分子生物学(重点波波版)ni.doc

医学分子生物学（波波）绪论名解1.分子生物学：是一门从分子水平研究生命现象、生命本质、生命活动及其规律的科学。2.医学分子生物学：是分子生物学的一个重要分支，又是一门新兴的交叉学科，它是从分子水平上研究人体在正常和疾病状态下的生命活动规律，从分子水平开展人类疾病的预防、诊断和治疗研究的一门学科。问答题1.分子生物学与生物化学有何联系和区别？ （联系：分子生物学是从分子水平上研究生物学，研究生命现象、生命活动及其规律，研究的重点是生物学；而生物化学是从分子水平上研究生命化学现象，重点是化学；从科学范畴讲，分子生物学包括了生物化学，从研究的基本内容上讲，分子生物学的许多内容属于生物化学的范畴，两门学科“你中有我，我中有你”。 区别：分子生物学着重研究细胞中遗传信息传递和代谢调节的问题，生物化学着重研究大小分子在生命活动的代谢过程。两者在分离、纯化生物分子时，可能采用同样的办法，但在分别探索其研究内容时，却会采用明显不同的方法。）2.分子生物学研究的主要内容？ （分子生物学都是围绕核酸和蛋白质进行的，从核酸和蛋白质的结构与功能、基因组的结构与功能到基因的复制、表达、调控及其生物学效应，从生物大分子之间的相互作用到这些相互作用构成的细胞间通讯和细胞内信号转导，从对基因的结构、功能、表达调控的分析到基因的制备、改造、调控、应用所需的各种技术体系，构成了分子生物学的基本内容。）3.分子生物学在医学上的应用？ 人体发育调控和人体功能调控：发育、分化与衰老的机理； 细胞增殖调控的机理； 神经、内分泌和免疫调控的机理。基因与疾病：基因与疾病关系的研究； 基因诊断； 基因治疗。生物工程与生物制药：基因工程； 酶工程； 蛋白质工程； 微生物工程； 细胞工程； 转基因动、植物。预防医学：疫苗研究； 环境监测与净化。遗传信息的表达名解1.核酸：是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），DNA存在于细胞核和线粒体内，RNA存在于细胞质和细胞核内，均是遗传的物质基础。2.基因：是DNA分子中的某一特定的核苷酸序列，经过复制可以传递给后代，经过转录和翻译可以产生维持正常生命活动的生物大分子（RNA和蛋白质），即基因可以转录成RNA的基因组片段，基因有可遗传性、可表达性、可移动性、不连续性和重叠性的特征。3.SD序列：在紧靠起始密码子（AUG）的上游有一段约68个核苷酸的序列5AGGAAAU3,是核糖体与mRNA的结合部位，叫ShineDalgarno序列，简称SD序列。4.启动子：是基因5段上游的一段启动基因转录的核苷酸序列，是RNApol和其他转录因子结合的部位。5.内含子与外显子：大多数真核基因的编码序列被不能编码的额外序列所分隔，以不连续的方式排列在DNA上，因此这类基因也叫断裂基因，不编码的序列称内含子，被分隔的编码序列叫外显子。6.原核生物RNA聚合酶：亚基，核心酶，结合启动子，连接和 亚基，核心酶，结合碱基，合成RNA 。亚基,核心酶，结合启动子10区（TATAbox）亚基，全酶，结合启动子35区，起始转录。7.真核RNA聚合酶：包括RNA pol I、RNA pol II、RNA pol III三种，但与原核生物的RNA pol不同，真核RNA pol不能单独与启动子结合，必需要有转录因子的参与。问答题1.原核基因的结构有何特征？ 析：原核基因常以操纵子的形式作为表达和调控的基本单位，它包括功能上彼此相关的结构基因和调控部位，受调节基因产物的调节，转录产物为单个多顺反子。参与此过程包括原核RNA聚合酶（见上述）和原核启动子。 原核启动子：启动子是基因5端上游的一段启动基因转录的核苷酸序列，是RNA pol其它转录因子结合的部位。 原核启动子位于转录起始点（IS）上游510bp处，由-35区和-10区组成，从启动子到终止子为一个转录单位。 -10区的碱基序列较保守，由A和T组成，大肠杆菌的-10区为TATATA,故称TATAbox。 -35区的碱基序列以TTG最为保守，大肠杆菌的-35区为TTGACA，因子识别并结合-35区，RNA聚合酶的特异性由因子决定，而启动子的强弱则由-35区和因子的特异性和亲和力决定。 2.真核基因的结构有何特征？ 析：大多数真核基因的编码序列被不能编码的额外序列所分隔，以不连续的方式 排列在DNA上，因此这类基因也叫断裂基因，不编码序列称内含子，被分隔的编码序列叫外显子，因此，从DNA转录来的初级转录物是mRNA的前体，称核不均一RNA，在进行翻译前必须通过转录后加工出去内含子，形成成熟mRNA，这一过程叫拼接；由于真核基因不组成操纵子，不形成顺反子，真核基因表达受到多级调控系统的调节，包括3种真核RNA聚合酶（见上述）以及真核基因的II型启动子。 真核基因的II型启动子：真核基因的TATA box为TATAA/TAT/A，并且距离IS较远。 没有-35区由于II型启动子无-35区，也没有因子，因此，RNA pol II与启动子的结合至少与4中转录因子有关。3.何谓融合表达和非融合表达？ 非融合表达：是指所表达的外源蛋白的N端不含任何其它的异源性氨基酸，因此要求起始位点（ATG）必须位于要表达的外源基因片段的5端，将目的基因插入合适的启动子和SD序列的下游，就可以在原核表达系统中表达出非融合蛋白常用的非融合表达措施是分泌表达非融合表达的缺点是外源蛋白容易被细菌的蛋白酶分解。 融合表达：外源蛋白在异园宿主细胞中的表达量通常非常低，也很容易被宿主蛋白酶水解，解决的方法之一就是将目的蛋白与宿主的蛋白共价连接起来，形成融合蛋白，这种表达方式叫融合表达。4.试述外源基因的几种系统？ 酵母表达系统：载体的特点（选择性标记；启动子；转录、翻译、终止信号；加尾信号；复制起始位点ori） 载体类型：质粒载体，广泛用于表达外源蛋白(附加体型载体、复制型载体、酵母着丝粒质粒。) 整合型载体，不含酵母自主复制序列，故不能独自在细胞中复制，必须整合到酵母染色体中后才能使外源基因得以表达。 酵母人工染色体（YAC）是利用DNA重组技术组装的人工染色体，是目前容纳外源基因容量最大的载体，且高度稳定。 杆状病毒载体系统：常用的杆状病毒表达系统是AcMNPV，为环状dsDNA，通过构建一个转移载体可以将外源基因转移到病毒基因组中，实现外源基因在昆虫细胞中的表达。 转移载体是一个大肠杆菌质粒，含有一段AcMNPV的NDA序列。 哺乳动物细胞的表达系统：人腺病毒载体。基因表达的调控名解1.基因表达调控：在同一机体的各种细胞内含有相同的遗传信息，即相同的结构基因，他们在各种细胞中并非同时表达，而是根据机体生长、发育、繁殖的需要，随着环境的变化，有规律的选择性、程序性、适度地表达，以适应环境，发挥其生理功能 。2.顺式作用元件：无论是原核生物还是真核生物，在转录起始复合物形成过程中，RNA聚合酶与启动子的结合都是关键一步；真核生物的RNA pol I、II、III，识别不同的启动子，需要不同的转录因子：TF I、TF II、TF III。真核生物的转录起始复合物的形成过程有三步：TF II D结合TATA 盒；RNA pol识别并结合TF II DDNA复合物，形成闭合的复合物；其它转录因子与RNA pol结合，转录起始部位的DNA 解链，形成转录起始复合物，开始转录。3.反式作用因子：真核细胞内含大量的序列特异性的DNA 结合蛋白，其中一些蛋白的主要功能是使基因开放或关闭，称为反式作用因子，这是一类细胞核内蛋白因子，是结合特异的DNA序列所必需的。其特点是：有三个功能结构域DNA识别结合域，转录活性域，结合其它蛋白的结合域。能识别并结合上游调控中的顺式作用元件。对基因表达有正性和负性调控作用。问答1.简述原核生物基因表达的调控？ 转录水平的调控 影响转录的因素：启动子：启动子决定转录方向及模板链； 启动子决定转录效率。 因子：因子与RNA聚合酶结合后，转录启动后，因子就解离，游离的因子不能直接结合特定的DNA。 阻遏蛋白:阻遏蛋白是一类在转录水平对基因表达产生负调控作用的蛋白质。 正调控蛋白：当调控蛋白结合于特异DNA序列后促进基因的转录，这种基因表达调控的方式称为正调控。