检测器高效液相色谱仪的维护.doc

检测器高效液相色谱仪的维护1HPLC的日常操作条件：温度：1030；相对湿度80；最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。2泵的保养：1)使用流动相尽量要清洁；2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗；3)流动相交换时要防止沉淀；4)避免泵内堵塞或有气泡;3进样器的保养：1)每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；4柱的保养：1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；2)当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；3)要注意流动相的脱气；4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相；5)进样样品要提纯；6)严格控制进样量；7)每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；5 UV)的保养：1)紫外灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。2)样品池要保养。高效液相色谱日常简易保养及维护1、流动相的抽作要求：高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；流动相脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法）2、吸滤头：特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换。3、单向阀：如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗！4、泵头：泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修（如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等）5、过滤器：当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染， 拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。6、排液阀：此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。7、手动进样器：平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗；如出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般须申请维修或更换配件。8、流通池：在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗（可根据说明书进行操作或申请维修）。9、工作站：出现死机可重起计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。 泵压不稳1、泵头有气泡流动相脱气/大流量冲洗泵/用注射器抽取流动动相2、单向阀故障清洗若上述操作仍不能解决，可用异丙醇冲洗流动（无色谱柱冲洗，由手动进样器直接进检测器），流量为3-4ml/min,冲洗50分钟左右，然后重新安装色谱柱，更换流动相平衡，如此再不能解决泵压波动故障，可申请更换配件。色谱的保养：漏液处理：流路堵塞问题：缓冲盐的使用：流动相含有盐分时，做完实验后一定要进行流路冲洗；首先用水冲洗，打开排液阀用PURG键转换出原有含盐的流动相，然后关闭排液阀打开泵冲洗全部流路45分钟以上，如此更换流动相为水和甲醇混合液冲洗全部流路30分钟（此步骤一般可省去，根据实验而论），最后更换纯甲醇冲洗全部流路45分钟以上。泵头冲洗；用备件中的针头和针管分别用蒸馏水和纯甲醇冲洗3-5ml。如流动相不含盐，可对机器定期进行简单的冲洗维护，根据实验多少而定。手动进样器冲洗； 同样用备件中的针管和专用冲洗针头对手动进样器的装载状态和进样状态分别进行冲洗3-4ml的蒸馏水，然后再冲洗3-4ml的纯甲醇。确保每次做完实验，所有流路中充满纯甲醇！ 色谱的保养：C18柱绝对不能进蛋白样品、血样，生物样品。要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。长时间不用仪器，应该将柱子取上用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相（如甲醇）保存，因为纯水易长霉。流路堵塞问题堵塞导致压力太大，按预柱混合器中的过滤器管路过滤器单向阀检查，并清洗。清洗方法：以民丙醇作溶剂冲洗放在异丙醇中超声波清洗用10%稀硝酸清洗如何选择保护柱？怎样选择保护柱，但又不影响分离分析？通常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁，对于大部分分析工作者来说，一只1cm长的保护柱便能提供充分的保护作用。但是，如果样品非常不清洁，或工作中发现经常要更换1cm的保护柱，那么就应该选用2cm或3cm的保护柱，保护柱越长自然所装填的色谱填料就越多，则其保护性能越好，当然随着保护柱长度的增加，样品的保留时间也相应增加，一般来说，保护柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。保护柱的填料装填方式也很重要，目前有薄膜装填法的保护柱，使用过程简单方便，而且可以在实验室中进行干装。但是，其最大的缺点是不经济，特别是针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。另外，薄膜装填法的保护柱所装填的色谱填料有限，只能提供很有限的保护作用；不过也因为所装填的色谱填料较少，保护柱的长度也较短，所以对分析样品的保留时间的影响也很小。另一种保护柱结构其实质是缩短了色谱分析柱，设计方式上有直连式/手紧式或整体式。整体式设计是由色谱柱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便的使用，但不能被修改。直连式结构设计可以在任何时候由色谱工作者来安装连接，可以与任何品牌的色谱柱连接使用，而且可以根据不同的样品选择合适的保护柱长度。手紧式保护柱从结构上讲是与直连式保护柱一样，只是在连接时不用借助扳手等工具，直接用手上紧即可。另外从保护柱结构的角度看，保护柱结构又分为是否可以更换保护柱柱芯，现在大多数的保护柱均可以更换柱芯，可以降低保护柱的使用成本。