细菌的特殊染色技术_第1页
细菌的特殊染色技术_第2页
细菌的特殊染色技术_第3页
细菌的特殊染色技术_第4页
细菌的特殊染色技术_第5页
已阅读5页，还剩4页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

细菌的特殊染色技术,一、目的要求,学习并掌握芽胞染色法原理和方法，并了解芽胞的形态特征；学习并掌握荚膜染色法原理和方法，并了解荚膜的形态特征；巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。,二、基本原理,用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。,荚膜是包裹在某些细菌细胞外的一层黏液状或胶状物质，含水量很高，其他成分主要为多糖、多肽或糖蛋白等。荚膜不易着色且容易被水洗去，因此常用负染法进行染色，而荚膜不着色，在深色背景下呈现发亮区域。由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。,二、基本原理,三、器材,菌种枯草芽胞杆菌、褐球固氮菌2d营养琼脂斜面培养物。溶液和试剂5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、绘图墨水（滤纸过滤后使用）等。仪器和其他用品酒精灯、载玻片、盖玻片、显微镜、双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管、烧杯、试管架，镊子，载玻片夹子，载玻片支架，滤纸，滴管和无菌生理盐水等。,四、操作步骤,1、芽胞染色制片按常规方法涂片、干燥及固定；（回忆涂片的关键环节？）加热染色向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持5min，加热时注意补充染液，切勿让涂片干涸；（保持涂菌部位的染液不干涸，否则菌体变性，无法观察）脱色待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止；复染用0.5%番红水溶液复染2min；水洗用缓流自来水冲洗至流出水无色为止；镜检,成功的关键：（1）选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽胞，而老龄菌芽胞囊已破裂；（2）加热染色时必须维持在染液微冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽胞囊破裂，加热不够则芽胞难以着色；（3）脱色必须等待玻片冷却后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。,2、荚膜染色1、取干净载玻片，在其上滴加1d绘图墨水，挑取少量菌体于其中混匀；2、盖上盖玻片，镜检即可。（尽量不要混入空气）成功的关键：（1）载玻片必须干净无油迹，否则混合液不能均匀铺开；（2）绘图墨水使用量要很少，否则会完全覆盖菌体与荚膜，难以观察；（3）制片过程中所涉及的固定及干燥步骤均不能加热和用热风吹干，因为荚膜含水量高，加热会使其失水变形。同时，加热会使菌体失水收缩，与细胞周围染料
人人文库> 全部分类> 应用文书 > 技术指导

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论