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川产云南红豆杉中紫杉烷类似物中草药 1999年第7期第30卷 有效成分作者：徐学民*王笳袁崇均蒋庆宇单位：四川省中药研究所成都610041关键词：云南红豆杉；紫杉烷类似物；抗肿瘤活性搞要从四川省木里县采集的云南红豆杉Taxus yunnanensis的树皮中分得3个紫杉烷类似物，经解析其1H，13CNMR、EIFAB MS谱及DEPT实验证明此3个类似物为1-hydroxy-baccatin()、10-deacetyltaxol()、7，9-dideacetylbaccatin ()。此3个化合物存在于红豆杉属的其它植物中，但首次从云南红豆杉中分出。Taxane Diterpenoids from Yunnan Yew Bark (Taxus yunnanensis)Growing in Sichuan ProvinceXu Xuemin, Wang Jia, Yuan Chongjun, et al(Sichuan Institute of Chinese Materia Medica, Chengdu 610041)AbstractThree taxane diterpenoids were isolated from the bark of Taxus yunnanensis Cheng et L.K.Fu collected in Molin county, Sichuan Province. Their chemical structures were elucidated as 1-hydroxy baccatin (); 10-deacetyltaxol(); and 7,9-dideacetyl baccatin() by 1HNMR，13CNMR, EI and FABMS as well as DEPT spectrum. These compounds were isolated from T.yunnanensi Cheng et L.K.Fu for the first time even though they also existed in other species of Taxus L.Key wordsTaxus yunnanensis Cheng et L.K.Fu1-hydroxy baccatin10-deacetyltaxol7,9-dideacetyl baccatin 为了从红豆杉属植物中寻找抗肿瘤高活性的紫杉烷类似物，我们对四川省木里县产的云南红豆杉Taxus yunnanensis的化学成分进行深入研究，从其树皮中分出大量的紫杉烷类似物，解析其中含量较高的3个类似物(为0.009，为0.004，为0.003)的1H，13CNMR，FABMS光谱以及DEPT实验证明它们是1-hydroxy-baccatin ()1，2，10-deacetyltaxol()3，4，7，9-dideacetylbaccatin () 5，6。经药理实验证明：类似物有中等强度抗肿瘤活性，但弱于紫杉醇。和没有活性。现报道3个类似物的分离及化学结构测定。1仪器和试剂熔点按中国药典1995版一部附录33页第一法测定，温度计已校正。红外光谱使用岛津IR-408型光谱仪，KBr压片法。紫外光谱使用日立UV-3000型光谱仪，旋光测定使用WXZ-1光学度盘旋光仪。1HNMR和13CNMR谱以及DEPT实验使用Bruker AMX-400及NT-360型核磁共振仪。CDCl3作溶剂，TMS作内标。EI及FABMS谱使用JMS-SX102质谱仪及VGBio-Q triplequadruple 质谱仪。高效色谱分析使用Waters 840 型HPLC仪，5/ Nucleuer C18柱(250 mm4.6 mm)，洗脱剂为甲醇-水(6535)，流速1mL/min,max227 nm。层析用硅胶为300目，干柱层析使用TLC级的硅胶H(青岛海洋化工厂出品)，薄层层析用5磷钼酸乙醇液显色，TLC展开剂采用环己烷-乙酸乙酯(23)。2提取和分离取10 kg干燥的云南红豆杉树皮粉碎，过20目筛。用95乙醇渗漉至渗出液近无色，减压回收乙醇后得糖浆状浸膏2000 g。用等体积水稀释，以石油醚(bp 6090)萃取(2.5 L4)，合并二氯甲烷萃取液，用无水硫酸钠脱水，回收溶剂，得提取物70 g。将此提取物溶解在150 mL氯仿中，上样于装有1.2kg硅胶H柱的柱顶，进行柱层析。以CHCl3-EtOH(991)(9010)梯度洗脱，以TLC监控，合并(991)(955)部份的洗脱剂，回收溶剂，得残余物14.7 g，将此残余物再次上样于装有500 g硅胶H柱顶，用展开剂氯仿-乙醇(964)洗脱，每份收集100mL。合并含主斑点的部份，回收溶剂，残余物用丙酮重结晶3次，得到无色片状结晶()0.92 g。将前述梯度洗脱的(955)(9010)部份合并，回收溶剂后得到残余物26.74 g。此残余物溶于50 mL氯仿中，挥去部分溶剂后，用40 g硅胶(100目)拌和，挥干溶剂后置800 g薄层层析用H干柱柱顶，以乙酸乙酯-环己烷(34)展开。待溶剂展开至柱底后，将柱床中的硅胶H轻轻抖出，切割成10段(8cm/段)，取其中的第五段、六段分别用丙酮洗脱，洗脱物回收溶剂后如前法分别再进行一次干柱层析(300 g硅胶H)，切下其中含样品的主要色带，丙酮洗脱。回收丙酮后残余物用95乙醇结晶，从第五段中获得白色结晶性粉末420 mg。从第六段中获得白色片状结晶360 mg。3结构鉴定类似物：无色片状结晶(丙酮)，mp 247249，TLC Rf值0.55呈蓝黑色斑点(磷钼酸乙酸显色)，28D+93.05(c，1.5876，MeOH)，UVmax(MeOH)：220nm(log 4.08)。