大多数人是根据色谱分析柱的填料来选择保护柱的填料，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。但是，根据实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全匹配。对于选择保护柱的原则是：在满足分离分析要求的前提条件下，尽可能的选择较短的保护柱，尽可能选择对分离样品小一些保留性的填料。HPLC故障及排除方法（一) 保留时间变化1.柱温变化：柱恒温；2.等度与梯度间未能充分平衡：至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够：用25mmol/L的缓冲液4.柱污染：每天冲洗柱5.柱内条件变化：稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命：采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加：检查泵,重新设定流速2.样品超载：降低样品量3.键合相流失：流动相PH值保持在37.5检查柱的方向4.流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加：柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降：管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化：用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失：同前(二)34.流动相组成变化：同前(二)45.温度降低：同前(二)5(四) 出现肩峰或分叉1.样品体积过大：用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强：采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏：更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰：每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物：处理样品3.柱未平衡：重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)：每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相)：通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰)：流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声)：清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声：更换氘灯4.电干扰(偶然噪声)：采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡：流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载：降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰：清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用：加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4：同前(四)45.同前(四)3：同前(四)36.死体积或柱外体积过大：连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降：用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大：同(四)12.在进样阀中造成峰扩展：进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢：设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大：设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高：增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大：用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长：等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大：将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载：进小浓度小体积样品维修经验与原则1. 亲自重复故障（如果可以重复的话），不轻信用户或第三者的口述或转述。仔细观察，不轻信用户的口述，尤其是第三者的转述。有的操作者为了推脱自己的责任，会说仪器自己突然，自己什么也没动等等，这些都是可以理解的，工程师要会妥善处理。2. 先外部，后内部。不要动不动就打开机壳，没有初步的判断和排除就喜欢铺开摊子绝不是老手的做法。 指望打开机壳看哪里有断线或明显故障之处，纯粹是在碰运气，即使好运也不可能每次都这样。约有50%故障是由外部环境或操作、清洁等造成的。如是否关机时间长了？昼夜温差是否很大？仪器放置的位置是否离电梯间很近? 仪器附近还有什么仪器在使用？计算机设置是否正确？等等。3. 先电源，后主机；先附件，后主机。应先检查电源是否稳定、负载是否过重、地线是否良好、电极等附件是否良好和正常、各接口是否正确等。4. 充分利用仪器面板上各种按键、显示屏幕和操作或维修程序等，作些排除，这需要极其熟悉结构。（重要步骤）5. 了解用户的操作习惯、操作人员结构和水平，科室经济情况等也会对维修有很大帮助。如可推断清洁保养得如何，是否有欲更新的想法（否则无论怎么修都不会说好）等。如笔者碰到一台血球计数仪，前任几个工程师无数次维修，持续二年，还换过新机器，但不到半年又重复出现故障，麻烦不断。我接手后有一次接报修，赶到时屏幕暗的，问医生是这台吗？医生回答是的，且上前按电源开关，按后无反应，就又按一下，机器重启了。原来仪器有屏幕保护功能，该科室无专人保管使用，使用者用好就走，后一使用者一看屏幕暗的，就开开关。每天数百次开关电源，怎有不坏之理？修好后，我写了一个条子贴在仪器前，写明若发现屏幕暗，先随意按一下任何键，不亮再开电源开关。从此就再也没这么麻烦了。6. 不轻易更换原来仪器上的元器件和板子、管道等，因为有些元器件与板子、软件数据相关。更不能*不停地换板子和部件来缩小故障源，否则招一民工教教即会（目前此类维修者最多，既可收费又简单）。7.