包括分解代谢物质基因活化蛋白CAP蛋白和大肠杆菌氮代谢基因的激活蛋白ntrC。 倒位蛋白：是一种位点特异性的重组酶。 RNA聚合酶抑制物 衰减子：是一段能减弱转录作用的序列。 转录的调控机制 ：乳糖操纵子调控的机制:Ecoli的乳糖操纵子有三个结构基因Z、Y、A，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰化酶。由启动子、操纵基因和CAP结合位点共同构成乳糖操纵子的调控区。 翻译水平的调控 SD序列对翻译的影响：SD序列的顺序及位置对翻译的影响：一般与核糖体结合强的SD徐磊翻译效率较高。 mRNA二级结构隐蔽SD序列的作用。 mRNA的稳定性：细菌mRNA通常是不稳定的，其降解速度是翻译调控的另一个重要机制； 翻译产物对翻译的调控：某些产物可对自身的翻译产生调控作用，如核糖体蛋白和翻译终止因子RF2调节自身的翻译。 小分子RNA的调控作用：包括调整基因表达产物的类型和低水平表达基因的调控。2.试述真核生物基因表达的调控？ DNA水平的调控：有以下几种方式染色体丢失（如线虫） 基因扩增 基因重排 染色质结构对基因表达的调控作用 转录水平的调控：转录起始复合物的形成反式作用因子转录起始的调控：反式作用因子的活性调节 反式作用因子与顺式元件的结合 反式作用因子的作用方式（成环、扭曲、滑动） 反式作用因子的组合式调控作用。转录后水平的调控：5端加帽和3端多聚腺苷酸的调控保证了mRNA在转录过程中不被降解。 mRNA的选择剪接对基因表达的调控作用。 mRNA的运输是受到控制的。翻译水平的调控：翻译起始的调控，受阻遏蛋白、起始因子、5AUG、Mrna 5端非编码区长度等因素调控和影响。 mRNA稳定性调节； 小分子RNA对翻译水平的影响。翻译后水平的调控：新生肽链的水解；肽链中氨基酸的共价修饰；通过信号肽分拣、运输、定位。组织特异性表达和时相性：多细胞生物不同发育阶段相应的基因严格按照一定时间顺序开启或关闭，即基因表达的时间特异性；基因产物在个体按不同组织空间顺序出现，即基因表达的空间特异性。核酸的体外扩增名解1.PCR：即聚合酶链反应，是一种快速获取大量单一核酸片段的技术。2.逆转录：是指以RNA为模板，利用宿主细胞中4种dNTP为原料在引物3端以53方向合成与RNA互补的DNA链的过程，此法则与中心法则相反，故称逆转录；逆转录并非转录，而是一种复制形式，必须有引物存在才能完成 。3.逆转录酶：在逆转录过程中以RNA指导的DNA聚合酶称为逆转录酶，是在某些病毒（RNA肿瘤病毒）中发现的，逆转录酶是逆转录病毒RNA编码的，是多功能酶：具有RNA指导的DNA聚合酶活性；具有RNA酶H活性；具有DNA指导的DNA 聚合酶活性，以逆转录合成的单链DNA为模板合成互补DNA链。4.cDNA：我们通常把以mRNA为模板、在逆转录酶的作用下在体外逆转录合成的双链DNA简称cDNA。5.引物:PCR反应中有两条引物，即5端引物和3端引物，设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5端引物与位于待扩增片段5端上游的一小段DNA序列相同；3端引物与位于待扩增片段3的一小段DNA序列互补。 引物设计的基本原则：引物长度常用20bp左右；引物碱基ATCG最好随机分布；引物内不应该出现互补序列；两个引物之间不应该出现互补序列；引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%；引物3端碱基的最末及倒数第二个碱基应该严格要求配对，最佳选择是GC。问答1.试述PCR的概念及原理? 概念：PCR即聚合酶链反应，是20世纪80年代科学家们建立起来的一种快速获取大量单一核酸片段的技术。 基本原理：PCR技术的原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物，由变性退火延伸三个基本步骤构成。 变性：模板DNA加热至95C后，双链DNA解离形成单链，以便与引物结合。 退火：模板DNA解离形成单链后降温到55C，引物与单链互补结合，形成杂交链。 