶乳增强免疫比浊法原理 使用特异抗体结合于胶乳颗粒表面 标本与胶乳试剂在缓冲液中混合 标本中的cTnI与胶乳颗粒表面的抗体结合 使相邻的胶乳颗粒彼此交联 在500 600nm附近测量溶液浊度的增加 其增加的程度与标本中的cTnI浓度相关 胶乳增强免疫比浊法原理 方法学特性 cTnI 该试剂灵敏度为0 3ng ml 线性范围为25ng ml 批内及批间精密度均小于10 以99 单侧界值1 7ng ml 敏感性86 特异性99 阳性结果预示值97 7 临床符合率96 线性范围 校准曲线 采用速率法多点校准 多参数曲线方程 如logit log 拟合 线性范围达25ng ml 校准曲线至少稳定30天 测试条件变化时应重新校准 以免试验结果出现偏差 线性范围 图1cTnI浓度与吸光度线性相关图 方法学特性 cTnI 精密度 方法学特性 cTnI 回收实验不含TnI的血清加入已知浓度的cTnI混合 n 5 方法学特性 cTnI 灵敏度用0 00ng ml校准品重复测定20次 计算结果如下 X 0 067SD 0 019X 2 58SD 0 1ng ml 方法学特性 cTnI 稳定性37 放置5天后 测定值变化 10 试剂有良好的稳定性 实测效期为两年 方法学特性 cTnI 抗凝剂及VC影响 方法学特性 cTnI 抗干扰容量 在以知浓度血清中 加入下列物质对cTnI的干扰 10 人血清白蛋白3000mg dl甘油三脂25mg dl 球蛋白5000mg dl严重溶血或黄疸可造成负干扰 应予避免 临床评价 预期值 149例健康成人血清标本经本法测定 95 单侧分布为1 1ng ml 99 单侧分布为1 7ng ml 此范围仅供参考 各试验室应确定自己的参考值及诊断标准 临床评价 不同分布下的诊断界值 不同诊断界值的临床诊断效率 50例确诊心梗病人和149例对照标本 ROC曲线 注意事项 标本处理用血清或血浆标本 肝素抗凝 在4小时内测定 标本于使用前离心 4000转 分 15分钟 2 8 贮存的标本应在24小时内测定 如标本存放超过24小时 应于 20 以下冻存 融化后必须离心 避免反复冻融 注意事项 标本避免溶血及黄疸 血清分离胶有明显负干扰 慎用抗凝剂 胶乳试剂避免冰冻 方法学特性 Myoglobin 试剂灵敏度为1 0ng ml 线性范围为500ng ml 批内及批间精密度小于5 6 95 临界值为57ng ml时 敏感性96 1 特异性93 0 阳性结果预示值94 6 临床符合率94 7 方法学特性 Myoglobin 校准曲线 方法学特性 Myoglobin 精密度 方法学特性 Myoglobin 灵敏度用0 00ng ml校准品重复测定20次 计算结果如下 X 0 020SD 0 007X 2 58SD 0 037ng ml 回收试验 Myoglobin 血清中加入已知浓度的纯化Mb 20次重复试验 计算结果如下 抗干扰容量 MYO 在以知浓度血清中 下列物质I的干扰 10 方法学特性 Myo 稳定性37 放置5天后 测定值变化 10 试剂有良好的稳定性 实测效期为两年 方法比较 校准曲线比较 两法相关性 临床评价 预期值 100例非相关人血清标本经本法测定 95 单侧分布为57ng ml 99 单侧分布为79ng ml 此范围仅供参考 各试验室应确定自己的参考值及诊断标准 临床评价 不同分布下的诊断界值 不同诊断界值的临床诊断效率 127例已确诊心梗病人和100例对照标本 ROC曲线 允许的生物学变异 肌红蛋白 5 6 CK MB质量 9 3 cTn 10 标准化问题 标准化问题 肌红蛋白 CK MB质量 cTn均尚未标准化 讨论 cTnI测定标准化问题结构稳定性 释放形式蛋白水解 磷酸化 氧化还原 抗原决定簇外周血中存在形式90