活血化瘀类方药思路

活血化瘀类方药的研究思路与方法,2010.12,传统中医理论对活血化瘀药功效的描述活血化瘀药是以疏通血脉、祛除瘀血为主要作用，临床用于治疗血瘀证的药物。活血化瘀药通过活血化瘀，产生止痛、调经、破血消癥、疗伤消肿、活血消痈等作用。其主治范围较广，如内科之胸、腹、头诸痛，而痛如针刺，痛处固定者；体内之癥瘕积聚；中风后半身不遂，肢体麻木；关节痹痛日久；血证之出血色紫，夹有血块；外伤科之跌扑损伤，瘀肿疼痛，痈肿疮疡等。凡一切瘀血阻滞之证，均可用之。,血瘀症涉及的主要病种,胸痹心痛症，与现代医学的冠心病、心绞痛相关；中风、半身不遂与脑梗塞、脑血管意外相关；腹内肿块，痛有定处，常属血份，癥瘕积聚与体内肿块相关；外伤科之跌扑损伤，瘀肿疼痛等。,血瘀症的表现：,血液流变学异常：血液有“浓、粘、凝、聚”倾向。微循环障碍：通常指微动脉与静脉间的微血管血液循环障碍。包括：微血流缓慢和淤滞；微血管内凝血；微血管变形；微血管缩窄和闭塞；微血管周围水肿、瘀血和出血。血流动力学异常：器官或组织的血流、血管阻力、血流循环障碍。,一、活血化瘀方药的研究思路,1.改善高黏滞血症 高黏滞血症（blood hypervisicocity syndrome, BHS）以血液流变学异常和微循环障碍为特征。表现为血沉和红细胞压积提高，红细胞变形能力下降，纤维蛋白原含量增加，血小板黏附性、聚集性、血栓形成能力增高等。高黏滞血症影响对组织器官的正常血液灌注，是机体血瘀的的病理表现，也是许多疾病发生、发展过程中的重要环节。高血脂患者往往具有高黏滞血症。,与高黏滞血症相关的疾病,冠心病、缺血性脑血管病、糖尿病、肾病综合征、慢性肺源性心脏病等。活血化瘀药可不同程度地改善血液流变学异常和微循环障碍，从而减轻高黏滞血症，阻断与其相关疾病的发生或发展。,2改善组织器官缺血,组织器官缺血严重者可致组织梗死。心肌缺血缺血性脑卒中。活血化瘀药改善组织器官缺血的途径：扩张组织动脉血管、改善血液流变性、改善微循环、改善血管内皮细胞功能、清除氧自由基，减轻组织过氧化损伤等。,3对慢性器官功能减退性疾病的影响,血液循环不良可引起组织功能障碍。改善对组织器官血液循环，是改善其功能障碍的有效手段之一。,慢性肾衰患者常伴有血浆黏度及纤维蛋白原浓度升高。血浆黏度与尿素氮、血肌酐呈正相关。血浆黏度的提高影响血液的流动性、导致血流缓慢、肾脏血流减少。慢性肾衰由于尿毒症对红细胞膜的损害，使红细胞的变形能力降低，聚集性增强，难以通过微血管造成微循环障碍。,中医认为“老年多瘀”。老年往往存在动脉粥样硬化等退行性病变。凝血因子、vWF和纤维蛋白原均随年龄增加而有不同程度增高，使血液黏度增加。（vWF：冯维勒布兰德因子，主要生理功能是促进血小板在内皮下黏附及保护血浆因子不被降解。）,4对血管痉挛性疾病的影响,偏头痛 与脑血管痉挛有关，可能继发于中枢神经系统功能紊乱。有人发现偏头痛发作期患者血液黏度和血小板聚集率均增加。使用活血化瘀中药有时可起到缓解作用。如川芎即为治疗偏头痛的常用药物之一。雷诺氏病 患者表现为肢端微循环障碍。有报道，在活血化瘀治法基础上加用其他药物能使患者气血调畅，症状因此可得缓解。,5对慢性炎症的影响,上呼吸道慢性炎症、慢性胃炎、慢性阑尾炎、盆腔炎等。这些疾病的始发因素虽然不一定是血液循环障碍，而多半是由于外邪反复感染所致。但由于致病过程较长，机体正气多有衰减，经脉气血瘀阻为常见，甚至炎症逐渐发展可伴有局部水肿、充血甚或可形成黏连、包块（如盆腔炎）。