必要时仪器或工程师要承担责任，背“黑锅”。若责任在科室或使用者，以后更难打交道了。出于各种目的，也会出现有人故意设置故障。最好解铃还须系铃人！否则很花时间 。 修好一台仪器不容易，尤其是老仪器；搞坏一台仪器可是太容易了，不需要什么知识。色谱柱和色谱系统的故障检修HPLCColumnandSystemTroubleshooting1.HPLC Column and System Troubleshooting 色谱柱和色谱系统的故障检修What Every HPLC User Should Know每个HPLC使用者应该知道什么： 2.HPLC Components HPLC 的组成 Pump 泵 Injector/Autosampler 进样器/自动进样器 Column 色谱柱 Detector 检测器 Data System/Integrator 数据系统/积分仪表All of these components can have problems and require troubleshooting. 所有这些部件可能出现故障而需要检修。3.Categories of Column Problems 色谱柱问题的类型 A. Pressure 压力 B. Peak shape 峰形 C. Retention 保留时间4.Pressure Issues压力问题 Column Observations Potential Problems色谱柱观测 潜在的问题 High pressure Plugged frit 压力高 堵塞滤头 Column contamination 色谱柱污染 Piugged packing 堵塞填料5.Determining the Cause and Correcting High Back Pressure 查出原因 纠正压力Check pressure with/without column - many pressure problems are due to blockages in the system or guard有无柱子时检查压力 许多压力问题是由于系统或保护柱的阻塞If Column Pressure is high 如果柱压高:Wash column - Eliminate column contamination and 冲洗柱子 plugged packing 排除柱污染和填料堵塞 - high molecular weight/adsorbed compounds 高分子量被吸附化合物 - precipitate from sample or buffer 样品或缓冲液中的沉淀物Back flush column - Clear plugged frit 反冲柱子清洁阻塞的滤头Change frit - Clear plugged frit 更换滤头6.Column Cleaning 柱子清洗Flush with stronger solvents than your mobile phase用比你的流动相更强的溶剂冲洗 Reversed-Phase Solvent Choices in Order of Increasing Strength 为了增加强度选择反相溶剂Use at least 25 ml of each solvent for analytical columns 对于分析柱每种溶剂至少用25 ml 冲洗Mobile phase without buffer salts 没有缓冲盐的流动相100% Methanol 甲醇100% Acetonitrile 乙腈75% Acetonitrile :25% Isopropanol 75乙腈 ： 25异丙醇100% Isopropanol 异丙醇l100% Methylene Chloride 二氯甲烷l100% Hexane 已烷 When using either Hexane or Methylene Chloride the column must be flushed with lIsopropanol before returning to your resvered-phase mobile phase.当用已烷蔌二氯甲烷柱子时,必须先用异丙醇冲洗,然后再用你的反相流动相7.Column Cleaning柱子清洗Normal Phase Solvent Choices in Order of Increasing Strength为了增加强度选用正相溶剂Use at least 50 ml of each solvent 每种溶剂至少用50 ml50% Methanol : 50% Chloroform 50% 甲醇 : 50% 氯仿100% Ethyl Acetate 乙酸乙酯8.How to Change a Frit 怎样更换滤头Column Inlet Frit 柱进口滤头Column Body 柱身Compression Ferrule 压缩金属套圈Wear gloves 戴手套Do not allow bed to dry 不要让底座干燥Do not touch the column-body heat will extrude packing 不要使柱身受热,否则填料会喷出Do not over tighten 不要旋得太紧Female End Fitting 旋好尾端螺母Male End Fitting 旋好尾端螺头9.Preventing Back Pressure Problems压力问题的预防Use column protection 柱保护 - Guard columns 保护柱/预柱 - In-line filters 在线过滤器 Sample Preparation 样品预处理Appropriate column flushing 适当的柱冲洗Filter buffered mobile phase 过滤缓冲流动相10.Preventing Back Pressure Problems:In-Line Devices 压力问题的预防:在线装置Mobile Phase Pre-Column Injector Filter GuardFrom Pump 预柱 进样器 滤头 Column从泵来的流动相 保护柱 Analytical ColumnFilter and Guard Column Act on Sample 分析柱 滤头和保护柱作用于样品 Pre-Column Acts on Mobile Phase 预柱作用于流动相 To Detector 到检测器Preventing Back Pressure Problems: Sample Preparation11.压力问题的预防:样品制备Solvent/Chemical Environment 溶剂/化学环境Particulate/Aggregate Remove 微粒/凝聚物的除去Filter samples 过滤样品Centrifugation 离心分离Solid Phase Extraction(S.P.E.) 