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孵育法检测系统性红斑狼疮细胞【关键词】 孵育 在抗dsDNA的ELISA检测和金标法检测出现以前，孵育法检测系统性红斑狼疮细胞一直是实验室最重要的手段。ELISA检测和金标法检测出现以后，孵育法检测系统性红斑狼疮细胞仍作为重要的试验检测手段。尤其在基层医院，病例较少，ELISA检测和金标法检测试剂盒使用周期过长，致使结果易出现假阴性，同时造成试剂浪费。所以孵育法检测系统性红斑狼疮细胞仍然是基层医院不可替代的实验手段。但孵育法检测系统性红斑狼疮细胞，普遍反映检出率偏低，甚至几年都无法检出一例阳性病例。为什么会这样?怎样提高阳性检出率？孵育法检测系统性红斑狼疮细胞检出率偏低,是因为在检测中几个重要细节没有注意到的缘故。一是用药后检测。治疗系统性红斑狼疮病的药物多为免疫抑制药物，抑制红斑狼疮细胞的形成。二是盛血器皿不洁净。临床上多用试管或青霉素小瓶（加入玻璃珠或玻璃碎片）盛血，残存的药物和化学试剂对实验也有一定的影响。三是受损的白细胞数量不足。临床上最常用竹签捣碎缠绕法，该法操作简便易行，但由于竹签撞击形成受损白细胞太少，故孵育形成的均匀体就少，白细胞吞噬形成红斑狼疮细胞的机会就更少。四是具有吞噬功能的细胞数太少。应用竹签法捣碎缠绕纤维蛋白防凝时，同时有大量的白细胞被纤维蛋白网络去，减少了白细胞绝对数。而白细胞是形成红斑狼疮细胞的最主要的吞噬细胞。五是吸取白细胞层时吸管插入过深。孵育结束时，需离心吸取白细胞层推片染色镜检，如果吸管插入过深，进入红细胞层，均匀体和狼疮细胞则明显减少，降低检出率。提高红斑狼疮细胞阳性检出率须从以下几方面着手：一是首先应是用药前检测。二是孵育所用盛血器皿必须洁净。振摇所需玻璃珠（或玻璃碎片） 和盛血器皿须用蒸馏水涮洗两遍并晾干，以清除残留药品或化学试剂对实验的干扰。三是选择理想的制作方法。竹签捣碎缠绕法，在应用竹签法缠绕纤维蛋白防凝时，同时有大量的白细胞被纤维蛋白网络去，另外捣碎法所形成的受损白细胞数也较少，形成的均匀体少，狼疮细胞少，故检出率较低应淘汰不用。应用白血病细胞制片检出率较高，但由于取材受限临床较少应用。玻璃珠防凝或玻璃碎片防凝。该法有一个最重要的环节必须用力振摇并延迟至足够的时间，因为如果不能用力振摇并保持足够时间，则会出现纤维蛋白凝固，网去大部分白细胞，受损的白细胞则会更少，所以形成的均匀体和红斑狼疮细胞就少之又少。通过多年的临床实践，我们发现用力振摇20 min最好，阳性病人血样本孵育后所形成的均匀体非常多，最容易形成红斑狼疮细胞，检出率非常高。我曾在几年的临床实践中检出过50余例阳性标本，其中初诊未用药病人阳性符合率高达94%。应用金标法作对照，符合率100%。四是准确吸取白细胞。红斑狼疮细胞形成的三个基本条件：狼疮因子，即抗核抗体；受损的白细胞；具有吞噬功能白细胞。作为一个系统性红斑狼疮病人，抗核抗体及具有吞噬功能的粒细胞和单核细胞都是自然存在的，只有受损的白细胞是通过人为的方式获得的
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