以活血化瘀为主，采用综合治疗，以促进组织血流通畅，改善组织营养，提高新陈代谢，降低毛细血管通透性，有利于清除余邪，即促进炎症感染过程的终止。,许多活血化瘀药具有抑制缺血组织或炎症组织细胞间黏附分子表达上调、降低白细胞黏附率、抑制白细胞活化，抗氧自由基等作用，有利于改善炎症对组织器官的损害。,6对组织纤维化的影响,组织纤维化往往是慢性炎症反应的结果，如肺纤维化、肝纤维化、动脉粥样硬化、烧伤性角膜炎等。血管内皮细胞和炎症细胞的激活可分泌大量的氧自由基以及ET-1、TNF-、IL-1、IL-1、IL-6、TGF-等，并引起病灶内结缔组织细胞增殖，、型胶原mRNA及蛋白表达水平增高。,活血化瘀方药的研究思路概括,1. 改善高黏滞血症2改善组织器官缺血3对慢性器官功能减退性疾病的影响4对血管痉挛性疾病的影响5对慢性炎症的影响6对组织纤维化的影响,二、活血化瘀的常用观察指标,1血液流变性测定 实验观察药物能否改善血瘀模型动物血液流变学异常。 (1) 红细胞压积测定：一定体积的血液中红细胞体积除以血液的体积称为红细胞压积或比积。红细胞压积增高，表示血液浓度增高。测定主要方法有文氏管压积管法。,通脉活血灵胶囊对实验性高粘血症家兔红细胞压积的影响（xs）,与正常对照组比：* P 0.001；与高粘模型组比： P0.05； P纤维蛋白原甘油三脂脂蛋白IgG，IgA白蛋白。测定血浆、血清的黏度，分析血浆、血清中的各种蛋白成分变化，可分析、判断患者血黏度异常的原因和药物影响血液黏度的环节。,绞股蓝总皂甙对血液流变学的影响（xs）,注：模型组高分子右旋糖苷0.5g/kg；与模型组比 * p0.001，*p0.01， *p0.05,常用血黏度测定方法：毛细管测定法和旋转测定法两种。目前采用后种方法较多，已有专门的仪器。,毛细管测定法,原理：一定量的血液（Q）在一定压力差下（P1-P2）,沿着一定长度(L)和一定内径(R)的毛细管流动时，其粘度()与流量Q成反比，而与流出时间（t）成正比。 Q=,旋转测定法：,原理：一个能以不同转速主动旋转的物体，通过对具有粘度液体的作用，能带动与其具有同轴心的另一个物体的被动转动。只要知道一定几何形状主动旋转物体的旋转速率，以及被动旋转物体所产生的扭矩大小，就可以计算出切变速率数值，及切变应力和切变速率的关系曲线，并最后从中可求出欲测试液体的粘度值。即粘度等于切变应力和切变速率的比值。=,(3) 血浆纤维蛋白原含量测定：,用不同稀释度血浆测定其凝血酶时间，可反映纤维蛋白原含量。纤维蛋白原增加，血液粘度提高，血液凝固性增加，凝血加快。,(4) 红细胞电泳时间：,原理 红细胞的聚集和分散同其表面所带的负电荷有关。提高红细胞表面的负电荷密度，红细胞之间的同种负电荷静电排斥力增大，红细胞处于分散状态，并导致血液粘度下降。用细胞电泳仪测定红细胞电泳速度，可反映血细胞的聚集性。,测试方法,人或动物抗凝血液0.5 1.0ml,离心(150r/min,10min)分离出红细胞后，再配成1 2%的红细胞悬液（一般多用自身血浆或血清配制），将方形玻璃管的一端浸入欲测试的红细胞悬浮液中，借助毛细现象，红细胞悬液迅速灌满整个管腔。之后将已灌满红细胞悬液的方形毛细管放在一支架上，支架固定在显微镜载物台上，方形玻璃管的两端与电极相连，施以一定强度的电压。红细胞可以在玻璃管内移动，移动的距离可通过显微镜观察。