第四章-药物的杂质检查详解.ppt

第四章药物的杂质检查,主要内容,概述（杂质定义、来源、种类、限量检查）一般杂质检查方法特殊杂质检查方法,第一节概述,杂质的定义杂质的来源杂质的种类杂质检查的意义杂质限量,一、杂质的定义,杂质（forin、impurities）是指：1.药物中存在的无治疗作用2.或影响药物的稳定性和疗效3.甚至对人体健康有害的物质。,二、药物中杂质的来源,（2）试剂、溶剂、催化剂类,1、生产过程中引入：（1）原料不纯或部分未反应完全的原料造成（2）合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成（3）需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成（4）所用金属器皿及装置等引入杂质,2贮藏过程中引入,(1)保管不善或贮存时间过长,(2)包装不当,三、杂质的分类,药物中的杂质按来源分为：一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。,三、杂质的分类,药物中的杂质按结构分为：无机杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属等。有机杂质：有机药物中引入的原料、中间体、副产物、分解产物，异构体和残留溶剂。,三、杂质的分类,药物中的杂质按性质分为：信号杂质：本身一般无害，但其含量的多少可反映出药物的纯度水平，如含量过高，表明药物的纯度差。如氯化物、硫酸盐等。有害杂质：如砷盐、重金属、氰化物对休体有害，在质量标准中要严格控制。,试题举例,中国药典（2010年版）中规定的一般杂质检查中不包括的项目是A.硫酸盐检查B.氯化物检查C.溶出度检查D.重金属检查E.砷盐检查,四、杂质检查的意义,（一）杂质是影响药物纯度的主要因素，因此药品纯度主要由药品质量标准中的检查相下的杂质检查来控制，包括杂质名称、检查方法、允许限量。纯度控制又称杂质限量控制。（二）严格按照中国药典规定的杂质检查项目进行检查，凡中国药典未规定检查的杂质，一般不需要检查。（三）化学试剂不考虑生理毒副作用，不能用化学制剂规格代替药用规格。,药物纯度与化学试剂纯度的比较,1、等级划分不同：药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。,药物纯度与化学试剂纯度的比较,2、要求不同：药物纯度主要从用药安全、有效及稳定性角度考虑；化学试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用产生的影响，以及根据使用范围和使用目的来加以规定。,五、杂质限量,指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示限量检查法：不检查药物的绝对含量，而检查其是否超过限量。杂质量杂质限量杂质量,药品合格,药品不合格,杂质的限量检查,在不影响疗效和不发生毒副作用的原则下，既保证药物质量，又便于制造、贮藏和制剂生产，对于药物中可能存在的杂质，允许有一定限度。,五、杂质限量,杂质限量检查方法：1、对照法：取限量的待检杂质对照品溶液与一定量供试品溶液在相同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过规定。例：氯化物检查；硫酸盐；铁盐；重金属；砷盐检查等。,平行原则,使用对照法检查药物的杂质，必须遵循平行原则：供试液和对照液应在完全相同的条件下反应，如加入的试剂、反应的温度、放置的时间等均应相同。,五、杂质限量,2、灵敏度法：在规定量的供试品溶液中加入试剂，在一定条件下反应，观察有无正反应出现，以不出现正反应为合格。即以该检测条件下反应的灵敏度来控制杂技限量（不需对照品）。例：纯化水中的氯化物检查：在50mL纯化水中加入硝酸5滴及硝酸银试液1mL，不发生浑浊为合格。,五、杂质限量,3、比较法：取一定量供试品，在规定条件下测定待检杂质结果（吸光度、旋光度）与规定数据（限量）比较，判断供试品中杂质限量。（不需对照品）。例：盐酸去氧肾上腺素中酮体的检查：取本品，加水制成1mL中含2.0mg的溶液，以水为空白，在310nm波长处测定吸光度，不得大于0.02。,杂质限量的计算,允许杂质存在的最大量杂质限量供试品量,试题举例检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为A.0.20gB.2.0gC0.020gD.1.0gE.0.10g,已知：c1g/ml1106g/mlV2mlL0.0001%,试题检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？A.0.2mlB.0.4mlC2mlD.1mlE.20ml,第二节一般杂质检查,一般杂质：广泛分布于药物中的杂质。如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。重金属、砷盐,二、重金属检查法,重金属：在实验条件下能与显色剂如S2-作用显色的金属。如银、铅、汞、铜等。铅在多数药物的生产中容易积累，在体内会积蓄中毒，因此重金属检查时常以铅为代表。