人类疾病动物模型

1人类疾病动物模型ANIMALMODELOFHUMANDISEASE实验动物学教研室孙伟TEL81870264一、人类疾病动物模型的意义二、人类疾病动物模型的复制原则三、影响动物模型的因素四、动物模型的分类五、常用的人类疾病动物模型六、免疫缺陷动物23第一节概述人类疾病动物模型（ANIMALMODELOFHUMANDISEASE）是指在医学研究中，具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料。人类疾病动物模型通常被简称为动物模型。通过动物模型直接，或间接反映疾病的发生和发展过程，在了解疾病的基础上开创、改进和优化疾病的治疗。4人类疾病动物模型1动物模型是一只只动物的集合。2动物模型是异常的、病态的或反常的，即患有某种疾病或已受某种损伤、毒害的动物，不是正常的活的健康的动物。3是不是模式动物呢5模式动物（MODELANIMALU是指那些能从分子水平与整体水平模拟人类生命活动的一大类生物。U秀丽线虫、黑腹果蝇、斑马鱼、小鼠四种动物是公认的模式动物。秀丽线虫生命周期35天，观察每个细胞的演变过程。黑腹果蝇繁殖迅速，染色体巨大，易于基因定位，应用于遗传和发育研究。斑马鱼应用于胚胎发育机理和基因组研究。6一、人类疾病动物模型的意义1、避免人体实验造成的危害。2、提供发病率低、潜伏期长和病程长的疾病材料。3、可以严格控制实验条件，增加实验材料的可比性。4、样品易得，分析实验简化。5、有助于更全面地认识疾病的本质。71避免直接实验对人体所造成危险。古人尝白草肿瘤损伤中毒82临床上平时不易见的疾病可以随时复制发病率低遗传疾病，传染病，内分泌疾病潜伏期长动脉粥样硬化病程长慢性哮喘，甲亢放射病，毒气中毒，烈性传染病93增加方法学上的可比性年龄，性别，体质，遗传，社会因素等，都对疾病发生发展起着一定的影响作用。动物模型，人为设计，遗传背景等各项条件都很清楚，或可以控制，因此可以排除外因干扰。104样品易得，实验方法简化动物模型，可按需要采集各种样品，其中包括处死收集标本。取材方便，简化了试验方法。5有助于了解疾病的本质临床研究带有一定的局限性同一病原体对人和动物的感染观察遗传因素对疾病发生发展的影响可以用单一病因短时间复制出人类疾病11二、人类疾病动物模型的复制原则相似性明确诊断，它是否是一个独立的疾病单元。重复性如在相近条件下，他人能够复制。可靠性在研制与复制的过程中有基本同一的操作规程、技术参数与观察指标等。完整性显示某种疾病从发病到转归的整个变化过程。易行性和经济性尽可能选用小动物。12三、影响动物模型的因素1致模因素对动物模型复制的影响致病因素，发病机理，临床症状2动物因素对动物模型复制的影响（1）动物种类的影响；（2）动物品系的影响；（3）年龄和体重的影响；（4）性别因素的影响；（5）生理状态和健康因素的影响3实验技术因素对动物模型复制的影响（1）实验季节；（2）昼夜不同时间的影响；（3）麻醉深度的影响；（4）实验给药的影响；（5）手术技巧；（6）对照组对造模的影响4环境因素和营养因素对复制模型的影响居住、温度、湿度、营养、光照、饲料、噪音、气流等13四、动物模型的分类（一）按产生原因分类实验性动物模型自发性动物模型；抗疾病型动物模型生物医学动物模型（二）按系统范围分类疾病的基本病理构成动物模型各系统疾病动物模型（三）按模型种类分类整体动物、离体器官和组织、细胞株以至数学模型（四）按中医药体系分类中医证动物模型中医药动物模型14动物模型的分类按产生原因分类1自发性动物模型（SPONTANEOUSANIMALMODEL）指实验动物未经任何人工处置，在自然条件下动物自然发生或由于基因突变的异常表现，通过遗传育种保留下来的动物模型。