(胶体金法)生产工艺规程模板

文件名称：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）生产工艺规程文件编号： TS-733-03 版本版次: A0 第20页 共23页受控状态： 1. 适用范围适用于乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（胶体金法）的生产和质量控制。2. 职责研发部：制定本规程。生产管理部：执行本规程质量管理部：按本规程执行，监督本规程的执行情况。3. 内容3.1.依据乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）产品标准3.2.产品名称、剂型、规格3.2.1名称：(1) 商品名：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）（2）英文名：Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface Antigen(Colloidal Gold Immunochromatagraphic Assay)（3）汉语拼音名：Yixing Ganyan Bingdu Biaomian Kangti Jiance Shiji（jiaotijin Fa）3.2.2.类型：三类6840体外诊断试剂。3.2.3.规格：100T/盒(25T/筒*4筒)（无卡）；25袋/盒（1支/袋）、50袋/盒（1支/袋）3.3.产品概述乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法，在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原，在硝酸纤维素膜上检测线（T）和质控线（C）分别包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG。当检测样本为阳性时，样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线（T）时与预包被的重组乙肝表面抗原反应，形成免疫复合物而显现红色条带，游离金标记的兔IgG则在质控线（C）与羊抗兔IgG结合显现红色条带。阴性样本则仅在质控线（C）显色。3.4.试剂盒组成、储存、有效期3.4.1.试剂盒组成：组件100T/盒25袋/盒（1支/袋）50袋/盒（1支/袋）装量数量装量数量装量数量试纸条25条/筒4筒无无无无试纸卡无无1支/袋25袋1支/袋50袋样品稀释液2ml4瓶2ml1瓶2ml2瓶说明书1份1份1份1份1份1份3.4.2储存条件：2-30保存。3.4.3.有效期：24个月。3.5.生产工艺流程图文件末（23页）。3.6.生产工艺过程及工艺条件3.6.1配液根据以下各配方，按各相关试剂配制作业指导书进行配制。（1）原料名称用量配制环境：（2）原料名称用量配制环境：（3）原料名称用量配制环境：3.6.2样品稀释液分装按照液体分装作业指导书，根据相应规格的装量要求进行分装，分装量 规格 + 附加量。如下表所示（单位：ml/瓶）：标示量附加量装量15ml0ml15ml3.6.3 胶体金制备原料名称用量烧金溶液A烧金溶液B超纯水制备环境：金标车间配料间（十万级洁净区）（1） 量取 ml超纯水到适当大小的烧瓶中；（2） 量取 ml烧金溶液A并加入烧瓶中；（3） 水沸腾后，加入已经平衡的烧金溶液B ml；（4） 水继续沸腾5分钟关闭加热搅拌器，并将烧瓶移至桌面，用铝箔纸盖住瓶口，让胶体金自然冷却。（5） 胶体金的储存：28；有效期6个月。3.6.4胶体金标记3.6.4.1根据试样验证结果，量取胶体金，快速搅拌中加入0.2MK2CO3液，混匀后，快速搅拌中加入相应量的乙肝抗原或兔IgG(乙肝抗原和兔IgG分开标记)，混合均匀后，反应30分钟。3.6.4.2 终止：充分反应后在搅拌中加入金标记过程终止液（20ul/1ml金溶液）；继续搅拌30分钟直至混匀。3.6.4.3将胶联溶液离心，9000转离心6分钟，收集沉淀并用金工作液定容至总体积的1/10；3.6.4.4储存： 28，有效期6个月。3.6.5 铺金液配制3.6.5.1用工作液将1/10体积的乙肝病毒表面抗原金标记物沉淀放大10倍；兔IgG金标记物沉淀按1/3乙肝病毒表面抗原沉淀的量，加至上述乙肝金标工作液中（即兔IgG金标记物沉淀为乙肝的1/3）3.6.5.2按0.2mg/ml的量加入抗RBC到铺金液中；3.6.6 小样试验：在铺金和划膜之前，应首先将待铺的基因重组抗原-胶体金复合物溶液，先铺一条玻纤（6mm310mm）上，用配好的质控线液、检测线液划膜一张，与其他组分组合在一起，进行检测，要求：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20。灵敏度：灵敏度参考血清，呈阳性反应。精密性：连续重复测定精密性参考品10次，反应结果应均为阳性，且显色度均一。3.6.7 铺金3.6.7.1按每张玻纤可以铺金36ml计算金标液的体积3.6.7.2按计算好的体积在每张玻纤上铺金，并用圆形试管刮均匀。3.6.7.3 30%湿度以下，3740干燥1824小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。