紫外分光法B(药学)

第三节基本原理,一、Lamber-Beer定律二、吸光系数和吸收光谱三、偏离Beer定律的因素四、透光率的测量误差,一、Lamber-Beer定律：,描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系,假设一束平行单色光通过一个吸光物体,续前,取物体中一极薄层,续前,讨论：1Lamber-Beer定律的适用条件（前提）入射光为单色光溶液是稀溶液2在同一波长下，各组分吸光度具有加和性应用：多组分测定,二、吸光系数和吸收光谱,1吸光系数的物理意义：吸光物质在单位浓度、单位厚度的吸光度,讨论：1）E=f（组分性质，温度，溶剂，）当组分性质、温度和溶剂一定，E=f（）；2）不同物质在同一波长下E不同；同一物质在不同波长下的E不同；3）E，物质对光吸收能力,定量测定灵敏度。,续前,2吸光系数两种表示法：1）摩尔吸光系数：在一定下，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度2）百分含量吸光系数/比吸光系数：在一定下，C=1g/100ml，L=1cm时的吸光度3）两者关系,例如：氯霉素(M=323.15)的水溶液在278nm处有吸收峰。设用纯品配制100mL含有2.00mg的溶液，以1.00cm厚的吸收池在278nm处测得透光率为24.3%,则E和为多少？,三、偏离Beer定律的因素,（一）化学因素（二）光学因素,（一）化学因素,Beer定律适用的另一个前提：稀溶液,溶液中的溶质因浓度改变而有离解、缔合、与溶剂间的作用等原因会使C与A关系偏离定律。,（二）光学因素,1非单色光的影响：物质对不同波长的光具有不同的吸收能力,照射物质的光经单色器分光后并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度和棱镜或光栅的分辨率决定为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度,续前,续前,讨论：入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状,结论：选择较纯单色光（，单色性）选max作为测定波长（E，S且成线性）（见图）,续前,2杂散光的影响：杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远。杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度改变。,3反射光和散色光的影响：反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光直接对T产生影响散射和反射使T，A，吸收光谱变形。注：一般可用空白对比校正消除4非平行光的影响：使光程，A，吸收光谱变形。,四、透光率的测量误差T（来自仪器的噪音）,影响测定结果的相对误差两个因素：T和T,T影响因素：仪器噪音,续前,1）暗噪音与检测器和放大电路不确切性有关与光讯号无关,续前,2）讯号噪音与光讯号有关,第四节紫外-可见分光光度计一、主要部件,1光源：,2单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件,续前,3吸收池：玻璃能吸收UV光，仅适用于可见光区石英不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）4检测器：将光信号转变为电信号的装置,5记录装置：讯号处理和显示系统,二、分光光度计类型和光学性能：,（一）类型1单光束分光光度计：,特点：使用时来回拉动吸收池移动误差对光源要求高比色池配对类型：721型分光光度计722型分光光度计751型分光光度计,续前,2双光束分光光度计：,特点：不用拉动吸收池，可以减小移动误差不受光源波动的影响；可以自动扫描吸收光谱,消除光源波动的影响：,续前,3双波长分光光度计,特点：利用吸光度差值定量消除干扰和吸收池不匹配引起的误差,（二）、光学性能：1、波长范围195nm-820nm2、波长准确度0.5nm3、波长重现性0.5nm4、透光率测量范围5、吸光度测量范围6、光度准确度（重铬酸钾法）7、