延伸：DNA模板引物结合物在Taq DNA 聚合酶的作用下，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。2.试述RTPCR的原理？ 原理：模板mRNA以mRNA为模板合成一小段cDNA反转录酶除去杂交双链中的mRNA合成单链DNA除去杂交链中的大部分mRNA合成一段双链DNA除去mRNA完成双链DNA 的合成。DNA序列的测定1.试述Sanger法测序的基本原理？ DNA链中的核苷酸是以3，5磷酸二酯键相连接，合成DNA 所用的底物是2脱氧核苷三磷酸（dNTP），在Sanger双脱氧链终止法中被掺入了ddNTP，当ddNTP位于链延伸末端时，由于他没有3OH，不能再与其它的脱氧核苷酸形成3,5磷酸二酯键，DNA合成便在此处终止，如果此处掺入的是一个ddATP，则新生链的末端就是A，以此类推可以通过掺入ddTTP、ddCTP、ddGTP，则新生链的末端为T,C或G，根据这个原理，Sanger建立了双脱氧链终止测序法。2.试述MaxamGilbert化学修饰法的原理？ 原理：用化学试剂处理具末端放射性标记的DNA片段，造成碱基的特异性切割，由此产生一组具有各种不同长度的DNA链的反应混合物，经凝胶电泳按大小分离和放射自显影，便可根据X线片底板上显示相应带谱，直接读出待测DNA片段的核苷酸序列。在进行碱基特异性化学切割反应前，首先对待测DNA片度作末端标记，使其末端带上放射标记，如果待测DNA是双链，必须使其形成末端标记的单链。 核酸的分子杂交名解1.核酸分子杂交：是指具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基配对原则形成双链的过程，杂交的双方分别称为探针和待测核酸，杂交后形成杂交分子。2.Southern印迹杂交：是指DNA与DNA的杂交，将电泳分离的待测DNA片段转印并结合到一定的固相支持物上，然后用标记的DNA探针监测待测DNA的一种方法。3.Northern印迹杂交：是指将待测RNA样品经电泳分离后转移到固相支持物上，然后与标记的核酸探针进行固液相杂交，以检测RNA的方法。4.探针：在杂交体系中已知的核酸序列称为探针，探针通常用于进行核素或非核素示踪标记。问答1.试述分子杂交的概念及原理？ 原理：具有互补序列的两条单链核酸分子在一定条件下碱基互补配对结合，重新形成双链；在这一过程中，核酸分子经历了变性和复性的变化，以及复性过程中分子间键的形成和断裂等。杂交的双方是待测核酸序列和已知核酸序列。 （概念见名解）2.分子杂交的方法有哪几种？ 析：Southern印迹杂交；Northern印迹杂交；斑点及狭缝印迹杂交；原为杂交；液相杂交。3.目前常用的探针有哪几种？ 析：cDNA探针；基因组DNA探针；寡核苷酸探针；RNA探针。4.探针标记的方法有哪几种？ 析：缺口平移法；随机引物法；PCR标记法；末端标记法。基因芯片名解1.基因芯片：DNA芯片也叫基因芯片，是指在固相载体上有序地、高密度地排列固定了大量的靶基因或寡核苷酸，也叫探针，这些被固定的分子探针在基质上形成高密度的DNA 微阵列，因此，DNA芯片又叫DNA微矩阵。 2.SNP：染色体的某个位点上存在单个碱基的变化，如果在人群中的频率超过1%，则认为是单核核苷多肽（SNPs），其用途：基因连锁分析；人群中寻找SNPs位点；检测保守基因中的点突变；病例与对照间的相关分析等。问答1.基因芯片的概念及其原理？ 原理：基因芯片技术是建立在Southern blot基础之上的，可以说它是Southern blot的改进和法则，它的原理是：变性DNA加入探针后在一定温度下退火，同源片段之间通过碱基互补形成双链杂交分子。 （概念见名解）2.DNA芯片的种类？ 表达谱基因芯片:用于基因功能的研究。诊断芯片:在DNA 或 RNA水平上用于疾病诊断。检测芯片：用于HBV、HCV、结核杆菌等病原体检测和商检。3.基因芯片的应用？ 