3.6.7.4储存：保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。3.6.7膜包被按照划膜机标准操作规程，以“252”泵速（对应速度2.7ul/cm），将质控线液和检测线液均匀地划在膜上，质控线划在距膜顶端12.10.1cm处，检测线划在距膜顶端12.5cm0.1cm处，质控线与检测线相距5mm1mm。3.6.7.2 30%湿度以下，3740干燥1824小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。3.6.7.3储存：保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。3.6.8 样品垫的准备3.6.8.1按每张玻纤可以铺液36ml计算全血样品垫处理液的体积3.6.8.2按计算好的体积在每张玻纤上铺液，并用圆形试管刮均匀。3.6.8.3 30%湿度以下，3740干燥1824小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。3.6.8.4储存：保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。3.6.9半成品检测：以上生产出来的胶体金、胶金垫、包被膜、分装好的样品稀释液均应作为半成品请检，质量管理部QC按照半成品检验作业指导书检验合格方可进入下一道工序。3.6.10 组装3.6.10.1 按照贴膜组装工序作业指导书的规定，将包被好的NC膜贴在塑料大卡上。 3.6.10.2各组成部分的切割：各组分用切割机切割成以下大小：金标垫：6mm 310mm 样品垫：15mm 310mm 吸水垫：20mm310mm不干胶纸：13mm 310mm3.6.10.3 层压将上述切割好的材料进行贴膜制成乙型肝炎表面抗体胶体金试纸条，各膜层叠关系如下：1）2) T线 C线3） 3) 5) （4）6)1） 不干胶纸2） 样品垫3）金结合物垫4）包被有检测线（T线）和质控线（C线）的硝酸纤维素膜5）吸水垫6）塑料衬片3.6.10.4 层压参数金标垫2片，第一片搭上NC膜2mm， 第二片搭第一片3mm ；样品垫15mm，搭上金标垫2mm；吸水垫20mm，搭上NC膜2mm，不干胶13mm，搭上露出的NC膜2mm。 3.6.11切条（1）组装环境条件的控制在相对湿度30%以下，并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过2小时。（2）按照切条工序作业指导书使用切条机，将组装好的乙肝病毒表面抗体检测试剂切割成宽度为2.5mm0.1mm试条，切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。 3.6.12检测卡的装配按照不同规格的要求，需要进行检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC卡中，再用压卡机进行压卡，装条时应注意检查条有无划痕污渍，宽度是否符合要求；PVC卡外观应清洁，平整，无变形，底面配套性好，压卡应注意调节松紧度，避免将卡压破或变形。3.6.13内包装3.6.13.1 成品规格为25支/盒、50支/盒的，所对应半成品的内包装：（1）装卡：单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中，卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向，确保无漏装。（2）密封。密封时应检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确，使用封口机进行封口。3.6.13.2 成品规格为100支/盒的，所对应半成品的内包装装筒，将无卡试纸以25支/筒的规格装入筒中，放入干燥剂，然后封筒。3.6.14 外包装（1）不干胶标签批号、生产日期、有效期打印：以试纸条组装日期为“生产日期”，并由此推算出“有效期至”，批号按照批号管理规程的规定设置。按照批号打印机使用、清洁、维护、保养标准操作规程进行操作打印标签、包装盒上的“三期”。（2）贴签：在上述装好检测卡的铝箔袋及装好试纸条的筒上贴上标签。（3）成品组装： 纸盒内组份：组件100T/盒25袋/盒（1支/袋）50袋/盒（1支/袋）装量数量装量数量装量数量试纸条25条/筒4筒无无无无试纸卡无无1支/袋25袋1支/袋50袋样品稀释液2ml4瓶2ml1瓶2ml2瓶说明书1份1份1份1份1份1份按包装盒标准折叠方法折好包装盒，根据成品组分名称、规格及数量，分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书。包装组组长每盒清点查看，合格后用封口签（合格证）封口。（4）储存：230，有效期24个月。3.6.15.成品检定：抽检量为3%，最小抽检量为500人份。经质量管理部QC检测合格，QA做生产记录审核后开具成品放行审核单方可入库。3.7 质量标准3.7.1.