来源困难，种类有限，弥足珍贵2实验性动物模型（EXPERIMENTALANIMALMODEL诱发性动物模型通过物理、化学、生物以及复合的致病因素作用于动物，造成动物组织、器官或全身一定程度的损害，出现某些类似人类疾病时的功能、代谢或形态结构方面的病变，即人为地诱发动物产生类似人类疾病模型。153抗疾病型动物模型（NEGATIVEANIMALMODEL）不会发生某些特定的疾病，可以用来探讨其具备天然抵抗力的机制。东方田鼠抗血吸虫病。4生物医学动物模型（BIOMEDIALANIMALMODEL）利用健康动物生物学特征提供人类疾病相似表现的疾病模型。沙鼠脑椎底动脉环后交通枝缺损，左右大脑供血相对独立，研究中风的理想动物模型；鹿镰刀形红细胞，研究镰刀形红细胞贫血的动物模型等。16各系统疾病动物模型（ANIMALMODELOFDIFFERENTSYSTEMDISEASE）指与人类各系统疾病相应的动物模型。FOREXAMPLE各个系统或各个科一、运动系统疾病动物模型二、消化系统疾病动物模型三、呼吸系统疾病动物模型四、泌尿系统疾病动物模型五、生殖系统疾病动物模型六、循环系统疾病动物模型七、内分泌系统疾病动物模型八、感觉器疾病动物模型九、神经系统疾病动物模型十、老年病动物模型十一、血液系统疾病动物模型按系统范围分类17中医证候动物模型中医动物模型经50余年的研究，已形成独特的体系。为中医基础病理学、基础药理学研究提供了重要依据。中医脏腑辨证动物模型L心气虚证动物模型L心阳虚证动物模型L心血瘀阻证动物模型L血虚证动物模型L肝气郁结证动物模型L肝阳上亢证动物模型L脾气虚证动物模型L脾胃虚寒动物模型L肺气虚证动物模型1819第二节第二节常用的人类疾病动物模型常用的人类疾病动物模型20分三种1近交系的肿瘤疾病动物模型2突变系的遗传疾病动物模型3先天性免疫缺陷动物模型自发性疾病动物模型的评价接近自然状态下人类的疾病，应用价值高，但种类有限，来源困难，饲养条件高自发性疾病动物模型21自发性疾病动物模型一、自发性肿瘤模型实验动物未经任何有意识的人工处置，在自然情况下所发生的肿瘤。一般发生于近交系的动物。优点与人体肿瘤相似，是理想的模型，例如，小鼠乳腺癌，白血病缺点生长缓慢，不易同时获得大批病程基本一致的动物。应用多用于肿瘤发病机理等深入研究。很少用于一般药效学研究。22（一）小鼠自发性肿瘤肿瘤名称品系年龄（月）性别自发率乳腺肿瘤C3H/80100肺腺瘤A/HE18900肺细胞瘤C3H/HE14850肝癌C3H/HE/OLA14/850淋巴瘤AKR/797AKR/920垂体肿瘤C57BR/CD12330卵巢肿瘤DBA1218/555BALB/C/75823（二）大鼠自发性肿瘤1乳腺肿瘤在F344（50）、ACI（11），WISTAR大鼠、SD大鼠也自发乳腺纤维腺瘤。2睾丸肿瘤AIC为46，F344为35。3垂体肿瘤雌鼠高于雄鼠，F344雌鼠36、雄鼠24，ACI雌鼠为21、雄鼠5。4子宫肿瘤F344雌鼠发生率为21，ACI雌鼠为13。5浆细胞瘤LOU/CN大鼠为浆细胞瘤高发系，LOU/MN大鼠为浆细胞低发系。6肾上腺肿瘤ACI雄发生率为16，雌鼠为6。24二、基因突变的遗传性疾病动物模型（一）糖尿病1小鼠（1）非肥胖性糖尿病NONOBESEDIABETES,NOD）小鼠。发病小鼠中雌性占90。临床上主要表现胰腺炎症状，出生后4周开始，出现多食、多饮、多尿、消瘦、高血糖，有时饮水量高达250ML/（D只）（2）自发性糖尿病NSY（NAGOYASHIBATAYASUDU,NSY小鼠）属NIDDM模型。