有关物质分析方法验证方案

制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 1 页页 共共 12 页页 8 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 20 年 月 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 2 页页 共共 12 页页 验证方案的起草与审批验证方案的起草与审批 验证小组成员验证小组成员 部门人员职责 验证小组组长验证小组组长 部门人员职责 负责组织起草验证方案并按批准方案组织实施 督促验证人员做好记录 负责各阶段验证结果 汇总及评价 组织起草验证报告 组织相关培 训 方案审核方案审核 审核签名及日期 验证委员会 方案批准方案批准 批准人批准日期 方案实施日期 方案实施日期 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 3 页页 共共 12 页页 目目 录录 1 验证目的验证目的 4 2 方法简介与确认范围方法简介与确认范围 4 3 标准品 供试品标准品 供试品 4 4 风险评估风险评估 4 5 验证的可接受标准验证的可接受标准 4 6 验证步骤验证步骤 4 6 1 系统适应性系统适应性 4 6 2 专属性专属性 6 6 3 检测限与定量限检测限与定量限 8 6 4 线性线性 9 6 5 准确度准确度 9 6 6 精密度精密度 10 6 6 范围范围 10 6 7 耐用性耐用性 10 6 8 样品测定样品测定 11 7 偏差偏差 11 8 风险的接收与评审风险的接收与评审 11 9 再验证再验证 11 10 确认结果评审和结论确认结果评审和结论 11 11 更改历史更改历史 12 12 附录附录 12 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 4 页页 共共 12 页页 1 验证目的验证目的 根据法规的要求 采用非药典或其它法规未收载的分析方法应进行验证 证明采用 的方法适合于相应的检测要求 这个验证方案的目的是为验证提供具体方法参数 可接受标准和研究步骤 2 方法简介与确认范围方法简介与确认范围 原料有关物质检测方法为自行开发的液相室色谱方法 为确保方法的准确性和可 行性 为日常检测方法提供依据 现对该方法进行验证 方法验证必须按照验证方案进 行 此次验证方案提供 原料含量分析方法验证验证 包括 专属性 精密度 线性 范围 准确度 检测限 定量限 耐用性 3 标准品 供试品标准品 供试品 3 1 标准品 名称批号来源 3 2 供试品 名称批号来源 4 风险评估风险评估 按照 质量风险管理规程 质量控制部和质量管理部共同对分析方法进行了风险评 估 确定了需进行方法确认的项目 具体见下表 风险 因素 风险可能影响效应 现有控制措 施 SPDRPN 风险 级别 建议采取措施 专属性 不具有 专属性 分离度不好 影响杂质定量 每次试验测试 分离度 33327 中 首次使用前 对专属性进行 验证 定量限 定量限 小的杂质不能无 33327 中对该方法的定 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 5 页页 共共 12 页页 与检测 限 高被检出量限进行验证 精密度 精密度 差 不同时间或人 员测定的结果 不一致 每次测试前进 行系统适用性 测试 33327 中 首次使用前 对精密度进行 验证 准确度 回收率 低 杂质结果不准 确 无 33327 中 首次使用前 对准确度进行 验证 线性 线性不 好 杂质结果不准 确 无 33327 中 首次使用前 对线性进行验 证 范围范围窄 浓度超过范围 后结果不准确 无 33327 中 首次使用前 对范围进行验 证 耐用性 耐用性 差 参数微小变化 对结果影响很 大 无 33327 中 首次使用前 对耐用性进行 验证 风险评估人 评估日期 5 验证的可接受标准验证的可接受标准 项目可接受标准 专属性空白无干扰 主峰与相邻峰之间的分离度不小于 1 5 峰纯度应不小于 0 990 检测限与定量限 0 05 线性R 0 999 准确度回收率在 0 05 质量指标的 140 范围内 精密度重复性 RSD 10 0 中间精密度 RSD 10 0 精密度 两组数据平均检测结果的相对偏差 20 0 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 6 页页 共共 12 页页 范围应至少为指标的 80 120 耐用性评估柱温 流速 色谱柱 缓冲盐 pH 有机相比 例 流动相比例 溶液放置时间对检测结果的影响 6 验证步骤验证步骤 6 1 系统适应性系统适应性 分离度测试液 取 产品分离度标准品 5mg 置于一比色管中 加稀释液 10ml 溶解 在 95 下水浴加热 30 分钟 放冷 标准液 取 产品标准品25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 精密移取1ml 置于一100ml量瓶中 用稀释液稀释至 刻度 取分离度测试液进样 记录色谱图 产品与 3异构体之间的分离度应不小 于2 0 取标准液进样 记录色谱图 产品主峰拖尾因子应不大于 2 0 理论塔板数应不 低于 3000 标准液连续进样 6 次 主峰面积的相对标准偏差应不大于 5 0 