主要原辅料质量标准及依据：（1）重组乙肝抗原质量标准性状肉眼观察不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒蛋白浓度用福林-酚法，以Sigma公司生产的牛血清白蛋白作对照，蛋白含量以毫克/毫升表示，浓度为0.5-10.0mg/ml；纯度和分子量用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10g，电泳带显示无杂蛋白。分子量：效价ELISA检测，效价应大于110000功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置37放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合上述要求。贮藏条件-20冻存依据抗原质量标准及检验操作规程 （2）兔IgG抗体蛋白浓度经OD280方法检测浓度5mg/mL。纯度用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10g，电泳带显示无杂蛋白功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置37放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。且背景干净，质控线2分钟内显出，在10-30ug/ml包被时具有活性标记时具有活性。贮藏条件-20冻存依据抗体质量标准及检验操作规程 （3）羊抗兔IgG蛋白浓度经OD280方法检测浓度5mg/mL。纯度用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10g，电泳带显示无杂蛋白功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置37放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。且背景干净，质控线2分钟内显出，在0.5-2.0mg/ml包被时具有活性标记时具有活性。贮藏条件-20冻存依据抗体质量标准及检验操作规程 （4） 兔抗RBC纯度用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10g，电泳带显示无杂蛋白活性琼脂免疫双扩试验，测定效价应不低于1：8。 功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置37放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。血球被结合，背景干净贮藏条件-20冻存依据抗体质量标准及检验操作规程 （6） 硝酸纤维素膜：Millipore Hiflow Plus 18002硝酸纤维素膜质量标准外观膜条平整，无弯曲褶皱，表面无污迹,液体表面流速稳定、迁移均匀。厚度21520m。毛细迁移速率每4cm，水的层析时间是13530s。功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置37放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。贮藏条件常温密封干燥储存依据包装材料质量标准及检验操作规程 （7） 玻璃纤维纸质量标准外观表面平整、无污迹，纤维结构均匀、致密。厚度0.50.05mm。吸水性30mg/cm2功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置37放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。贮藏条件常温密封干燥储存依据包装材料质量标准及检验操作规程 3.7.2半成品质量标准：（1）胶体金质量标准外观目视胶体金外观，呈紫红色，液面无油状漂浮物，容器底部无黑色颗粒物凝集。最大吸收峰值用紫外分光光度计对胶体金溶液进行全波长扫描，应525535nm处有单一吸收峰。贮藏条件28冷藏储存依据半成品质量标准及检验操作规程 （2）胶金垫质量标准外观胶金垫颜色应为均一的暗红-暗紫色，无蓝变等异常。胶金垫未涂有胶体金复合物的位置应为玻纤的白色，无异色；宽度均一，无破损。功能性试验与其他组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。贮藏条件常温干燥密封保存依据半成品质量标准及检验操作规程 （3）包被膜质量标准外观膜表面应洁净，无污染、破损等，如有，需用笔标出。膜的开始端与末端喷线不好的部位需用铅笔标出。包被膜干燥后，在C、T线处均没有明显的痕迹。功能性试验与其他组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。贮藏条件常温干燥密封保存依据半成品质量标准及检验操作规程 （4）样品稀释液质量标准外观所装容器与规定一致，液体澄清透明，无絮状物或沉淀。功能性试验与其他组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。贮藏条件常温密封保存依据半成品质量标准及检验操作规程 3.7.3成品质量标准：质量标准外观试剂盒外观整齐，组件齐全，数量准确包装整洁，生产批号、生产日期、有效期打印清晰正确。