48周龄雄性NSY小鼠的糖尿病发生率为98，雌鼠31。NOD25（3）DB/DB小鼠DIABETESMOUSE由57BL/KSJ近亲交配株常染色体隐性遗传衍化而来,属型糖尿病模型。动物在一个月时开始贪食及发胖,继而产生高血糖、高血胰岛素,胰高血糖素也升高。一般在10个月内死亡。DB/DB小鼠与OB/OB小鼠不同,可发生明显的肾病。（4）KK糖尿病小鼠属NIDDM模型。KK小鼠由日本杂种小鼠交配得来的遗传性糖尿病小鼠，其生物特性类似OB小鼠，属先天遗传缺陷性小鼠。LKKDB/DB262大鼠（1）BBWISTAR大鼠属自发性IDDM模型。发生率达90，多于58123日龄发病。是一种典型自发遗传I型胰岛素依赖性糖尿病的动物模型。其临床表现为多饮、多食、体重下降、高血糖及酮尿。（2）GK大鼠GOTOKAKISAKIWISTARRATGK大鼠也是一种自发的型糖尿病鼠种,其病理生理特点是葡萄糖刺激的胰岛素分泌受损,细胞数目减少,肝糖生成过多,肌肉和脂肪组织中度胰岛素抵抗。273地鼠中国地鼠黑线仓鼠有50自发产生糖尿病，属多基因遗传，病鼠耐糖曲线类似人类型非胰岛素依赖性糖尿病。28二SHR大鼠1高血压目前，应用最广泛的是日本学者培育的突变系SHR大鼠。该鼠自发性高血压的变化与人类相似，并且可产生脑血栓、梗塞、出血、肾硬化、心肌梗死和纤维化等变化。在SHR的基础上，又培育了两个亚系SHRSP和SHRSR，前者出生后，除出现严重高血压外,90以上患脑卒中脑出血和脑栓塞；SHRSR则是抗脑卒的自发性高血压大鼠。2主要用途高血压疾病的实验研究29三癫痫大鼠用铃声刺激可旋转数秒钟，然后向一侧倒地发作癫痫，与人的癫痫发作很相似，可用于癫痫病的实验研究。（四）多囊肾肾病大鼠KD/KD显性遗传30五肥胖症40周龄时的体重几乎为同龄正常大鼠的2倍,雌鼠达500G,雄鼠可达800G六尿崩症大鼠表现烦渴多尿,其排尿量为正常大鼠25125倍七白内障小鼠由南京军区八一医院培育,发并率10031诱发性动物模型模型评价模型复制时间短试验条件便于控制重复性好与人类对应的疾病有一定的差异在短期内可诱导出大量的动物模型。但很多人类疾病不能诱导出来应用药物筛选、毒理、传染病、肿瘤、病理机制研究32常见疾病动物模型大鼠大脑中动脉闭塞动物模型线栓法（录像）心肌梗死动物模型L结扎冠状左前降支所致的急性心肌梗死模型（录像）L大鼠麻醉L左侧胸壁第3第4肋间开胸L结扎冠状左前降支3334动脉粥样硬化兔选用2KG左右体重，每天胆固醇03G，4个月后形成主动脉粥样硬化斑块；剂量增至05G，3个月出现斑块；增至10G，可缩为2个月。在饲料中加人15蛋黄粉、05胆固醇和5猪油，3周后，将胆固醇减去再喂3周，可使斑块发生率达100，血清胆固醇可升高至2000MG。但兔作模型不够理想，主要表现为血源性泡沫细胞增多，且病变分布与人的病变也有差异。小型猪饲喂高脂肪、胆固醇饲料诱发动脉粥样硬化病变，用12高脂食物饲喂6个月即可形成动脉粥样硬化病变。其解剖部位，病理特点均与人类相似，有时还伴有心肌梗塞，较易饲养管理，小型猪是一种很好的模型动物。35应激性胃溃疡动物模型实验前大鼠禁食24H，A鼠固定于保定板上，浸泡在10005的水中，至剑突下，约30MIN后取出，处死，同时B鼠亦处死。解剖大鼠，打开腹腔，结扎胃的幽门与贲门，取出胃。向胃内注射8ML01的甲醛，再将胃置于01的甲醛溶液中约30MIN。36急性胰腺炎动物模型L大鼠术前禁食一夜；L麻醉，在无菌操作下，上腹部切口，在近十二指肠部位，显露、分离胰管或胆总管，以MLMIN的速度，逆向加压向胰管内注入胰蛋白酶等，均可诱发急性出血坏死性胰腺炎。