中国药典（2000年版）共收载四法：硫代乙酰氨法、炽灼残渣法、硫化钠法、微孔滤膜法。,1.第一法硫代乙酰胺法,（1）、原理：对照法,适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。,（2）.测定条件,用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10g/ml，适宜比色范围为2ml溶液中含1020g的Pb2+。本法用2mlpH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。显色剂：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂。,（1）供试品如有色，需经处理后方可检查。,A.外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。,B.内消色法：,C.改用第四法，微孔滤膜过滤法,（3）.干扰及排除,（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（0.51.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰。,（3）若供试品为铁盐，Fe3+在盐酸中生成FeCl2，用乙醚提取除去，剩余微量铁在氨碱性溶液中加KCN掩蔽，然后用第三法检查。,（4）若药物本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽剂消干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加KCN掩蔽Zn2+后，依第三法检查。,2.第三法硫化钠法,适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。,（1）.原理对照法,（2）.测定条件及注意事项,（1）碱性条件：NaOH,（2）显色剂：硫化钠,注意事项：Na2S需新鲜配制,3.第二法炽灼残渣法,适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。,500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。,（1）.原理对照法,（2）.操作方法,（3）.注意事项,含钠盐或氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）。炽热温度影响检查结果：温度越高，重金属损失越多。酸溶液使用后一定要采用适当措施完全去掉，以免影响下一步操作和实验结果。,4.第四法微孔滤膜法,适用于重金属限量低的药物（含25g重金属杂质）及有色供试液的检查。原理：重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜，比较色斑的深浅。装置：过滤器（p36图3-1）,USP（24）检查重金属时，使用硫代乙酰胺（特殊情况下也采用新制饱和硫化氢试液）显色。检查时，除用供试管、对照管，还规定用监控管，三管同法检查。监控管的设置是防止药品中的重金属以结合态存在而无法检测。我国药品检验操作标准中规定，检查新产品中重金属时，应用该法。,例1：重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（）A.1.5B.3.5C7.5D.9.5E.11.5,例2：微孔滤膜法是用来检查（）A.氯化物B.砷盐C.重金属D.硫化物E.氰化物,例3.中国药典(2000年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是（）A.硫化氢试液B.硫代乙酰胺试液C.硫化钠试液D.氰化钾试液E.硫氰酸铵试液,例4.葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是（）A.用硫代乙酰胺为标准对照液B.用10ml稀硝酸酸化C.在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D.用硫化钠为试液E.结果需在黑色背景下观察,例5.现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法（）A.一法B.二法C.三法D.四法E.以上都不对,例6.下面哪些方法为中国药典收载的重金属检查方法（）A.500600炽灼残渣后,按一法操作B.pH33.5条件下，加入硫化氢试液C.碱性下，加入硫化钠试液D.按一法操作，结果用微孔滤膜过滤后观察色斑E.以上都对,三、砷盐检查法,（一）、古蔡法ChP（2000）、BP（1998），砷盐的限量检查,（二）、Ag-DDC（二乙基二硫代氨基甲酸银）法ChP(2000)、USP（24），检查、含量测定,遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较。,1.古蔡法,As（HgBr）3（黄色）AsH3+HgBr2AsH（HgBr）2（棕色）As2Hg3（棕黑色）,（2）.