金标条材料附着牢固，内容齐全；试纸条不露边、不露金条、不露吸水纸；卡上的产品名称等内容印刷正确，字迹清晰。样品稀释液装量2ml0.2ml试纸条宽度试纸条宽度不低于2.5mm。液体移行速率液体移行速率不低于10mm/min。阴性参考品符合率用20份乙型肝炎病毒表面抗体阴性参考品进行检测，结果应全部呈阴性。最低检出量抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。稳定性将成品于37放置10天后，按以上方法检测上述各项，应符合上述规定贮藏条件230常温密封保存依据成品质量标准及检验操作规程 3.8.质量控制3.8.1.主要质量控制点：按生产工序和工艺特点规定生产过程中的主要质量控制点，如下表所示：工序生产内容质量控制点配液按照配方称量配制一人称量一人复核金标垫制备胶体金制备烧金容器洁净、加液量准确、迅速，应在沸腾时加液重组乙肝表面抗原-胶体金复合物制备加液量、标记时间30分钟、终止时间30分钟、离心时应保持平衡、离心转速9000转/分钟、时间10分钟。复溶液体应澄清，不得有不溶沉淀。铺金、干燥铺金应均匀，干燥时间1824小时、温度3740、湿度30%以下，储存环境：常温，湿度30%以下。膜条制备划膜、干燥质控线划在距膜顶端12.10.1cm处，检测线划在距膜顶端12.5cm0.1cm处，质控线与检测线相距5mm1mm。，划膜机泵速为“252”，干燥时间1824小时、温度3740、湿度30%以下，储存环境：常温，湿度30%以下。样品垫制备铺垫、干燥铺垫应均匀，干燥时间1824小时、温度3740、湿度30%以下，储存环境：常温，湿度30%以下。样品稀释液分装分装样品稀释液每瓶装量20.2ml，瓶盖紧密不漏液组装组装成试纸条1、金标垫6mm，2片，第一片搭上NC膜2mm， 第二片搭第一片3mm ；样品垫15mm，搭上金标垫2mm；吸水垫20mm，搭上NC膜2mm，不干胶13mm，搭上露出的NC膜2mm。2、环境湿度控制在30%以下。切条切条1、 切割成宽度为2.5mm试条，切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。 2、 环境湿度控制在30%以下。内包装试纸卡内包装1、 试纸条应安放在卡的相应位置，应确保无漏放。2、 铝箔袋封口严密，干燥剂无漏放。3、 内包装环境：湿度控制在30%以下。试纸条内包装1、 试纸条25条/筒，数量应正确。干燥剂无漏放2、 包装筒封口严密，干燥剂无漏放。3、 内包装环境：湿度控制在30%以下。外包装包装成成品1、 组分齐全，包装整洁干净。2、 三期打印清晰正确3.8.2.监控频次每个质量控制点均应在该工序生产操作开始前、操作过程中、操作结束后进行三次监控，对于用时较长工序需适当增加监控频次。3.8.3.监控方法(1) 生产前，检查人员、设备、物料、环境是否符合工艺标准，并达到相应卫生要求，检查结束后决定是否准许开始生产。(2) 检查物料名称、级别、数量、外观、状态标识、存放条件是否符合工艺要求和生产规模，原辅料、包装材料及半成品的质量是否符合要求。(3) 检查设备、仪器、器具是否有状态标识，处于清洁、完好状态。(4) 各相关的记录、凭证是否齐全，生产过程中的记录是否完整、规范。(5) 检查生产工艺规程和岗位标准操作规程的执行情况，生产现场是否有序、规范。(6) 在质量控制点工序的操作过程中实行双人核对，QA对生产全过程进行监督。3.8.4.重点工序的监控(1) 定量配料、定额包装是保证产品质量的关键工序，对物料质量、投料量是否符合要求实施重点监控。(2) 生产环境（洁净度、温度、湿度、压差）是否达标是保证生产的标准化和合格率的基本条件，实施重点监控。(3) 所有半成品生产完毕后分别取样进行质量检测，对半成品质量是否符合质量标准实施重点监控。(4) 对包装过程中的批号和有效期打印、包装数量、包装材料使用实施重点监控。3.9.主要生产设备一览表设备名称规格 / 型号数量（台）生产厂家纯化水机超纯水机电子天平磁力电热套低温高速离心机1划膜机V1.6杭州峰杭科技有限公司切条机HGS201杭州峰杭科技有限公司滚动式裁刀550-141温州市鹿城正大名片机械厂压卡机封口机超净工作台分液泵BT/601F 保定雷弗流体科技有限公司卧式冷柜打码机SMJ2上海阿凡佬3.10.技术经济指标的计算3.10.1.最低生产量：根据产品特点和生产能力确定本产品的最低生产量1万条3.10.2.物料消耗定额标准：根据1万条/批的最低生产量制定物料消耗定额标准，并以该标准作为批生产物料需求统计、经济技术指标和物料平衡计算的依据。(1)主要原辅料的消耗定额标准：根据各种试剂批制备量的确定方法，计算主要原辅料的消耗定额标准（如下表所示）。原辅料名称单位理论消耗定额标准mgmgmgmgmgmgmgmgmgmgmgulggmggg玻纤金标垫用张4.2样品垫用张5.1NC膜cm2511吸水垫张8.1不干胶cm2500cm塑料大卡条813.10.2.包装材料的消耗定额（按1万人份量核算）： 包装材料名称单位消耗定额标准100T/盒25支/盒50支/盒铝箔袋个01000010000试纸卡个01000010000包装筒个40000试剂瓶、盖个400400400标签张4001000010000说明书份100400200包装盒个1004002003.11.物