杂交测序和基因作用；检测基因突变；基因表达分析；基因芯片在肿瘤研究中的应用(寻找肿瘤相关基因；肿瘤基因表达谱研究；肿瘤分子生物学研究；肿瘤诊断)；基因芯片在药物研究中的应用（药物筛选；知道合理用药）基因芯片在微生物菌种鉴定中的应用；基因芯片在病原体致病机制中的应用（致病机制研究；病原体致病机制的研究）；基因芯片在军事司法方法的应用（检测生物站病原体，研制生物战保护剂；DNA指纹鉴定、血型鉴定。）基因工程与干细胞工程名解1.工具酶：是一类用于DNA重组过程中不同DNA分子的制备、切割、修饰、扩增、核酸分子的标记以及它们的核苷酸序列测定的酶，大多数分子克隆工具酶都是来自不同的微生物和噬菌体。 2.克隆载体：分子克隆载体都具备以下3个最基本的结构：至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复制；至少应有一个克隆位点，以供外源DNA插入；至少应有一个遗传标记基因，以指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞。 3.表达载体：这类载体主要用于研究基因的表达或是用于大量生存一些有用的转录产物或蛋白质，有的也可用于cDNA文库的建立，包括工具酶和载体。4.基因工程：原称遗传工程，又称基因操作、重组DNA。是指采用类似于工程建设的方式，按照预先设计好的蓝图，将一种或多种生物体的基因与载体在体外进行并接重组构建成杂种DNA分子，然后转入另一种生物体内，以改变生物原有的遗传特性并表达出新的性状，获得新品种，产生新产品，或是研究基因的结构和功能，因此供体、受体、载体是基因工程的三大要素。 5.干细胞：处于分化过程中，具有分裂增殖能力、并能分化产生一种以上“专业”细胞的原始细胞称为干细胞问答1.基因工程的概念及原理？ 原理：利用载体DNA在受体细胞中自主复制的特性，与外源基因重组，通过载体分子的扩增提高外源基因在受体细胞中的剂量，借此提高其宏观表达水平。 筛选、修饰和重组启动子、增强子、操作子、终止子等基因的转录调控元件，并与外源基因精细拼接，提高其表达水平。 选择、修饰和重组核糖体结合位点及密码子等mRNA的翻译调控元件，强化受体细胞中蛋白质的是你怪物合成过程。 通过调控基因工程菌(即反应器)的增殖速度和最终数量，提高外源基因的表达产物。 （概念见名解）2.基因工程的步骤？ 析：基因工程的整个过程由工程菌的设计构建和基因产物的生产两大部分组成，主要过程如下从供体细胞中分离出基因组DNA，用限制性内切酶分别将外源基因和载体分子切开。用DNA连接酶将外源基因接到载体分子上，形成重组DNA分子。借助于细胞转化手段将DNA重组分子导入受体细胞中。短时间培养转化细胞，以扩增DNA 重组分子或使其整合到受体细胞的基因组中。筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞。 以上过程简称：切、接、转、增、检。3.干细胞的分类和分化特征？ 干细胞可分为胚胎干细胞、精原干细胞、成体干细胞。 分化特征：干细胞是一种分化全能性细胞，在一定条件下，可分化形成胚胎，称为全能性干细胞；但是某些干细胞只能分化成组织不能分化成个体，称这种干细胞具有多能性。 干细胞可通过其转分化和去分化使成体干细胞仍具有相当的可塑性。转基因动物名解1.基因打靶与基因敲除：是指通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能；若定向敲除某个基因，称为基因敲除。2.转基因动物：是指用人工方法将外源基因导入或整合到基因组内，并能稳定传代的一类动物。问答1.转基因动物的基本原理和基本方法？ 原理：是将目的基因用显微注射等方法注入实验动物的受精卵或着床前的胚胎细胞中，使目的基因整合到基因组中，然后将此受精卵或着床前的胚胎细胞再植入受体动物的输卵管中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物。 方法：显微注射法胚胎干细胞法逆转录病毒法精子载体法电泳冲法转基因但动物外源DNA的检测。2.基因打靶的必备条件？基因与疾病名解1.