操作方法,（1）标准砷斑:用2ml标准砷溶液制备1gAs/ml,（2）如供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作。,导气管C装有醋酸铅棉花（约6080mm高）旋塞D的顶端放有溴化汞试纸。,3.测定条件,（1）标准砷溶液临用新配，1gAs/ml。,（2）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸5ml。,（3）反应中加入酸性氯化亚锡及碘化钾，其作用是：,(4).锌粒应无砷,(5).砷斑不稳定，应立即观察,A.还原As5+为As3+，加快反应速度；,B.碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行；,C.氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生；,D.可抑制微量Sb的干扰，在实验条件下，100gSb存在不干扰。,4.干扰及排除,（1）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时，加HNO3，加热,使氧化成硫酸盐，以除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐的检查。,（2）供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+，如枸橼酸铁铵中砷盐的检查。,（3）具环状结构的有机药物，要先行有机破坏后再进行检查。,（4）本法适用于不含Sb或含Sb量小于100g的供试品。,（二）Ag-DDC法,1.原理：对照法,用有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的进行。USP（24）用吡啶，ChP（2000）用三乙胺。,本法适用于含Sb量小于500g的供试品。,砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原AgDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。,（三）白田道夫法,含锑药物锑盐被还原为SbH3与HgBr2试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检查，可改用Betterdorff法。,例1：在药物的杂质检查中，其限量一般不超过百万分之十的是（）A.氯化物B.硫酸盐C.醋酸盐D.砷盐E.淀粉,例2：在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是（）A.除去I2B.除去AsH3C.除去H2SD.除去HBrE.除去SbH3,例3：古蔡氏法中，SnC12的作用有（）A.使As5+As3+B.除去H2SC.除去I2D.组成锌锡齐E.除去其它杂质,例4：中国药典（1995年版）收载的古蔡法检查砷盐的基本原理是（）A.与锌、酸作用生成H2S气体B.与锌、酸作用生成AsH3气体C.产生的气体遇氯化汞试纸产生砷斑D.比较供试品砷斑与标准品砷斑的面积大小E.比较供试品砷斑与标准品砷斑的颜色强度,例5、砷盐检查法方法的比较1、在连接砷化氢发生瓶的导管中装入醋酸铅棉花（）2、使用的标准砷溶液为2m1（）3、测定结果要与标准砷斑相比较（）4、要测定吸收度（）5、要用酸碱滴定法（）A.古蔡氏（Gutzeit）法B.二乙基二硫代氨基甲酸银法C.A和B均可D.A和B均不可,例6、用古蔡氏法检查下列药物中的砷盐时，排除干扰的方法：A.先用硝酸或溴水氧化B.先加酸性氯化亚锑还原C.改用白田道夫法D.先加氰化钾掩蔽E.先加草酸生成沉淀1.硫化物（）2.亚硫酸盐（）3.硫代硫酸盐（）4.高铁盐（）5.锑盐（）,例7.ChP（2000）检查葡萄糖酸锑钠中的砷盐时，应选用（B）A.古蔡氏法B.白田道夫法C.碘量法D.AgDDC法E.契列法,例8.葡萄糖中砷盐的检查，需要的试剂应有（）APb2+标准液BSnCl2试液CKI试液DZnE醋酸铅棉花,例9.Ag-DDC法检查砷盐时，加入碘化钾和酸性氯化亚锡的作用为（）A将As5+还原为As3+B有利于AsH3生成反应C抑制SbH3的生成D形成Zn-Sn齐以均匀而连续地发生氢气E催化加速生成AsH3,例10.古蔡氏法检查所用的溶液是()A.强碱性溶液B.强酸性溶液C.含稀盐酸10ml溶液D.含稀硝酸10ml溶液E.含强氧化剂(硝酸或过硫酸铵)溶液,例11、综合练习1、药物中铁盐检查（）2、磺胺嘧啶中重金属检查（）3、药物中硫酸盐检查（）4、葡萄糖中重金属检查（）5、药物中氯化物检查（）A.硝酸银试液B.氯化钡试液C.硫代乙酰胺试液D.硫化钠试液E.硫氰酸盐试液,例12、综合练习：1-5可用于检查的杂质为1、在酸性溶液中与氯化钡生成浑浊液的方法（）2、在酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色的方法（）3、在实验条件下与硫代乙酰胺形成均匀混悬溶液的方法（）4、Ag-DDC法（）5、古蔡法（）A.氯化物B.砷盐C.铁盐D.硫酸盐E.重金属,例13、15杂质检查中所用的酸是A.稀硝酸B.稀盐酸C.硝酸D.浓盐酸E.