,红细胞电泳技术一般要求测定20个细胞移动一定距离所需时间的平均值。也可用电泳率表示，即细胞在单位电场强度（V.cm-1）单位时间内移动的距离（m.S-1）。电泳率单位：m.S-1/v.cm-1,资料显示：与健康人相比，缺血性中风、冠心病、心肌梗死、系统红斑狼疮病人的平均红细胞的电泳率显著下降。 （正常：1.16+0.06 心梗：1.07+0.07）（单位m.s-1）。电泳速度减慢，表明细胞膜上负电荷密度降低，细胞排斥力减弱，而易于聚集。,(5) 红细胞(RBC)变形能力测定：,红细胞的变形能力反应红细胞的柔顺性和硬度。在一定压力推动下，红细胞变形能力越强，通过口径细小的毛细血管速度越快；反之，则不易通过，从而影响微循环。红细胞变形能力愈强，全血粘度愈低。以一定数量RBC通过筛孔滤膜所需时间或速度可反映RBC变形能力，通过的速度越快，变形能力愈好。核孔膜设定的孔径为4 5m，厚度为10m，孔的密度为4x105/cm2,（6）血小板聚集功测定：比浊法,原理：血小板悬浮在血浆中时，具有一定的不透明度，即浊度。浊度与血小板数成正比。当一束光线投射到富血小板血浆（PRP）时，透过光的减弱程度与血浆中的血小板数成比例。在不断搅拌的情况下，向富血小板血浆加入可以引起血小板聚集的物质如：ADP、胶原，花生四烯酸等时，血小板发生聚集，分散的血小板数减少，透光率增加，透过光的变化可以通过光电元件转变为电量，从而成为可以定量地和动态地显示血小板的聚集程度和速度变化的客观指标。,测试方法 ：取人或动物的血3 5ml 用3.8%枸橼酸钠溶液抗凝（血液与抗凝液=9：1），1000r/min离心10 min，取上层液即得富血小板血浆（PRP），将下层剩余的血浆继续以3000r/min 离心10min 20min取上层清液得贫血小板血(PPP)。取一定量经370C恒温的PRP溶液加入测量杯内，再放入磁性小棒一枚，因PRP含有大量血小板，呈浑浊状。打开光源，将通过PPP测量杯的透光度定为100%，再将通过PRP测量杯的透光度调节定为0，然后，在1000r/min 的机械搅拌下，用微量注射器向PRP中加入一定量的致聚剂（如：AA200mol/L, 胶原：40 g/L, ADP: 4mol/L）血小板发生聚集，与此同时记录仪将血小板的聚集曲线绘制出来。,体外实验：在PRP测量杯中先加入一定量的药液和对照液，恒温 5min 10min，加入同样量的致聚剂：具有抑制血小板板聚集作用的药物，在加入致聚剂后血小板聚集程度减小。体内实验 ：先给动物用药或对照液，间隔一段时间后取血制备PRP或PPP，此时要注意从给药组及对照组动物分别制备的PRP中血小板浓度要基本一致，如不一致，则需用PPP调整至基本一致，否则会影响实验结果的正确性。（血小板参考浓度：4x108/ml）血液在抽取出体外后，实验操作过程应在2h内完成。,(7)血栓形成测定：,有体外血栓和体内血栓形成测定法。以血栓形成时间、血栓长度、血栓重量为指标，反映血凝状态，观察药物抗血栓形成作用。,大鼠32只雌雄各半，体重(24.41.3)g，分为4组。分别ig藁本、华法令或自来水，1次d，连续3d，末次给药后45min在乌拉坦麻醉下，切开颈部皮肤，分离左颈总动脉将BT872型实验性体内血栓形成测定仪的刺激电极和温控探头钩挂于颈总动脉用2.0mA直流电刺激30s，温度传感器监测血管表面温度变化、当动脉内血栓形成堵塞血流，引起血管远端温度突降时、仪器报警，并自动记录时间。