保留时间的 相对标准偏差应不大于 1 0 6 2 专属性专属性 a 溶剂空白 取空白进样 记录色谱图 溶剂对测定应无干扰 b 样品液 取本品25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀 释液溶解并稀释至刻度 进样分析 主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1 5 主峰峰 纯度应不小于0 990 c 杂质1定位溶液 取杂质1约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 d 杂质2定位溶液 取杂质2约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 e 杂质3定位溶液 取杂质3约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 7 页页 共共 12 页页 f 杂质4定位溶液 取杂质4约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 i 杂质5定位溶液 取杂质5约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 j 杂质6定位溶液 取杂质6约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 k 杂质7定位溶液 取杂质7约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 l 杂质8定位溶液 取杂质8约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 m 杂质9定位溶液 取杂质9约25mg 精密称定 置于一25ml量瓶中 用乙腈5ml溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取5 0ml至25ml容量瓶中 用稀释液溶解并稀释至刻 度 主峰峰纯度应不小于0 990 n 杂质 10 定位溶液 取杂质 10 约 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 用乙腈 5ml 溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 移取 5 0ml 至 25ml 容量瓶中 用稀释液溶 解并稀释至刻度 主峰峰纯度应不小于 0 990 o 高温破坏试验 取在 60 加热 10 天的样品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶 中 用乙腈 5ml 溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 即得高温破坏样品溶液 进样 分析 主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1 5 主峰峰纯度应不小于 0 990 记录各杂 质的变化 p 高湿破坏实验 取在相对湿度为 90 5 的条件下放置 10 天的样品 25mg 精密 称定 置于一 25ml 量瓶中 用乙腈 5ml 溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 即得高 湿破坏样品溶液 进样分析 主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1 5 主峰峰纯度应 不小于 0 990 记录各杂质的变化 q 强光破坏试验 取经取经总照度不低于1 2 106Lux hr 强白光 近紫外能量不低于 200w hr m2破坏的的样品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 用乙腈 5ml 溶解 然后 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 8 页页 共共 12 页页 用稀释液溶解并稀释至刻度 即得强光破坏样品溶液 进样分析 主峰与相邻杂质之间 的分离度应不小于 1 5 主峰峰纯度应不小于 0 990 记录各杂质的变化 r 酸破坏试验 取样品 25mg 置于 25ml 量瓶中 加入 0 1mol L 盐酸溶液 1 00ml 25 下放置 24 小时 然后用 0 1mol L 氢氧化钠溶液 1 00ml 中和 用乙腈 5ml 溶 解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 即得酸破坏样品溶液 进样分析 主峰与相邻杂 质之间的分离度应不小于 1 5 主峰峰纯度应不小于 0 990 记录各杂质的变化 s 碱破坏试验 取样品 25mg 置于 25ml 量瓶中 加入 0 1mol L 氢氧化钠溶液 1 00ml 25 下放置 24 小时 然后用 0 1mol L 盐酸溶液 1 00ml 中和 用乙腈 5ml 溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 即得碱破坏样品溶液 进样分析 主峰与相邻杂质之 间的分离度应不小于 1 5 主峰峰纯度应不小于 0 990 记录各杂质的变化 t 氧化破坏试验 取样品 25mg 置于 