固相萃取Cartridges or Plates 薄膜或薄层板Disks or Membranes 圆盘或生物膜Peak Shape Issues 12.峰形问题Split peaks 裂峰Peak tailing 峰拖尾Broad peaks 宽峰Poor efficiency 低柱效Many peak shape issues also combinations-I.e. Broad and tailing or tailing with increased retention许多峰形问题是结合在一起的-例如:展宽和拖尾或拖尾和保留时间增加13.Split Peaks 裂峰Can be caused by: 可能的原因:Column contamination 柱污染Partially plugged frit 部分阻塞滤片Column void 柱头塌陷Injection solvent effects 溶剂效应14.Split Peaks 裂峰Column Contamination 柱污染Column: StableBond SB-C8, 4.6 250mm, 5mMobile Phase:60%25mM Na2HPO4,pH3.0 : 40%MeOHFlow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35CDetection: UV 254 nmSample: Filtered OTC Cold Medication: 1. Pseudoephedrine 2. APAP 3. Unknown 4. ChlorpheniramineInjection 1 峰3 峰形较好Injection 30 峰3 裂峰Injection 1 After Column Wash with 100% CAN经100%乙腈冲洗后 峰3 峰形极好15.Split Peaks 裂峰Injection Solvent Effects 溶剂化效应Column: StableBond SB-C8, 4.6 250mm, 5mMobile Phase: 82%H2O : 18%ACNInjection Volume: 30 L Sample: 1. Caffeine 咖啡因 2. Salicylamide 水杨酰胺A. Injection Solvent B. Injection Solvent 100% Acetonitrile Mobile Phase 峰形宽拖尾 峰形尖锐对称样品溶剂尽可能与流动相匹配 16.Determining the Cause of Split Peaks 裂峰原因的确定1. Complex sample matrix or many samples analyzed- likely column contamination or partially plugged frit复杂样品的基质或分析许多样品 - 柱污染或部分阻塞滤片 2. Mobile phase pH=7 - likely column void due to silica dissolution (unless specialty column used)流动相 pH=7 - 由于硅胶溶解使柱塌陷(除非使用专门的柱子) 3. Injection solvent stronger than mobile phase - likely split and broad peaks, dependent on volume溶剂比流动相的可能性大- 裂峰和宽峰,由样品量来决定 Peak Tailing, Broadening and Loss of Efficiency峰拖尾、变宽和柱效降低17.Can be caused by: 可能的原因 Column “secondary interactions”柱“次级效应”Column void 柱塌陷Column contamination 柱污染Column aging 柱老化Column loading 柱负荷超载Extra-column effects 柱外效应18.Peak Tailing Column “Secondary Interactions”峰拖尾柱“次级效应”Column: Alkyl-C8, 4.6 150mm, 5mMobile Phase:85%25mM Na2HPO4,pH7.0 : 15%ACNFlow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35CSample: 1. Phenylpropanolamine 苯丙醇胺去甲麻黄碱 2. Ephedrine 麻黄碱 3. Amphetamine 安非他明苯丙胺4. Methamphetamine 脱氧麻黄碱 5. Phenteramine 苯三胺No TEA 无三乙胺 10 mM TEA 10 mM 三乙胺USP TF(5%) 美国药典拖尾因子 USP TF(5%) 美国药典拖尾因子1. 1.29 1. 1.192. 1.91 2. 1.18 3. 1.63 3. 1.204. 2.35 4. 1.265. 1.57 5. 1.1419.Peak tailing eliminated with mobile phase modifier (TEA) at pH 7用流动相减尾剂(三乙胺)在pH 7 消除峰拖尾Peak Tailing Column “Secondary Interactions”峰拖尾柱“次级效应”Column: Alkyl-C8, 4.6 150mm, 5mMobile Phase:85%25mM Na2HPO4,pH7.0 : 15%ACNFlow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35CSample: 1. Phenylpropanolamine 苯丙醇胺去甲麻黄碱 2. Ephedrine 麻黄碱 3. Amphetamine 安非他明苯丙胺4. Methamphetamine 脱氧麻黄碱 5. Phenteramine 苯三胺 pH 3.0 pH 7.0 USP TF(5%) 美国药典拖尾因子 USP TF(5%) 美国药典拖尾因子 4. 1.33 4. 2.35Reducing the mobile phase pH reduces interactions with silanols that cause peak tailing降低流动相的pH ,减小与硅醇基作用引起的峰拖尾Peak Tailing 峰拖尾Column Contamination 柱污染Column: StableBond SB-C8, 4.6 250mm, 5mMobile Phase: 20% H2O : 80% MeOH Flow Rate: 1.0 mL/min Temperature: R.T. Detection: UV 254 nmSample: 1. Uracil 尿嘧啶 2. Phenol 苯酚 3. 