37慢性支气管炎和肺炎70年代初学者应用SO2、烟雾、甲醛蒸气、辣性气体等制备诱发性猴、免、大鼠、小鼠的慢性支气管炎动物模型。38诱发性肾小球肾炎模型给兔、猫、狗注射异种抗肾血清、细菌抗原与肾组织复合抗原，以及抗原抗体诱发动物肾小球肾炎模型。39糖尿病模型手术方法自从德国的WONMENING将犬作胰腺全切除术，造成糖尿病后，陆续报道猫、大鼠、兔、猪、猴等切除80一90胰腺，并受到高糖饮食刺激后，可引起胰岛素缺乏性糖尿病，引起高血糖，并伴有胰外分泌功能不全和酮症。40化学物质损伤胰岛细胞链脲佐菌素STZ一次腹腔或静脉注射30一100MGKG几天后可使狗、大鼠等动物产生永久性高血糖。四氧嘧啶A11OXAN一次静脉或腹腔注射30150MGKG，可复制糖尿病模型，但可造成肝、肾组织的损害，而且较多的资料证明，它在生理上不同于人类所患的糖尿病。41各种疾病的基因工程动物模型1肿瘤转基因小鼠的模型2传染性疾病的转基因小鼠3遗传病的基因工程小鼠模型42第三节免疫缺陷动物IMMUNODEFICIENTANIMAL43一、免疫缺陷与免疫缺陷动物1免疫缺陷病IMMUNODEFICIENCYDISEASES是指因免疫系统中任何一个环节或其组份因先天发育不全或后天因各种因素所致损害而使免疫活性细胞的发生发展、分化增殖和代谢异常并引起免疫功能不全所出现的临床综合征。442免疫缺陷大体分为两类L先天（或原发）性免疫缺陷遗传性缺陷病可以导致对病原微生物的高度易感性；L获得（或继发）性免疫缺陷可继发于营养不良、恶性肿瘤、免疫抑制药物治疗或免疫活性细胞受到病毒的感染，如HIV，是AIDS的病原体。453免疫缺陷动物的定义和分类L免疫缺陷动物（IMMUNODEFICIENTANIMAL的定义L由于先天性遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物。46SCID小鼠的AIDS模型LPBM5MULV病毒诱发的AIDS模型转基因小鼠形成的AIDS模型移植HIV感染的肿瘤细胞株形成的AIDS模型免疫缺陷动物的分类先天性免疫缺陷动物获得性免疫缺陷及其相关的AIDS动物模型T淋巴细胞缺陷裸小鼠裸大鼠B淋巴细胞缺陷性连锁免疫缺陷小鼠（CBA/N鼠）ARABIN马、QUARTER马等马属动物NK细胞功能缺陷BEIGE小鼠联合免疫缺陷T/B细胞联合免疫缺陷的SCID小鼠MOTHEATEN小鼠人工培养的联合免疫缺陷动物T/NK细胞缺陷小鼠，T/B/NK细胞三联缺陷小鼠等其它免疫缺陷动物显性半肢畸形（无脾小鼠等）小鼠的AIDS模型FELV病毒诱发的猫AIDS模型猴AIDS模型D型离转录病毒诱发的猴AIDS模型SIV病毒诱发的猴AIDS模型有蹄动物慢病毒感染模型黑猩猩的HIV感染模型474免疫缺陷动物历史19世纪50年代先后发现无毛小鼠，并知其后代也属无毛遗传；1907年CAMPBELL证实无毛性状为隐性突变；1962年苏格兰医生ISSACON等首先发现胸腺发育缺损的裸小鼠。1966年爱丁堡动物研究所FLANAGAN用全同胞BS近交（NU/NU/）繁殖后代，形成了最早的裸鼠群体。又证实是由于基因突变造成的，发现该种小鼠皮肤组织学和以往无毛小鼠不同，称为裸小鼠NUDEMICE，用“NU”表示裸基因符号。481968年PANTELOURIS首次报告无胸腺，即先天缺陷T淋巴细胞。至此受到广泛重视；1969年，丹麦人RYGAARD首次将人结肠癌移植到裸鼠获得成功；1973年起，每隔三年举行一次裸鼠国际会议。后改名为“免疫缺陷动物实验国际会议”。