25ml 量瓶中 加入 10 过氧化氢溶液 1ml 25 下放置 24 小时 用乙腈 5ml 溶解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 即得氧化破坏样品 溶液 进样分析 主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于 1 5 主峰峰纯度应不小于 0 990 记录各杂质的变化 i 根据杂质 1 10 的定位溶液和 标准品溶液的主峰峰面积 计算响应因子 以 标准品为 1 0 计 计算各杂质的相对响应因子 6 3 检测限与定量限检测限与定量限 a 定量限 取 产品标准品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 用乙腈 5ml 溶 解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 用稀释液分步稀释成一定浓度的溶液 进样 获 得的色谱图中 信噪比 S N 为 10 20 1 时 相应的浓度即为定量限浓度 定量限精密度 配制 6 个相同浓度的定量限溶液进样 主峰保留时间的相对标准偏 差应不大于 2 0 峰面积的相对标准偏差应不大于 5 0 定量限应不大于 0 05 定量限准确度 LOQ 储备溶液 根据 LOQ 测试结果配制 LOQ 储备溶液 浓度为 LOQ 浓度的 5 倍 LOQ 浓度杂质标准溶液 移取杂质标准储备溶液 5 0ml 至 25ml 容量瓶中 用流动相 稀释至刻度 计算杂质的单位浓度峰面积 同法配制 3 个 供试液 取 产品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 用乙腈 5ml 溶解 然后 用稀释液溶解并稀释至刻度 同法配制 3 个 LOQ 回收率测试液 取 产品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 精密加入 LOQ 储备液 5 0ml 用稀释液稀释至刻度 相当于杂质的 LOQ 浓度 同法配制 3 个 分别取 LOQ 浓度杂质标准溶液 供试液进样 计算杂质标准的单位浓度峰面积和供 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 9 页页 共共 12 页页 试液中所含杂质的单位浓度峰面积 LOQ 回收率测试液各进样 3 针 计算回收率 每个回 收率及平均回收率应为 80 120 各回收率的相对标准偏差应不大于 15 回收率 计算浓度 100 实际浓度 b 检测限 取 产品标准品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 用乙腈 5ml 溶 解 然后用稀释液溶解并稀释至刻度 用稀释液分步稀释成一定浓度的溶液 进样 获 得的色谱图中 信噪比 S N 为 3 5 1 时 相应的浓度即为检测限浓度 6 4 线性线性 a 杂质标准储备溶液 取杂质 1 约 10mg 杂质 2 约 50mg 杂质 3 约 15mg 杂质 4 约 75mg 杂质 5 约 10mg 杂质 6 约 50mg 杂质 7 约 15mg 杂质 8 约 10mg 杂质 9 约 50mg 杂质 10 约 50mg 至 100ml 容量瓶中 精密称定 加乙腈 5ml 溶解后用流动相稀释至刻度 再移取 2 0ml 至 20ml 容量瓶中 流动相稀释至刻度 b 线性 L1 溶液 取检测限与定量限项下的 LOQ 浓度杂质标准溶液 c 线性 L2 溶液 移取杂质标准储备溶液 3 0ml 至 25ml 容量瓶中 用流动相稀释至 刻度 计算杂质的单位浓度峰面积 相当于 60 杂质限度 也可以不做 但至少保证有 5 个点 d 线性 L3 溶液 移取杂质标准储备溶液 4 0ml 至 25ml 容量瓶中 用流动相稀释至 刻度 计算杂质的单位浓度峰面积 相当于 80 杂质限度 e 线性 L4 溶液 移取杂质标准储备溶液 5 0ml 至 25ml 容量瓶中 用流动相稀释至 刻度 计算杂质的单位浓度峰面积 相当于 100 杂质限度 f 线性 L5 溶液 移取杂质标准储备溶液 6 0ml 至 25ml 容量瓶中 用流动相稀释至 刻度 计算杂质的单位浓度峰面积 相当于 120 杂质限度 g 线性 L6 溶液 移取杂质标准储备溶液 7 0ml 至 25ml 容量瓶中 用流动相稀释至 刻度 计算杂质的单位浓度峰面积 相当于 140 杂质限度 进样 记录色谱图 以样品浓度 g ml 为横坐标 以峰面积为纵坐标进行线性回归计算 得出线性回归方程及相关系数 线性范围为杂质的定量限浓度至约 1 4 倍最大允许杂质限 度浓度 相关系数 R 应不小于 0 990 Y 轴截距应在 100 响应值的 25 以内 响应因子 的相对标准偏差应不大于 10 6 5 准确度准确度 a 杂质标准储备溶液 取杂质 1 约 10mg 杂质 2 约 50mg 杂质 3 约 15mg 杂质 4 约 75mg 杂质 5 约 10mg 杂质 6 约 50mg 杂质 7 约 15mg 杂质 8 约 10mg 杂质 9 约 50mg 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 10 页页 共共 12 页页 杂质 10 约 50mg 至 100ml 容量瓶中 精密称定 加乙腈 5ml 溶解后用流动相稀释至刻度 再移取 