4-Chloronitrobenzene 4-氯硝基苯 4. Toluene 甲苯Plates TF Plates TF Plates TF理论板数 拖尾因子 理论板数 拖尾因子 理论板数 拖尾因子1. 7629 2.08 1. 7906 1.43 1. 7448 1.062. 12043 1.64 2. 12443 1.21 2. 12237 1.213. 13727 1.69 3. 17999 1.19 3. 15366 1.114. 13355 1.32 4. 17098 1.25 4. 19067 1.17QC test forward direction QC test reverse direction QC test after cleaning 100% IPA, 35C 向前方向 相反方向 100%异丙醇冲洗后Peak Tailing/Broadening Sample Load Effects峰拖尾/变宽样品过载效应Column: 4.6 150mm, 5mMobile Phase:40%25mM Na2HPO4,pH7.0 : 60%ACNFlow Rate: 1.5 mL/min Temperature: 40CSample: 1. Desipramine 去郁敏/脱甲基丙米嗪 2. Nortriptyline 3. Doxepin 4. Imipramine 丙米嗪 5. Amitriptyline 阿米替林 6. TrimipramineTailing Eclipse XDB-C8 Broadening / Competitive C8USP TF 拖尾因子 Plates 理论板数 High Load / 10 Low Load High Load / 10 Low Load高载负/10倍 低载负 高载负/10倍 低载负1. 1.60 1.70 850 59412. 2.00 1.90 815 78423. 1.56 1.56 2776 6231 4. 2.13 1.70 2539 8359 5. 2.15 1.86 2735 10022 6. 1.25 1.25 5189 10725 Peak Broadening,Splitting Column Void 峰变宽,裂开 柱塌陷20.Mobile Phase:流动相：50%CAN : 50%Water : 0.2%TEA (pH 11)50乙腈 : 50水 : 0。2三乙胺 (pH 11) After 30 injections Initial 开始时 进样30次后Multiple peak shape changes can be caused by the same column problem. In the case a void resulted from silica dissolved at high pH.21.多数峰形改变可能是同一柱问题引起的。在这个例子中，高pH溶解硅胶导致塌陷Broad Peaks Unknown “Phantom” PeaksColumn: Extend-C18, 4.6 150 mm, 5 mMobile Phase: 40% 10 mM TEA, pH 11 : 60% MeOHFlow Rate: 1.0 mL/min Temperature: R.T. Detection: UV 254Sample: 1. Maleat 顺丁烯二酸 2. Pseudeophedrine 伪麻黄碱 3. Chlorphenniramine 氯非尼拉明Plates 理论板数1. 5922 2. 98793. 779 “Phantom” peak from first injection 前次进样未出完的峰The extremely low plates are an indication of an extremely late eluting peak from the preceding run.22.极低的理论板数表明这是一个前面进样极迟洗脱出来的峰Peak Tailing峰拖尾 Injector Seal Failure进样器密封性差Column: Bonus-RP, 4.6 75mm, 3.5mMobile Phase: 30% H2O : 70% MeOH Flow Rate: 1.0 mL/min Temperature: R.T. Detection: UV 254 nmSample: 1. Uracil 尿嘧啶 2. Phenol 苯酚 3. N,N-Dimethylaniline N,N-二甲苯胺Plates TF Plates TF 理论板数 拖尾因子 理论板数 拖尾因子 1. 2235 1.72 1. 3670 1.453491 1.48 2. 10457 1.09 3. 5432 1.15 3. 10085 1.00 Before After replacing rotor seal and isolation seal之前 转动杆和隔离密封垫检修后Overdue instrument maintenance can cause peak shape problems.仪器保养超期可能引起峰形问题/进样器划痕Peak Tailing 峰拖尾Extra-Column Volume 柱外死体积效应Column: StableBond SB-C18, 4.6 30mm, 3.5mMobile Phase: 85% H2Owith 0.1% TFA : 15% CANFlow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35C Sample: 1. Phenylalanine 2. 5-benzyl-3,6-dioxo-2-piperazine 3. Asp-phe 4. Aspartame10 l extra-column volume 50 l extra-column volume Determining the Cause of Peak Tailing峰拖尾原因的确定Evaluate mobile phase effects - alter mobile phase pH and additives to eliminate secondary interactions 评价流动相效果 - 改变流动相pH和添加剂消除次级效应/流动相中组份与柱子相互作用Evaluate column choice - try column with high purity silica or different bonding technology 评价柱选择 - 试用高纯度硅胶柱或不同键合技术柱Reduce sample load 减小进样量Eliminate extra-column e