,ig藁本75%醇提物对大鼠实验性体内血栓形成的影响,N = 8 ，*p0.01,YLS-14B小动物血栓生成仪,直流电刺激，损毁颈动脉血管的内皮细胞，从而激活凝血因子，启动凝血机制。 红外检测血栓开始形成的时间，血栓阻塞血管的百分比的变化以及全部栓死的时间 。,2微循环功能测定,大多采用活体观察法，如人体手指甲襞、眼球结膜、舌尖微循环观察;家兔眼球结膜微循环，大鼠或家兔肠系膜、肝脏、肾脏、肺、软脑膜等脏器微循环，小鼠耳廓微循环观察等。通常在冷光源下观察。常见观察指标有:,（1）微血管形态,包括外形、管径、毛细血管网交点数。病理情况下，微血管会出现痉挛、淤张、膨大和扭曲等畸形表现，同时管径缩小，单位面积毛细血管网交点数减少。,用方格型目镜测微器在观察部位定出一定大小的正方格，观察与其4边相交的毛细血管数。,（2）微血流状态：,包括微血管中的血色、流态、流速。在微循环中，血色反映含氧程度。红细胞流态最易观察，并将它简称为流态。如应用先进的微循环观察仪器或荧光微血管造影技术，则在微动脉和微静脉中能看清血细胞轴流和血浆边流的变化。红细胞的流态分为四级：在正常情况下，呈0级或0I级。在微循环障碍时，流态出现IIII级，并可见白细胞贴壁翻滚、白色微小血栓。流速主要测定的是红细胞流速。,毛细血管,滴注丹参、生理盐水对微动脉口径、流速、流量的影响( s),滴药后与滴NA后10min自身比较， P0.05， P0.01；滴药后与滴生理盐水同一时间比较，* P0.05。,田鼠，先于颊囊局部滴注去甲肾上腺素(NA)50l(5g100l)，使微血管收缩，血流减慢。在滴NA前及后观察微循环变化。然后，于同一部位分别滴注丹参或生理盐水各50l。在滴药后观察微循环变化。,（3）微血管周围变化：,包括有无渗出、有无出血。微血管通透性正常时，周围无明显渗出现象；在病理情况下，微血管壁通透性可升高，导致血管内液体渗漏到组织间隙，从而使微血管轮廓变得模糊。如果微血管壁完整性受到破坏，损伤较严重可引起出血，在微血管周围可直接见到红细胞。,荧光微血管造影(microangiography)技术,不仅能观察到普通显微术能看到的微循环表现，如微血管的形态、口径和长度，血细胞的流态和流速等，而且能观察到普通显微术不易或不能看到的现象，如血浆流态、微血管通透性、组织液流动和淋巴循环等。此外，荧光微血管造影还可间接判断局部组织或器官的血液灌流量。,3器官的血流量测定,（1）电磁流量计测定法：器官的血流量测定目前最常用的是电磁流量计。通常，先要分离向器官供血的动脉，如向心肌供血的冠状动脉、向脑组织供血的颈总动脉（颈内动脉）或椎动脉等。选择大小匹配的电磁流量计探头，将其安在血管上。经动脉流入器官的血液流量即会被记录下来。,（2）氢清除技术测定法：,利用无活性扩散性的H2，用呼吸或其他方法，将H2（如在动脉内注入含H2溶液）输入体内。基于血液的流动性，使体内各组织的H2达一定浓度的饱和状态，然后停止输入H2，组织中的H2逐渐减少。用探测电极连续记录、分析此廓清过程，可推算所在组织的血流量。用氢清除率法测定器官血流量的优点是不需分离动脉，测定部位的组织损害轻微，能用数量表示器管血流量在各层组织的分布。,芸香苷口服对大鼠应激后胃黏膜血流量的影响,与正常组比较， *P0.05, *P0.01。