遗传病：是指由于遗传物质的改变而引起的疾病。2.癌基因：是细胞内控制细胞生长的基因，具有潜在的诱导细胞恶性转化的特性，在癌基因异常表达时，其产物可使细胞无限分裂。2.原癌基因：正常细胞内存在能表达的病毒癌基因的同源序列，这类基因称为细胞癌基因，由于这类基因是存在于正常细胞当中的，并具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能，为了与被激活后能使细胞恶性转化的癌基因区分开，而将正常细胞内未被激活的癌基因称为原癌基因。3.抑癌基因：又称抗癌基因，是指存在于正常细胞内的一大类可抑制细胞生长并具有潜在抑癌作用的基因，当这类基因发生突变、缺失或失活时可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生。问答1.简述遗传病的分类及其发病机制？ 染色体病：染色体数目或结构异常，发病率较低，通常表现为累及多器官、多系统的临床综合症，如21三体综合症。 单基因病：仅涉及单个基因的突变，表现相对简单而更具有特征性，如地中海贫血病、血友病。 多基因病：发病涉及多种基因和多种环境因素，不表现为孟德尔遗传，发病率最高； 线粒体病：线粒体DNA中基因突变导致，实质上也属单基因病，呈母性遗传。 体细胞遗传病：多见于癌症。 机制都是由于基因结构发生了异常所致，从根本上说，都是遗传物质DNA发生了变异； 诱变因素(碱基和核苷类假物、烷化剂、抗生素、染色剂、亚硝酸盐)导致(碱基类似物诱发突变、改变DNA化学结构、移码突变、紫外线及其它辐射引起、DNA化学结构的变化。)2.为甚麽说所有的疾病都是基因病？ 析：所有的疾病都与人类的基因有关，都是人类基因组与病原基因组中的有关基因相互作用的结构； 所有的药物都是通过基因起作用的，通过修饰基因改变基因的表达调控。 基因的表达受外界因素的调节。 基因的多态性，个体之间基因存在差异性，导致了不同个体对疾病的易感性。3.癌基因和抑癌基因与肿瘤发生的关系？ 析：总的讲，肿瘤的发生需要多个癌基因激活和抑癌基因失活产生协同效应； 癌基因的恶性激活：原癌基因点突变，变为有活性的癌基因。原癌基因获得外源启动子而激活。原癌基因甲基化程度降低而激活。原癌基因的拷贝数增加。基因易位或重排使原癌基因激活。 激活后的原癌基因导致肿瘤发生。 抑癌基因失活：抑癌基因对细胞分裂分化的调控和癌变抑制，对肿瘤的治疗，特别是肿瘤的基因治疗有十分重要的作用，当其失活后可导致肿瘤的发生，下面就以P53基因为例简单说明。 P53基因变异或缺失是许多肿瘤发生的原因之一。 基因诊断与基因治疗 名解 1.基因诊断：是以DNA和RNA 为诊断材料，通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。 2.基因治疗：是指通过在特定靶细胞中表达该细胞本来不表达的基因，或采用特定方式关闭、抑制异常表达基因，达到治疗疾病的目的的治疗方法。 问答 1.基因诊断的基本方法与技术？ 常用的方法是分子生物学技术核酸分子杂交（前面讲过）；聚合酶链式反应(PCR)；单链构象多肽性检测（SSCP），是一种检测点突变的方法。限制酶酶谱分析。DNA序列测定，是检测最直接、最准确的方法。DNA芯片技术，可对检测基因结构、突变、多态性以及表达情况进行分析。 基本方法:基因突变的诊断诊断已知的点突变可采用PCR/ASC探针检测。诊断未知的突变可采用PCR/SSCP方法。少数核苷酸缺失或插入的诊断可用检测点突变的方法。大片段丢失或插入的诊断可用PCR技术。基因重排的诊断可用PCR技术检测。基因扩增的诊断可用Southern印迹杂交分析。 多态性分析限制性片段长度多态性分析可用RFLP分析法，包括限制酶酶切图谱直接分析法和RFLP间接分析法。DNA重复序列多态性分析； 基因表达异常的诊断mRNA的相对定量分析可用斑点杂交或狭缝杂交以及RTPCR法；mRNA 的绝对定量分析可用RTPCR/竞争性PCR法；mRNA长度分析可用Northern杂交法。 外源DNA检测当外源病原体侵入机体后可用核酸分子杂交或PCR