维生素C的测定(2-6-二氯酚靛酚滴定法.doc

实验一 维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法1、 测定原理2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HOCCOH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。2,6二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2,6二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6二氯酚靛酚溶液则呈红色。在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。反应式如下：二、实验仪器与试剂1.仪器组织捣碎机；水果刀； 托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；台式离心机；电炉； 吸耳球；玻璃棒；蒸馏水，蒸馏水洗瓶； 记号笔、标签纸、定性滤纸；20cm镊子；5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗；漏斗架；50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯；10ml 、500 ml、1000 ml量筒；100ml具塞量筒(或普通量筒)； 100mL、250mL棕色容量瓶；50ml或100ml三角烧瓶。2.原料及试剂 本实验材料是，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯度。 (1)2%草酸溶液：草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。(3)抗坏血酸标准溶液：称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，备用 。 (4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液： 称取碳酸氢钠52.2mg，溶解在200mL沸水中。再称取2,6-二氯酚靛酚49.2mg，溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷后，过滤于250ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。临用前标定：取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，摇匀，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色，15s不褪色即为终点，并计算如下：每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=CV1/V2。式中：C-抗坏血酸的浓度(mg/ml)= 0.2 V1-抗坏血酸的量(ml)=2 V2-消耗染料溶液的量(ml)=31.84 得出T=0.22/31.84=1.26102三、实验步骤1. 取200g新鲜橙子(去皮、去核)，置于1000ml烧杯内，称重。 2.将样品倒入组织捣碎机，加入等量2%草酸（WV），加盖旋紧，匀浆5min。3. 取出匀浆物质。4.称取30g匀浆物质于50ml小烧杯中编号，记录。5. 用少量1%草酸将称取的匀浆物质倒入100ml容量瓶中，并用1%草酸反复洗涤烧杯（3次），其洗涤液一并移入，并用1%草酸定容到100ml。6.加塞后将匀浆物质与1%草酸充分混合，静置10min。7.取上述溶液过滤或离心。8. 用移液管吸取10ml滤液置于三角烧瓶内，加入10ml 1%草酸（2个平行样品，编号）；用移液管吸取10ml蒸馏水，加入10ml 1%草酸（空白对照）。9. 加1ml氯仿，将2,6二氯酚靛酚染料滴定至终点（淡粉红色，15s不褪色或观察氯仿层呈现淡红色。），记录染料消耗量。 10. 计算每100g样品中维生素C的含量（ml） 及平行样品误差范围，公式如下：维生素C含量（ml/100g）=(V1-V2)T/W100式中：V1-滴定样品时耗去的染料溶液的量(ml) V2-滴定空白时耗去的染料溶液的量(ml) T - 1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数W -滴定时所取的滤液中，含样品的量(g)四、实验结果、数据计算与分析组别耗去的染料溶液的量(ml)分析数据(ml)空白对照：水1.601.60样品一43.4244.61样品二45.80滴定时所取的滤液中，含样品的量W (g)=30/2/10010=1.50维生素C含量（ml/100g）=(V1-V2)T/W100=36.13食物成分表（全国平均值）中橙子的VC含量约33mg/100g。比测定值略小。五、注意事项及说明(1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物定容时泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇消泡。(2)大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用2草酸溶液制成匀浆以保存维生素C。(3) 样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免抗坏血酸被破坏。(4) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。(5) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用。(6) 干扰滴定因素有：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶，直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。(7) 提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留