49二、常见的免疫缺陷动物T淋巴细胞缺陷裸小鼠、裸大鼠B淋巴细胞缺陷CBA/N鼠T、B淋巴细胞缺陷SCID小鼠、NODSCID小鼠、SCIDHU小鼠NK淋巴细胞缺陷BEIGE小鼠501裸小鼠NUDEMICE是指先天性无胸腺，且无被毛的小鼠,简称为裸小鼠。其突变基因为裸基因,符号为NU,是一个隐性突变基因,位于小鼠的第11号染色体上。目前，此基因已导入到不同品系的小鼠中,常见的有BALB/CNU、C3HNU、C57BL/6NU等。51裸鼠的生物学特点1、毛囊发育不良，外观上看几乎没有被毛，故称“裸鼠”；2、无胸腺，仅有胸腺残迹或异常的胸腺上皮。故不能分泌胸腺素，淋巴组织胸腺依赖区的淋巴细胞消失；外周血淋巴细胞减少。3、虽然有原始的T细胞，但缺乏成熟的T细胞。T细胞的辅助、抑制及杀伤功能不全。在混合淋巴细胞反应中无有丝分裂反应，对刀豆素A或植物凝集素P无促分裂原应答。4、无接触敏感性，无移植排斥，无移植物抗宿主反应。5、B细胞数量正常但功能有缺陷，合成的免疫球蛋白主要是IGM，只有极少量的IGG。6、粒细胞功能较低，成年裸鼠有较高的NK细胞数量和活性。自发肿瘤现象罕见。7、裸鼠易患鼠肝炎和病毒性肺炎。52裸鼠的生产和繁殖L纯合裸鼠母性极差，且受孕率低，乳房发育不良。L繁育生产NU/NU/NU可获1/2裸鼠。L裸鼠需饲养在屏障环境中。5353裸鼠的应用（1）肿瘤学。（2）临床医学（3）免疫学。（4）遗传学。（5）微生物学。542裸大鼠NUDERAT1953年，英国科学家首次ROWETT在大鼠中发现一种外观与裸小鼠相似，只是被毛不像裸小鼠那样全无，通过解剖和免疫学检查发现其也是无胸腺、缺乏T细胞功能，B细胞功能基本正常，NK细胞活力增强，繁殖方式与裸小鼠相同，且能接受异种组织和细胞移植。应用与裸小鼠相似，具有移植肿瘤大，取血量多，可行某些外科小手术等优点。553B细胞功能缺陷小鼠LCBA/N小鼠，其B细胞功能缺陷，性连锁免疫缺陷，基因符号XID，位于X性染色体上。L纯合子雌鼠（XID/XID）和杂合子雄鼠，XID/Y）对非胸腺依耐性II型抗原没有体液免疫反应，血清中IGM和IGG含量降低，对B细胞分裂素缺乏反应，分泌IGM和IGG亚类的B细胞数量减少，其T细胞功能正常。L性连锁免疫缺陷小鼠是研究B淋巴细胞的产生、功能和异质性理想的动物，其病理与人类BRUTON氏丙种球蛋白缺乏症相似。CBA/NJ564SCID小鼠SEVEREIMMUNODEFICIENTMICE全称为“重症联合免疫缺陷”小鼠。1983年由美国学者BOSMA首先发现于CB17小鼠，是位于第16号染色体的单个隐性突变基因所导致。突变符号为SCID，当其纯合时，性状表现为淋巴细胞抗原受体基因编码顺序异常，造成T、B淋巴细胞不能分化为特异性的淋巴细胞。由于CB17小鼠是BALB/CANICR的同源近交系，因此SCID小鼠BALB/CANICR小鼠遗传背景基本相同。目前已有多种不同品系的SCID小鼠。C3HSCID、CB17SCID57SCID小鼠的生物学特征1、外观与普通小鼠无异样2、胸腺、脾、淋巴结等免疫器官的重量不到正常小鼠的30。T、B淋巴细胞功能均缺失。3、外周白细胞较少，淋巴细胞仅占总数的1020（正常小鼠为70）。4、非淋巴性造血细胞分化不受突变基因影响，巨噬细胞、粒细胞等呈正常状态。NK细胞和LAK细胞也呈正常状态。5、容易死于感染性疾病。58SCID小鼠的渗漏（LEAKAGE）有少数（约15）的SCID小鼠出现极小程度的免疫功能恢复，这时在血清里可测出免疫球蛋白，这种现象称为渗漏（LEAKAGE）。其渗漏特征不遗传，但与小鼠年龄、品系、饲养环境有关。