醋酸盐缓冲液1、氯化物检查法（）2、硫酸盐检查法（）3、铁盐检查法（）4、重金属检查法（）5、砷盐检查法（）,四、溶液颜色检查法,控制药物中有色杂质限量的方法。ChP(2000)采用三种方法检查：目视比色法分光光度法色差计法,观察方法,1.目视比色法,将样品溶液与标准比色液比较的方法。标准比色液的配制：观察方法：,标准比色液的配制,2.色差计法,本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，比较样品溶液与标准比色液之间的颜色差异进行检测的方法。三刺激值：在给定的三色系统中，与待测色达到色匹配所需要的三个原刺激量。色差计的工作原理：利用仪器内部的积分光学系统，把光谱光度数据的三刺激值进行积分，得到颜色的数学表达式，计算出色差。测色仪器一般为光电积分型色差计。,五、澄清度检查法,检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。1.检查方法对照法把供试品溶液与规定级号的浊度标准液相比较,五、澄清度检查法,2.浊度标准液的配制：原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。浊度标准贮备液：1.0硫酸肼溶液+10乌洛托品溶液等量混合（低温避光保存）浊度标准原液：15.00ml贮备液稀释至1000ml（A550=0.120.15）浊度标准液（5个级号）：0.5；1；2；3；4。,五、澄清度检查法,3.判断药典中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。0.5号浊度标准液：2.5ml标准原液稀释至100ml。配制用水：新煮沸的冷水。,六、有机溶剂残留量测定法,1.有机溶剂残留量测定法适用对象是用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，包括苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷。,2.检查方法中国药典采用气相色谱法检查残留有机溶剂。,3.色谱条件,固定相：直径为0.250.18mm的二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球。载气：氮气检测器：氢火焰离子化检测器检测柱温：80170色谱系统适用性试验：中国药典规定，在测定残留溶剂前确定色谱适用性条件。,（1）用待测物的色谱峰计算的理论塔板数应大于1000；,（2）用内标法测定时，内标物与待测物色谱峰的分离度应大于1.5；,（3）用内标法测定时，每个标准溶液（限量待测溶剂与内标液）进样5次，待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差应不大于5；若用外标法测定，待测物峰面积的相对标准偏差应不大于10。,第三节特殊杂质检查法,特殊杂质：在特定药物的生产和贮藏中引入的杂质。一般根据药物和杂质在物理、化学性质上的差异来进行区别，如颜色的差异、溶解行为的差异、旋光性的差异、吸收光谱的差异和化学反应的差异等。高压液相色谱法,一、利用药物和杂质在理化性质上的差异,臭味及挥发性质的差异例如：黄凡士林中异性有机物检查：本品2.0g,直火加热无辛味。颜色差异例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品2.0g，加NaOH试液10ml，加水25ml，与黄色3号比色液比，不得更深。溶解行为的差异例如：吡哌酸中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）检查,一、利用药物和杂质在理化性质上的差异,旋光性质的差异例如：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：本品溶液(50mg/ml)-0.4对光吸收性质的差异例如：苯丙醇中苯丙酮的检查:纯品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%时A247nm/A258nm=0.79,一、利用药物和杂质在理化性质上的差异,荧光分析法例如：利血平中氧化产物检查：利血平(无荧光)3,4-二去氢利血平(I)(黄绿色荧光)3,4,5,6-四去氢利血平(II)(蓝色荧光),二.高压液相色谱法概述,高效液相色谱法是70年代初期、在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析。液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，能用液相色谱分析的有机物大约占有机物的的7080%。,2.液相色谱的分离原理,液相色谱分离系统也由两相固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。,3.高效液相色谱仪,高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成。高压输液系统：由溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等