IR cm-1：3 550，3 480，2 990，2 850，1 740(s)，1 670，1 640，1 620，1 430，1 365(s)，1 320，1 250(s)，1 140，1 065，1 050，1 030(s)，965，860，810，750，600。HPLC tR 值为 8.12 min。1H 与13CNMR 数据见表 1，2。EIMS m/z： 652(M+)(.2)，635(M-OH，40)，593(100)，533(10.0)，431(8.0)，413(14.6)，317(22.3)，311(41.3)，300(8.2)，282(30.2)，253(17.6)，239(10.1)，203(6.7)，167(13.1)，127(16.5)。以上数据与文献1，2的1-hydroxy-baccatin 完全相符。表11HNMR谱解析结果质子序号化学位移(Hppm)与多重性质子数相应基团25.51d(J=3.4)1-CH-O-33.16d(J=3.4)1-CH-54.19t(J=3.0)1-CH-O-61.75(m)2.55d.d(J=14.7,9.4)2-CH2-75.48t(J=3.0)1-CH-O-96.06d(J=11.0)1-CH-O-106.22d(J=11.0)1-CH-O-136.10t(J=8.0)1-CH-O-143.321.90d.d.d(J=14.7,6.7,8.3)2-CH2-161.63s3-CH3-171.26s3-CH3-182.22s3-CH3-191.24s3-CH3203.52,2.29d.d(J=5.2,5.2)2-CH2-222.25s3-OAC242.12s3-OAC262.08s3-OAC282.04s3-OAC302.06s3-OAC322.01s3-OAC25.72d(J=7.2)1-CH-O-33.75d.d(J=2)1-CH-54.91d.d(J=2.0,9.4)1-CH-O-62.35m2-CH2-73.95d(J=7.2)1-CH-O-105.42s1-CH-O136.23br.t(J=8.2)1-CH-O142.20m2-CH2161.20s3-CH3171.08s3-CH3181.74s3-CH3191.72s3-CH3204.40s2-CH_z-0222.52s3-COCH324.79d(J=8.5)1-CH-O-35.80d(J=8.0)/td1-CH-N47.04d(J=8.5)1-NH-Ar-H7.40m10Ar-H7.61t(J=7)1Ar-H7.75d(J=7)2Ar-H8.16d(J=7)225.51s1-CH-O-33.23s1-CH-54.97s(br.)1-CH-O-62.60 1.50m.m2-CH2-74.55dd(J=6.5,10.5)1-CH-O-95.98s(br)1-CH-O-106.02s(br)1-CH-O-134.77s(br)1-CH-O-142.35m2-CH2-161.29s3-CH3171.09s3-CH3181.80s3-CH3191.86s3-CH3204.42 4.53dd(J=7.90)2-CH2-232.02s3-OAC252.08s3-OAC272.22s3-OAC3a,5a7.46m2Ar-H4a7.56m1Ar-H2a,6a8.02s(br)2Ar-H表213CHMR谱解析结果(ppm)碳序号C值碳序号C值碳序号C值175.43179.04179.90272.36277.71277.71341.60342.47339.46458.36481.97480.84577.81582.58585.44631.18635.21634.63776.21771.70770.20846.80857.17843.68971.259214.94966.681070.901075.401075.0711135.9611137.8911137.9412140.3412137.8312146.201368.951372.241366.201438.691436.301466.921543.491542.471543.391621.231625.901621.761715.341722.451727.451813.711816.661813.891920.501914.341911.252049.852073.152068.6521168.9021172.6121170.582220.692220.5522171.4323169.0623172.412322.412421.231167.3224171.4325169.20272.242521.562621.52355.0226167.8027169.595166.932725.602821.861a129.321a130.4229169.872a130.582a129.813028.533a126.823a128.3231169.504a133.604a133.023220.695a126.825a129.816a130.586a128.321b133.552b128.923b128.734b128.205b128.736b128.921c131.912c131.593c127.034c135.585c127.036c128.59致谢：1H和13CNMR 谱及 FABMS. EIMS 谱均由军事医学院仪器测试中心代测，植物样品的采集及鉴定由本所生药室完成。参考文献1Della casa,et al. Chem Commun,1970:2162Miller RW,et al.J Org Chem,1981,46:14693Mcla