2 0ml 至 20ml 容量瓶中 流动相稀释至刻度 b LOQ 储备溶液 根据 LOQ 测试结果配制 LOQ 储备溶液 浓度为 LOQ 浓度的 5 倍 c 杂质标准溶液 移取杂质标准储备溶液 5 0ml 至 25ml 容量瓶中 用流动相稀释至 刻度 同法配制 3 个 计算杂质的单位浓度峰面积 相当于杂质限度溶液 d 供试液 取 产品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 用乙腈 5ml 溶解 然 后用稀释液溶解并稀释至刻度 同法配制 3 个 计算样品中各杂质的单位浓度峰面积 用于扣除回收率测试中扣除空白的依据 e 回收率测试液 1 取 产品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 精密加入上 述杂质标准液储备液 5 0ml 用稀释液稀释至刻度 相当于杂质的限度 f 回收率测试液 2 取 产品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 精密加入上 述杂质标准液储备液 7 0ml 用稀释液稀释至刻度 相当于杂质的限度的 1 4 倍 i 回收率测试液 3 取 产品 25mg 精密称定 置于一 25ml 量瓶中 精密加入 LOQ 储备液 5 0ml 用稀释液稀释至刻度 相当于杂质的 LOQ 浓度 也可以配制相当于杂质 限度的 0 8 倍的溶液 但是为了减少工作量 还是最好做 LOQ 点的回收率 分别取杂质标准溶液 供试液 回收率测试液 1 回收率测试液 2 回收率测试液 3 各连续进样 3 次 按外标法以峰面积计算 产品的量 并计算回收率 每个回收率及平 均回收率应为 80 120 各回收率的相对标准偏差应不大于 15 回收率 计算浓度 100 实际浓度 6 6 精密度精密度 a 重复性 称取 产品样品适量 照有关物质检查方法配制样品溶液 同法配制 6 份样品溶液 进样测试 各杂质测定结果的相对标准偏差均应不大于 10 b 中间精密度 不同仪器 Agilent 1200 不同检验人员 另一位化验员 新配制的流 动相 新配制的样品液及标准液 与重复性测试测同一批样品 各杂质测定结果的相对 标准偏差均应不大于 10 c 精密度测试结果 重复性测定结果的平均值与中间精密度测定结果的平均值之间 的相对偏差不大于 20 6 6 范围范围 根据线性 精密度和准确度确定方法的范围 在该浓度范围内 方法具有良好的精 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 11 页页 共共 12 页页 密度 线性和准确度 范围至少在 0 05 质量指标的 140 范围内 6 7 耐用性耐用性 a 色谱条件的影响 在其他条件不变情况下 单独改变柱温 流速 色谱柱 缓冲 液 pH 值 有机相比例 流动相比例等其中一个色谱条件 取分离度测试液分别进样 产品与 杂质之间的分离度应不小于 2 0 改变项目柱温流速 ml 分钟 色谱 柱 缓冲液 pH 值 甲醇 乙腈 比例 A B 相初始 比例 设定值20 30 0 851 05另一 支 2 8 0 3 2 0 55 4 5 45 5 5 80 2070 30 b 溶液稳定性 按本方法配制标准溶液 供试品溶液和分离度溶液 供试品溶液分 别放置 0h 4h 8h 24h 48h 36h 后进样测定 考察溶液的稳定性 要求标准品溶液 的峰面积相对 0h 的增长率在 5 范围内 供试品中各杂质的增长相对 0h 不超过 20 且无新的杂质产生 分离度溶液分离度不小于 2 0 则表明溶液在这段时间内稳 定 否则说明溶液不稳定 需根据溶液稳定性结果考虑配制和进样时间 6 8 样品测定样品测定 应用本方法 对 3 批样品进行测定 样品各杂质均应能够符合限度要求 7 偏差偏差 验证过程中如果出现偏差应及时进行调查和上报 并且采取适当的措施进行处理 并及时记录 如经调查确定偏差的性质会对验证结果产生实质影响 应确定原因并采取 必要措施后重新进行验证 8 风险的接收与评审风险的接收与评审 经分析 对上一步判断的风险采取的控制措施 若经检查确认符合要求 则其相应 的风险可降至为可接受风险 否则 需采取进一步的措施降低风险 9 再验证再验证 发生下列情形之一时 需进行再验证 1 生产工艺发生改变 2 检验方法发生改变 10 确认结果评审和结论确认结果评审和结论 验证小组负责收集各项验证 试验结果记录 根据验证 试验结果起草验证报告 制药股份有限公司 文件编号 文件编号 题目题目 原料有关物质分析方法验证方案原料有关物质分析方法验证方案 第第 12 页页 共共 12 页页 报验证委员会 验证委员会负责对验证结果进行综合评审 做出验证结论 确认再验证周期 对验 证结果的评审应包括 确认试验是否有遗漏 确认试验过程中对验证方案有无修改 修改原因 依据以及是否经过批准 确认记录是否完整 确认试验结果是否符合标准要求 偏差及对偏差说明是否合理 是否需要进一步补 充试验 11 更改历史更改历史 12 附录附录 附录 1 原料有关物质分析方法 guideline on the limits of genotoxic impurities 版本号生效日期主要变更描述 第 1 版本文档为新订 制药股份有限公司 附录附录 1 原料有关物质分析方法原料有关物质分析方法 1 仪器 LC 2010AHT高效液相色谱仪 日本岛津公司 紫外检测器 2 标准品