C3HSCID渗漏率10CB17SCID渗漏率20SCIDBG渗漏率559生产和繁殖LSCID小鼠需在屏障环境（空气洁净度1万级以下）中，方能存活一年以上。L其繁殖生产，以近交系繁殖方式进行，产仔率和离乳率均低于正常小鼠。L筛选方法选择六周左右的拟留种SCID小鼠，用毛细管眼窝采血，离心取血清，检测其免疫球蛋白,结果为负值的可作种鼠。60SCIDMOUSEWITHENGRAFTEDHUMANSKINSCID小鼠的应用1异体移植可移植组织皮肤、子宫内膜、肌肉、胎肝、胸腺等612建立移植瘤模型优点肿瘤更易发生转移（与裸鼠比）对某些瘤株而言更易移植成功（如乳腺癌）五、SCID小鼠的应用SCID小鼠的应用62MOUSEHEPATITISVIRUSINFECTIONINASCIDMOUSETHEREISEXTENSIVEHEPATICNECROSIS3微生物研究五、SCID五、SCID小鼠的应用SCID小鼠的应用63NODSCID小鼠非肥胖糖尿病严重联合免疫缺陷NONOBESEDIABETESSCIDMICE）LJAKSONLAB用非肥胖糖尿病小鼠NOD/LT与SCID小鼠杂交降低了NK细胞活性，杂交双突变小鼠NOD/LTSCID表达了NK细胞活性相对低的特性。L先天性T、B、部分NK淋巴细胞联合免疫缺陷动物，缺乏异种间的免疫排斥反应，无循环补体、巨噬细胞和抗原提呈细胞功能损害等特性。L易于接受人类正常组织、肿瘤组织及骨髓细胞等的移植，易发侵袭和转移645、NK细胞功能缺陷小鼠LBEIGE小鼠为NK细胞活性缺陷的突变系小鼠，在第13号染色体上的隐性遗传基因BG发生突变引起，纯合的小鼠（BG/BG）被毛完整。L其内源性NK细胞功能缺乏，是由于细胞溶解作用的识别过程受损伤所致。BG对化脓性细菌感染非常敏感，对各种致病因子较敏感，需SPF环境。65第四节第四节肿瘤动物模型肿瘤动物模型实验肿瘤学的创立已有近百年的历史，实验实验肿瘤学的创立已有近百年的历史，实验动物肿瘤模型在肿瘤的病因学、发病机理、实验动物肿瘤模型在肿瘤的病因学、发病机理、实验治疗和新抗癌药物的研究中发挥了重要作用。治疗和新抗癌药物的研究中发挥了重要作用。66肿瘤动物模型的分类L动物自发性肿瘤（SPONTANEOUSTUMORSINANIMALSL动物诱发性肿瘤INDUCEDTUMORSINANIMALSL动物移植性肿瘤TRANSPLANTEDTUMORSINANIMALS67肿瘤动物模型1自发性肿瘤动物模型（SPONTANEOUSTUMORSINANIMALS实验动物未经任何有意识的人工处置，在自然情况下所发生的肿瘤。一般发生于近交系的动物。如C3HA2诱发性肿瘤动物模型INDUCEDTUMORSINANIMALS使用致癌因素在实验条件下诱发动物发生的肿瘤。包括原位诱发和异位诱发如AFB1肝癌）尿脂（肺腺瘤）3移植性肿瘤动物模型TRANSPLANTEDTUMORSINANIMALS68诱发性肿瘤L可以用化学致癌剂，照射，病毒等方法。L优点瘤细胞增殖动力学与人类肿瘤较接近，是癌变瘤细胞增殖动力学与人类肿瘤较接近，是癌变机理及癌前阻断研究的理想模型。机理及癌前阻断研究的理想模型。L缺点1诱发肿瘤需时较长，动物肿瘤的发生往往先后不齐诱发肿瘤需时较长，动物肿瘤的发生往往先后不齐,生长慢，癌细胞增殖比率低，倍增时间长，常有防护问题2难于观察肿瘤的动态发生、发展，常缺乏客观测量难于观察肿瘤的动态发生、发展，常缺乏客观测量肿瘤发生、发展或退缩的指标。肿瘤发生、发展或退缩的指标。