,大鼠，分别灌胃给予芸香苷5mg/kg及20mg/kg，对照组灌胃给予同体积生理盐水，连续给药5日，每日2次，最后1次给药后1h，放入4oC冰箱内应激，3h后从冰箱取出，测定胃窦和胃体黏膜血流量。应激前，动物禁食24h。,（3）激光多普勒血流量,有些脏器的血流量包括微循环血流量可采用激光多普勒血流量仪测定。如肝表面血流量测定，用激光多普勒仪的氦氖光束透照到肝表面，从不动组织和活动的红细胞反射回来形成的参考光束和多普勒转换光束，通过将两者频率的改变对比转换，可测出肝表面微循环血流量。,4抗动脉粥样硬化作用观察,动脉粥样硬化（AS）模型的制备：（1）高脂膳食喂养法：常以高脂膳食喂养家兔、鹌鹑、鸡而形成AS。主动脉与冠状动脉的病变一般与血浆胆固醇（Ch）浓度呈正相关，采用高脂膳食喂养动物或同时加入胆酸盐、丙基硫氧嘧啶、甲亢平、烟碱等以促进外源性脂质吸收，使其超过机体需要和清除能力，造成动物脂质代谢紊乱。,（2）动脉内皮损伤：,又分化学性损伤法：家兔或大鼠灌服维生素D，结合高脂膳食喂养，一般21日后可快速诱发AS。机械损伤法：家兔用充气导管进行主动脉内皮剥脱，结合高脂膳食喂养。,血管成形术,支架,免疫性损伤法：,机体对抗原物质，如生物性抗原、疫苗、抗生素及组织自身抗原的免疫反应形成免疫复合物在血管壁上沉积，引起补体系统的激活，继而引起动脉内弹力膜的增殖性变化，在此病变的基础上，如果发生脂质沉积，即可构成比较典型的AS病变。方法：家兔注射马血清每次10ml/kg，或家兔静脉注射牛血清白蛋白每次250mg/kg，共4次，每次间隔17日，结合高脂膳食，可形成AS病变。,防治AS疗效的观察指标,通常涉及形态学检查和脂质代谢水平两方面。形态学检查：主动脉粥样斑块病变分级程度，或用图像分析仪记录斑块面积及所占动脉壁的百分率；冠状动脉或肠系膜动脉等的病变分级可用光镜和电镜检测病变的形态学特点和定量观测血管内膜及中膜厚度的比值、内膜泡沫细胞数及中膜完整平滑肌层数等。,形态学检查 分级参考,0级 内膜表面光滑，无斑块；0.5级内膜有广泛奶油色或乳白色变化，但无凸出于表面的斑块；1级 有明显的奶油色凸起斑块，面积小于3mm2；2级 斑块面积大于3mm2；3级 有许多大小不等的斑块，有的融合，大斑块面积超过3mm2；4级 动脉内膜表面几乎全为融合斑块覆盖。 百分率法：用图像分析仪记录斑块面积及所占动脉壁的百分率。,冠状动脉内膜脂质浸润厚度,新西兰兔一次性静注牛血清白蛋白250mg/kg，加每天喂高胆固醇饲料，造模60日后均停止高脂饲料，分别喂含1号方、2号方饲料，空白组喂普通饲料，90日处死，取主动脉和冠状动脉染色后进行病变程度分级 与空白组比较, P 0.05（下同）。,动脉粥样斑,脂质代谢测定：,病变组织或血清中脂质（TC、TG）；脂蛋白（HDL、LDL、VLDL）、载脂蛋白（apoA、apoB）含量。（免疫透射比浊法测定apoA，apoB试剂盒。）,ApoA与ApoB,载脂蛋白A（ApoA）:目前发现三种亚组分，即ApoA I、ApoA II和ApoA IV。ApoA I是ApoA族最多的一种组份，ApoA族主要存在于HDL 中，研究表明它与冠心病呈负相关 ;ApoB是LDL（低密度脂蛋白）的主要蛋白质，高ApoB是冠心病的危险因素。理想的降脂治疗在降低血清胆固醇(TC)和血清甘油三酯(TG)的同时，也应降低ApoB，升高ApoA、及ApoA/ApoB比值。,保心丸对实验性AS家兔的作用 (xs