L应用多用于抗致癌作用的研究69诱发性肿瘤（化学致癌物、射线或病毒等）致癌物敏感动物诱发肿瘤二甲基苯蒽（DMBA）甲基胆蒽大鼠乳癌二乙基硝胺（DEN）、乙硫氨酸大鼠肝癌黄曲霉素AFB大鼠肝癌萘胺田鼠狗胱膀癌N甲基N硝基N亚硝基胍（MNNG）大鼠胃癌乌拉坦（氨基甲酸乙酯，CHOCONH）、氨乙胺小鼠肺癌四氯化碳、氯仿大鼠、小鼠肝癌70诱发性肿瘤L肝癌大白鼠（250G）DEN（10MG/KG）4个月025灌胃1次/周0025随水饮用1次/天大鼠黄曲霉素6个月混入饲料（1015）109G/M3小鼠OAAT01ML/MG23滴6个月01肩胛间皮肤涂布23滴/2天DEN二乙基亚硝胺，OAAT亚胺基偶氮甲苯71L胃癌小鼠（A系、昆明、615系）MBNA00278个月（前胃鳞状上皮癌）10MG/KG灌胃1次/天MBNA甲基苄基亚硝胺L肺癌小鼠DEN1868MG100天1176MG半年56MG/KG皮下注射1次/周诱发率40诱发率94DEN二乙基亚硝胺返回72移植性肿瘤的研究最早见于移植性肿瘤的研究最早见于1889年，至今已建年，至今已建立立500多个动物移植性肿瘤的瘤株，但常用的只有多个动物移植性肿瘤的瘤株，但常用的只有40余种，国内常用的有余种，国内常用的有10余种。余种。目前临床上所用的抗肿瘤药物中，大多数是经目前临床上所用的抗肿瘤药物中，大多数是经动物移植性肿瘤治疗试验而筛选出来的，所有在临动物移植性肿瘤治疗试验而筛选出来的，所有在临床上对人体肿瘤有抑制作用的物质，对动物移植性床上对人体肿瘤有抑制作用的物质，对动物移植性肿瘤均有作用，反之，在动物移植性肿瘤上得到的肿瘤均有作用，反之，在动物移植性肿瘤上得到的结果，经常做为药物临床试验的基础。结果，经常做为药物临床试验的基础。移植性肿瘤动物模型73移植性肿瘤L一定数量的癌细胞给条件基本相当的动物，同时以同一方式接种。L优点瘤体大小基本一致，个体差异小，移植成功率高。可同时获得生长均匀的肿瘤，无自发缓解。可以长期保留,试验条件易于控制L缺点生长迅速，与人体肿瘤情况不一致。L应用绝大多数抗癌药物的筛选和药效学研究74移植性肿瘤动物模型按移植对象不同分同种移植（S180、W256、H22等）肿瘤组织来源于同一品系动物本身，而且局限于该品系动物间互相移植传代才能成功，在异种动物体内则不能生长。异种移植肿瘤组织来源于人或一种小鼠，移植到另一种小鼠（裸鼠）。75移植性肿瘤动物模型按移植部位及用途不同分异位移植包括皮下、肾包膜下、肌肉、腹腔移植原位移植即将人体肿瘤细胞移植到与肿瘤原发部位相同的动物脏器内，如人的肝癌细胞移植于裸鼠的肝脏、人的胃癌细胞移植于裸鼠的胃。76皮下移植模型的建立77两种免疫缺陷动物胃原位移植模型78原位移植皮下移植转移过程完整完整临床符合性符合不符合筛选难度易难实验操作复杂简单实验观察难易长期保种难易重复性较差较好应用范围基础研究基础、应用两种移植性肿瘤模型的比较79人体肿瘤裸鼠移植瘤模型的建立方法根据移植瘤处理方式不同组织块移植法悬液移植法培养细胞移植法可分为根据移植部位及途径不同可分为皮下肌肉腹腔肾包膜原位常位移植根据瘤原不同可分为人肿瘤手术标本移植肿瘤细胞移植80（1）移植肿瘤的常规处理及移植方法组织块移植法人肿瘤手术标本或裸鼠传代移植瘤标本RPM1640培养液无菌条件下置于生长良好,无坏死,淡黄色,鱼肉状瘤组织取36MM3小块切成腋部、腹股沟、背皮下或其他需接种部位套管针接种在裸鼠腹外侧皮肤剪长约5MM小口也可眼科镊夹组织块送入切口内注尽可能在切除后1小时内接种于裸鼠81细胞计数11061107/ML取良好瘤组织细胞培养液置玻璃匀浆器悬液研磨注射皮下部位悬液移植法82培养细胞移植法取肿瘤组织经细胞培养移植于皮下组织83不同移植途径和方法原位移植腹水瘤的建立及移植方法02ML实体瘤细胞悬液裸鼠腹腔注入肿瘤生长引起腹水腹